Способ диагностики эндогенной интоксикации у больных лимфогранулематозом

ГДВ ХА 1- ЗНЗЧСНИС показателя солюбилизации В области бСЛОК-ЛИПИДНЫХ контактов, ОТН.6 Д.Х А 4 - значение показателя солюбилизации в области фосфолипидного бислоя, отн.ед.Хт - ЗНЗЧСНИС ПОКЗЗЗТСЛЯ ВРСМСНИ КОрр 6 ЛЯЦИИ вращательной ДИффуЗИИ СПИН-МСТКИ, НСХЮ - ЗНЗЧСНИС показателя частоты вращения СПИН-МСТКИ В области бСЛОК-ЛИПИДНЫХХО 1- ЗНЗЧСНИС показателя частоты вращения СПИН-МСТКИ В области фОСфОЛИПИДНОГО.1 бислоя, сек ,и при получении 2 О диагностируют повышенный уровень эндогенной интоксикации.Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для оценки степени тяжести эндотоксемии при скрытых, клинически неманифестирующих симптомах метаболических нарушений у больных лимфогранулематозом с целью их своевременного выявления и адекватного корригирующего лечения.Наиболее близким к предлагаемому изобретению по технологическому выполнению и диагностической значимости является метод электронной парамагнитно-резонансной спектроскопии (ЭПР) для диагностики инсулинзависимого сахарного диабета у детей с использованием бензокарболинового спинового зонда, иммобилизованного в мембраны эритроцитов, предполагающий определение соотношения интенсивности связанного (величина а) с белками мембраны зонда и интенсивности свободно диффундирующего (несвязанного, величина в) спинового зонда. Чем больше абсолютное значение отношения а/в, тем большее количество молекул зонда сорбировано на поверхности мембраны вследствие увеличения мест его связывания с белками 1.Данный способ принят нами за прототип.Однако способ, включающий измерение интенсивности связанного и свободно диффундирующего спинового зонда, используемый в настоящее время, имеет следующие недостатки1. Включает определение из спектров ЭПР одного параметра (а/в), что не является достаточным для диагностических целей и снижает разрешающую способность данного метода в диагностике и мониторинге терапии заболеваний различных нозологических форм.2. Не установлена диагностическая чувствительность и эффективность определения показателя как самостоятельного теста для оценки состояния больных и необходимости проведения адекватной корригирующей терапии.3. Использование данного теста предполагает выполнение дополнительных видов обследования, что ограничивает его использование в клинике и повышает стоимость проведения исследований за счет приобретения необходимых реагентов.Задача. Разработать экспрессный высокочувствительный микрометод на основе использования электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) для диагностики синдрома эндогенной интоксикации и оценки степени ее тяжести у больных лимфогранулематозом.Решение поставленной задачи достигается тем, что определяют из спектров ЭПР спин-меченых мембран эритроцитов больных лимфогранулематозом комплекс таких биофизических показателей, как параметр солюбилизации в области белок-липидных контактов (А 1), параметр солюбилизации в области фосфолипидного бислоя (А 4), время корреляции 11, частота вращения спин-метки в области белок-липидных контактов (Вы) и в области фосфолипидного бислоя (111).Способ осуществляется следующим образом.В планшет для иммунологических исследований вносят 50 мкл суспензии эритроцитов, прибавляют 5 мкл спинового зонда 12-доксилстеариновой кислоты (12-ДСК, концен 2трация зонда 102 М), содержимое ячейки планшета тщательно перемешивают, набирают в кварцевый капилляр И помещают в резонатор ЭПР-спектрометра. Регистрируют спектр ЭПР спин-меченых мембран эритроцитов в автоматическом режиме при центре развертки магнитного поля 3400 Гс, амплитуде развертки - 120 Гс, амплитуде модуляции - 700 мГс,температуре образца в резонаторе - 37 С, времени регистрации - 3-5 мин. Расчет биофизических параметров спектров ЭПР спин-меченых мембран эритроцитов осуществляется математической программой, введенной в систему обсчета, в автоматическом режиме на ЭВМ (фигура).Параметр солюбилизации в области белок-липидных контактов А 1 вычисляют из спектра ЭПР по отношению 111где 111 - суперпозиция сигнала ЭПР спинового зонда 12-ДСК, находящегося в области белок-липиднь 1 х контактов мембраны112 - суперпозиция сигнала ЭПР спинового зонда 12-ДСК, находящегося в водной фазе низкополевой компоненты в свободном (несвязанном) состоянии.Параметр солюбилизации в области фосфолипидного бислоя А 4 рассчитывают из соотношенияЬ 112 где 113 - половина суперпозиции 110 компоненты сигнала ЭПР спинового зонда 12-ДСК,расположенного в центральной части спектра. Показатель времени корреляции 11 в области высоких полей определяют по формулегде 0,65 - величина постоянная АН 0 - Ширина центральной спектральной линии спектра ЭПР 110 - суперпозиция центральной компоненты спектра ЭПР 114 - суперпозиция компоненты спектра ЭПР в области высоких полей.Параметр частоты вращения спин-метки 0,1 в области белок-липидных контактов вь 1 числяют согласно формулегде 2-108 - величина постоянная 110 - суперпозиция центральной компоненты спектра ЭПР 112 - суперпозиция компоненты спектра ЭПР в области низких полей.Показатель частоты вращения радикала 0,1 в области фосфолипидного бислоя рассчитывают по формуле110, 112, 114 - суперпозиции центральной, низкополевой и высокополевой компонент спектра ЭГТР.