Применение креатинфосфата для ингибирования или снижения роста опухоли и фармацевтическая композиция

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ПРИМЕНЕНИЕ КРЕАТИНФОСФАТА ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ИЛИ СНИЖЕНИЯ РОСТА ОПУХОЛИ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ(57) 1. Применение по меньшей мере одного соединения, выбранного из креатинфосфата и его фармацевтически приемлемых солей, для ингибирования или снижения роста опухоли у млекопитающих. 2. Применение по п. 1, в котором фармацевтически приемлемой солью является натриевая соль. 3. Применение по п. 1 или 2 для ингибирования или снижения роста опухоли, представленной злокачественной меланомой или раковой опухолью ободочной кишки, или мелкоклеточной раковой опухолью легкого, или раковой опухолью поджелудочной железы. 4. Фармацевтическая композиция для ингибирования или снижения роста опухоли у млекопитающих, содержащая активное вещество и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из креатинфосфата и его фармацевтически приемлемых солей, в эффективном количестве. 5. Композиция по п. 4, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемой солью является натриевая соль. 6. Композиция по любому из пп. 4-5, отличающаяся тем, что выполнена в виде дозы для одноразового приема. 7. Композиция по п. 6, отличающаяся тем, что одноразовая доза содержит от 0,1 до 50,0 г активного вещества. 8. Композиция по любому из пп. 4-7, отличающаяся тем, что выполнена в виде инъекционной формы.(56)222257 2, 1987.199117 2, 1986.83/02391 1, 1983.239357 2, 1987.4769318 , 1988. Гарин А.М., Хлебнов А.В. Справочник практической химиотерапии опухолей. - М., 1995. - С. 272-289. Настоящее изобретение относится к применению соединений, имеющих фосфамидную связь или фосфатную связь энола, для получения фармацевтических препаратов, предназначенных для лечения опухолей. В настоящем описании под соединением, имеющим фосфамидную связь, подразумевается любое соединение, химическая структура которого содержит группу Предпочтительным примером такого соединения является креатинфосфат (называется также фосфатом креатина), широко распространенное вещество в организме позвоночных животных. Он присутствует, в частности, в поперечно-полосатых мышцах, но отсутствует в крови и внеклеточной жидкости. Другим примером такого соединения является фосфоаргин, который найден в мышцах беспозвоночных животных. Подобным образом под соединением, имеющим фосфатную связь энола, подразумевается любое соединение, химическая структура которого содержит группу Предпочтительным примером таких соединений является фосфоенолпировиноградная кислота, которая является промежуточным эндогенным метаболитом, вовлеченным в гликолиз, и которая поэтому в физиологических условиях локализована в клетках и отсутствует в крови. Фосфамидная связь или фосфатная связь энола указанных выше соединений относится к семейству так называемых обогащенных энергий связей. Документы ЕР-А-0 199 117 и ЕР-А-0 222 257 описывают в общих выражениях применение креатинфосфата и его натриевой соли в кристаллической форме для лечения заболеваний сердца, в частности инфаркта миокарда. В документе 83/02391 описаны в общих выражениях фармацевтические препараты, содержащие соль фосфоенолпировиноградной кислоты в смеси с аденозинтрифосфорной кислотой (АТФ). Эти препараты предназначены для лечения и профилактики повреждения, вызванного ишемией клеток. Документ -4 769 318 относится к растворам, содержащим различные производные фосфоенолпировиноградной кислоты. Эти растворы предназначены для консервирования крови. Наконец, в документе ЕР-А-239-357 описано применение мононатриевой соли фосфоенолпировиноградной кислоты для лечения заболевания сердца и почек, связанного с ишемией. Было обнаружено, и это является основой настоящего изобретения, что соединения, имеющие фосфоамидную связь или фосфатную связь энола, обладают