Полученные биофизические параметры спектра ЭПР подставляют в формулу для расчета линейной дискриминантной функции2 57,9747-ХА 1 23,5851-ХА 4 -0,1239.х 5,86 О 8-Х 1 О,7267-Х 1 13,19336 0, где 2 - линейная дискриминантная функция Хд - значение исследуемого биофизического параметра, рассчитанного из спектра ЭПР.Таблица 1 Коэффициенты дискриминантной функции определенных биофизических показателейУ обследуемого больного лимфогранулематозом диагностируется повышенный уровень эндогенной интоксикации и необходимость проведения корригирующей дезинтоксикационной терапии до начала всех видов лечения, если 2 О.Определение такого сочетания биофизических параметров по данным спектра ЭПР позволяет определить клинически неманифестирующий синдром эндогенной интоксикации у больных лимфогранулематозом с диагностической чувствительностью (ДЧ) 88 ,диагностической специфичностью (ДС) - 75 и диагностической эффективностью (ДЭ) 81 .Основные отличительные признаки предлагаемого изобретения1. Диагностика синдрома эндогенной интоксикации проводится экспрессным 111 что методом по минимальному сочетанию биофизических показателей, рассчитанных по одному спектру ЭПР в автоматическом режиме с высокой диагностической чувствительностью и эффективностью, что удовлетворяет требованиям, предъявляемым к диагностическим тестам.2. Способ позволяет выявлять клинически неманифестирующий синдром эндогенной интоксикации у больных лимфогранулематозом, что способствует своевременному назначению корригирующей дезинтоксикационной терапии и позволяет предупредить развитие тяжелых посттерапевтических осложнении.3. Использование предлагаемого способа исключает необходимость проведения дополнительных методов обследования больных лимфогранулематозом для оценки степени тяжести эндотоксикоза и мониторинга метаболической дезинтоксикационной терапии, что сокращает сроки пребывания больных в стационаре и экономит средства, необходимые для приобретения других биохимических реагентов.4. Отсутствие травматичности, побочных реакций у больных и использование минимальных объемов крови при выполнении исследований позволяют применять метод при лечении больных в критическом состоянии, а также в условиях поликлиники в тех случаях, когда существует необходимость проведения дезинтоксикационной метаболической терапии до начала специального противоопухолевого лечения.Способ иллюстрируется следующими примерами.При рентгенологическом, эндоскопическом и клиническом обследовании больного установлен диагноз лимфогранулематоз с поражением всех групп лимфатических узлов средостения и корня правого легкого, стадия П В, клиническая группа - П.При гистологическом исследовании лимфоузлов Не 89328-32/ОО получено заключение лимфогранулематоз клеточная фаза, вариант нодулярного склероза.Проведено исследование биофизических параметров спектра ЭПР спин-меченых мембран эритроцитовПроизвели расчет линейной дискриминантной функции исходя из полученных значе НИИ 2Значение линейной дискриминантной функции 20, у больного диагностируется повышенный уровень эндогенной интоксикации.Общеклинические и гематологические симптомы интоксикации, установленные у данного больного при дополнительном обследовании общая слабость, лихорадка до 39 С,общее количество лейкоцитов - 9,7-1 О 9/л, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) - 59 мм/ч.Согласно проведенным исследованиям, у данного больного диагностирован лимфогранулематоз, стадия 11 (В-форма с синдромом эндогенной интоксикации).При рентгенологическом, эндоскопическом и клиническом обследовании больной установлен диагноз лимфогранулематоз, стадия 11 БЕ, клиническая группа - П.При гистологическом исследовании лимфатических узлов Не 992/99 получено заключение - лимфогранулематоз, вариант нодулярного склероза.При исследовании биофизических показателей спектра ЭПР спин-меченых мембран эритроцитовПри вычислении значения линейной дискриминантной функции полученоВеличина линейной дискриминантной функции 20, у обследуемой больной диагностируется повышенный уровень эндогенной интоксикации.При общем клиническом обследовании пациентки установлено повышение температурь 1 тела до 39 С, ночная потливость, зуд кожи, общее количество лейкоцитов в крови 17-1 О 9/л, содержание тромбоцитов - 416-1 О 9/л, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) - 49 мм/ч.При эндоскопическом, клиническом, рентгенологическом обследовании пациента вь 1 явлен лимфогранулематоз с поражением лимфатических узлов средостения, легкого, перикарда, стадия 11 А, клиническая группа - П. Гистологическое заключение Не 81717725/00 - лимфогранулематоз, вариант нодулярного склероза.Проведено ЭПР-спектроскопическое исследование биофизических параметров спинмечень 1 х мембран эритроцитовПри расчете линейной дискриминантной функции получено значение 2 0, у данного больного не выявлено повышенного уровня эндогенной интоксикации.При общем клиническом и гематологическом обследовании пациента не отмечено повышения температуры тела, снижения массы тела, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) 2 мм/ч, количество тромбоцитов - 178-109/л, общее количество лейкоцитов - 10-1 О 9/л.Диагноз - лимфогранулематоз, стадия 11 (А-форма без симптомов эндогенной интоксикации).