ценными, неизвестными фармакологическими свойствами, в частности заметно проявляемой противоопухолевой активностью. Объектом изобретения является применение по меньшей мере одного соединения, выбранного из креатинфосфата и его фармацевтически приемлемых солей, для ингибирования или снижения роста опухоли у млекопитающих. Предпочтительно фармацевтически приемлемой солью является натриевая соль. В предпочтительном варианте предлагается применение по меньшей мере одного соединения, выбранного из креатинфосфата и его фармацевтически приемлемых солей, для ингибирования или снижения роста опухоли, представленной злокачественной меланомой или раковой опухолью ободочной кишки, или мелкоклеточной раковой опухолью легкого, или раковой опухолью поджелудочной железы. Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция для ингибирования или снижения роста опухоли у млекопитающих, содержащая активное вещество и фармацевтически приемлемый носитель,в качестве активного вещества она содержит по меньшей мере одно соединение, выбранное из креатинфосфата и его фармацевтически приемлемых солей, в эффективном количестве. Предпочтительно фармацевтически приемлемой солью является натриевая соль. В предпочтительном варианте композиция выполнена в виде дозы для одноразового приема, содержащей от 0,1 до 50,0 г активного вещества и выполненной в виде инъекционной формы. Фармацевтические препараты, полученные в соответствии с настоящим изобретением, особенно пригодны для лечения свежих опухолей или опухолей, которые оказались устойчивыми к химиотерапии, например аденокарцином (ободочной кишки, поджелудочной железы, желудка, бронхов, почек, молочной железы,матки, яичников) эпидермоидных карцином (верхнего дыхательного - пищеварительного тракта, бронхов,мочевых путей, заднего прохода, кожи) злокачественной меланомы саркомы мягких тканей лейкемии лимфом и множественной миеломы. Эти фармацевтические препараты будут приготовлять обычными способами и вводить внутривенно, в форме пилюли или препарата для прерывистой или непрерывной перфузии, внутриартериально, внутрибрюшинно или внутримышечно в дозах от 50 мг до 5 г/кг тела на 24 ч. 2 4184 1 В одном предпочтительном примере осуществления изобретения активный компонент разбавлен наполнителем, совместимым со способом введения препарата. Применяют хорошо известные наполнители, примерами которых являются маннит сорбит фосфатный буфер, содержащий безводный вторичный кислый фосфат натрия/первичный кислый фосфат натрия цитратный буфер, содержащий цитрат натрия/лимонную кислоту лактатный буфер, содержащий лактат натрия/ молочную кислоту хлористый натрий. В нашем предпочтительном примере осуществления изобретения активный компонент можно разбавить реконструирующим растворителем, совместимым со способом введения препарата. Применяют хорошо известные реконструирующие растворители, примерами которых являются вода для инъецируемых препаратов 0,9 раствор 5-15 раствор глюкозы 10-30 раствор маннита 20-30 раствор сорбита раствор тринатриевой соли лимонной кислоты. Фармакологические свойства соединений, имеющих фосфамидную связь или фосфатную связь энола,были показаны проведением различных исследований для оценки действия креатинфосфата на различные опухолевые клетки. Действие это неоспоримо обусловлено присутствием фосфамидной связи в его молекуле. Дополнительные опыты с фосфоноенолпировиноградной кислотой показывают, что аналогичные фармакологические свойства можно достичь при применении соединений, имеющих фосфатную связь энола. Экспериментальные протоколы и результаты, позволившие показать фармакологические свойства соединений, имеющих фосфамидную связь или фосфатную связь энола, приведены ниже. 1. Способ. 1.1. Принцип изобретения. Образование опухолей у голой мыши вызывали подкожным инокулированием раковых клеток. Через неделю после инокулирования внутрибрюшной инъекцией вводили креатинфосфат, обозначенный далее как-999-247, или . В процессе лечения животных взвешивали, и размер опухоли измеряли каждую неделю. 1.2. Методика. 1.2.1. Развитие рака человека у голых мышей. Четырехнедельных голых мышей штаммавыращивали в изоляторе (стерильная среда) под давлением. Линии раковых клеток человека, а именно Сасо 2 (ободочной кишки), -5 (меланомы), Сара-1(поджелудочной железы) и -69 (мелкоклеточного рака легких), культивировали в различных средах,содержащих 10-20 сыворотки плода теленка и 1 неосновных аминокислот. 5106 (-5), 9106 (Сасо 2), 2105 (Сара-1) и 2,3106 (-69) клеток в забуференном фосфатном физиологическом растворе инокулировали в правый бок каждой мыши. Операцию проводили в камере в стерильных условиях. Каждую неделю после инокулирования животных взвешивали и измеряли у них опухоль штангенциркулем. Объем опухоли (полуэллипсоидной) подсчитывали при помощи следующей формулы (..,, Анализ кривых роста опухолей, , 1968. 40,368-408,.,., Ингибирование роста ксенотрасплантантантов рака ободочной кишки человека НТ-29 в голых мышах лечением антагонистом пептида, высвобождающего бомбезин/гастрин (-3095).., 1991, 51, 6006-6009) ширинадлинавысотаОбъем опухоли. 6 1.2.2. Изучение влияния 999-247 на рост опухоли. Лечение начинают через 7 дней после инокулирования путем внутрибрюшинной инъекции 999-247(группа, подвергнутая лечению) или изотонического раствора (контрольная группа). Каждая группа содержит 10-15 мышей. Животных, индивидуально индентифицированных татуировкой на спине, разделяют по макролоновым камерам. Продолжительность лечения зависит от цели лечения для каждой изучаемой серии. После окончания лечения опухоли удаляют и закрепляют в фиксаторедля патологоанатомического анализа. 3 4184 1 1.2.3. Схема введения. Изучаемый продукт применяют в 0,9 -ном растворе . Его стерилизуют при помощи 0,2 мкм фильтра. Раствор вводят внутрибрюшинно в количестве 1 мл на мышь. Контрольным животным вводят 1 мл 0,9 -ного раствора хлористого натрия. Схема дозирования предусматривает инъецирование 0,04 ммоля, 0,1 ммоля, 0,2 ммоля и 0,4 ммоля 999-247 каждой мыши. Эти дозы выбраны соответственно максимальной дозе, которую можно вводить внутрибрюшинно, и соответственно концентрации плазмы, определенной заранее в фармакокинетических исследованиях. 1.2.4. Выражение результатов. Из полученных измерением отдельных величин рассчитаны следующие параметры масса тела в г (среднее значениестандартное отклонение), измеряемая каждую неделю объем опухоли в мм 3 (среднее значениестандартное отклонение), измеряемый каждую неделю. 2. Результаты. Результаты представлены в помещенных ниже таблицах. Полученные результаты указывают на ингибирования роста опухоли после введение креатинфосфата голым мышам с различными установленными опухолями человека. Ингибирование зависит от дозы соединения. Изменение массы и поведение животных соответствовали экспериментальному периоду. Биохимические и гематологические измерения проводили на плазме и крови, отобранных после надреза животных. В описанных экспериментальных условиях креатинфосфат не вызывал летального исхода. Наблюдаемое отклонение относится к группе животных, которым ввели самые высокие дозы, вызывающие умеренное повышение содержания трансаминазы и натрия и понижение содержания щелочных фосфатов и элементов крови. Другие изменения находятся в соответствии с колебаниями, обычно наблюдаемыми у крыс. Креатинфосфат проявляет прекрасную биологическую толерантность при дозах до 2400 мг/кг, введенных внутривенно. Подобным образом фосфоенолпировиноградная кислота имеет хорошую биологическую толерантность при введении крысам в дозах до 50 мг/кг и не индуцирует летальный исход. Некоторые примеры фармацевтических препаратов на основе соединения, имеющего фосфамидную связь или фосфатную связь энола, будут приведены ниже. Креатинфосфат может быть в виде готового к применению стерильного раствора или в виде стерильного порошка или лиофилизатора. В этом случае можно применять наполнитель без фармакологической активности. В качестве наполнителя применяют лактозу, маннит, фосфатный буфер, содержащий безводный первичный кислый фосфат натрия/вторичный кислый фосфат натрия, цитратный буфер, содержащий цитрат натрия/лимонную кислоту, молочный буфер, содержащий лактат натрия/молочную кислоту, хлористый натрий или смесь этих наполнителей в любых пропорциях. Наполнитель применяют хорошо известным способом. В качестве реконструирующего растворителя используют либо инъекционные растворители для обычного применения (0,9 раствор , 5 или 15 раствор глюкозы, 20-30 раствор сорбита, раствор тринатриевой соли лимонной кислоты или инъецируемый препарат), или любой другой обычно применяемый растворитель для перфузии. Фармацевтический препарат рекомендуется применять в виде стерильного лиофилизатора, содержащего 25 г креатинфосфата, реконструированного 100 мл 0,9 раствора хлористого натрия. Пример 1. цитратный буфер рН 7 лимонная кислота 0,03292 О 42 Н 2 О 0,253 глюкоза 5 вода для инъецируемого препарата 100 . Если применяют лиофилизат, то для инъецируемых препаратов растворителем служит вода. Пример 2. фосфатный буфер рН 7,2 2 О 42 Н 2 О 0,7582 О 4 0,184 0,44 вода для инъецируемого препарата 100 . Пример 3. маннит 5 вода для инъецируемых препаратов 100 . Если применяют лиофилизат, то растворителем для инъецируемых препаратов служит вода. 4 4184 1 Пример 4. глюкоза 5 вода для инъецируемых препаратов 100 . Если применяют лиофилизат, то раствортелем для инъецируемых препаратов служит вода. Пример 5. КН 2 РО 4 0,1782 О 42 Н 2 О 0,953 глюкоза 2 вода для инъецируемых препаратов 100 . Если применяют лиофилизат, то растворителем для инъецируемых препаратов служит вода. Изучение влияния 999-247 на рост меланомы (-5) у голых мышей Изучение действия дозы 0,4 ммоля на мышей. Объем опухоли (в мм 3). Недели 1 2 3 4 5 6 7 Группа Контрольные животные 59,13,1 656,50 9714 12814 182,825,9 209,128,4 264,141 Животные, подвергну 554,4 378 387 4911 50,713,2 64,316,2 86,319 тые лечению 6 10. Масса тела (г). Недели 1 2 Группа Контрольные живот 20,90,8 20,80,65 ные Животные, подвергну 20,60,5 20,40,5 тые лечению 6 10. 4184 1 Влияние 999-247 на рост меланомы человека (-5) у голых мышей Изучение влияния дозы. Объем опухоли (мм 3). Неделя Группа Контрольные животные Животные, подвергнутые лечению 0,04 ммоля 0,1 ммоля 0,4 ммоля Неделя Группа Контрольные животные Животные, подвергнутые лечению 0,04 ммоля 0,1 ммоля 0,4 ммоля 4184 1 Влияние 999-247 на рост меланомы человека (-5) у голых мышей Изучение влияния дозы. Масса тела (г). Неделя Группа Контрольные животные Животные, подвергнутые лечению 0,04 ммоля 0,1 ммоля 0,4 ммоля Изучение влияния 999-247 на рост раковой опухоли ободочной кишки (Сасо 2) у голых мышей Изучение влияния дозы. Объем дозы (в мм 3). Неделя Группа Контрольные животные Животные, 0,04 ммоля подвергну- 0,1 ммоля тые лече 0,2 ммоля нию 0,4 ммоля 8 10. Изучение влияния 999-247 на рост раковой опухоли ободочной кишки (Сасо 2) у голых мышей Изучение влияния дозы. Масса тела (г). Неделя Группа Контрольные животные Животные, 0,04 ммоля подвергну- 0,1 ммоля тые лече 0,2 ммоля нию 0,4 ммоля 8 10. 4184 1 Изучение влияния 999-247 на рост мелкоклеточной раковой опухоли легких (1-69) у голыхмышей Изучение влияния дозы 0,4 ммоля на мышей. Масса тела (г). Неделя 1 Группа Контрольные животные 19,30,5 Животные, подвергнутые 17,70,2 лечению 13 15. Объем опухоли (мм 3). Неделя Группа Контрольные животные 1 Животные, подвергнутые 15 лечению 1 6. Влияния 999-247 на рост раковой опухоли поджелудочной железы (Сара-1) у голых мышей Изучение влияния дозы 0,04 ммоля на мышей. Масса тела (г). Неделя 1 Группа Контрольные животные 18,80,4 Животные, подвергнутые 17,90,3 лечению 11 16. Объем опухоли (мм 3). Неделя 1 Группа Контрольные животные 173 Животные, подвергнутые 181 лечению 8 15. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 8