Способ лечения хронического воспалительного заболевания кожи или слизистой, вызванного Candida spp.

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ КОЖИ ИЛИ СЛИЗИСТОЙ,ВЫЗВАННОГО.(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Волосач Ольга Станиславовна Позняк Станислав Брониславович Цыркунов Владимир Максимович Дешко Михаил Сергеевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) Аутовакцинотерапия хронических воспалительных заболеваний половых органов женщин Инструкция по применению. - Гродно, 2003. - С. 6-9.2002134181 , 2004.2002129510 , 2004.2004126686 , 2005.(57) Способ лечения хронического воспалительного заболевания кожи или слизистой, вызванного., включающий внутрикожно-подкожное введение аутовакцины, отличающийся тем, что аутовакцину вводят в нарастающей дозировке от 0,1 до 1-1,5 мл с интервалом между введениями 72-96 часов, при этом дополнительно очаг воспаления обрабатывают каждые 6-8 часов смесью, содержащей 0,05 формальдегида и 0,025 глутарового альдегида. Изобретение относится к области медицины, а именно к способам лечения хронических воспалительных заболеваний кожи и слизистых, вызванных микробными ассоциациями, в том числе условно-патогенной флорой, как например., и может применяться в дерматологии, гинекологии, оториноларингологии, офтальмологии. Описаны различные способы преодоления полихимиорезистентности микроорганизмов и их элиминации. Так, в литературе указываются фиксированные сочетания подобранных специальным образом антифунгальных препаратов, например флуконазола,итраконазола, тербинафина и т.д.Заявка РФ 97120975/14, 2000. Недостатками вышеперечисленных комбинаций при очевидно высокой их эффективности являются сохранение возможности развития устойчивости к данным препаратам,односторонний подход, обеспечивающий воздействие только на грибковую флору и требующий введения дополнительных антибактериальных препаратов при явлении микстинфекции, еще более усугубляющих состояние дисбиоза, отсутствие влияния на иммунореактивность организма, а также фармакоэкономические аспекты. При этом используются противогрибковые препараты как местного, так и системного действия. Возможно воздействие на устойчивую грибковую флору методом вакцинотерапии Заявка РФ 99108989/14, 2001 Патент США 5858378, 1999. Однако недостатком является 13578 1 2010.08.30 то, что она включает антигенный материал ряда грибов ( ,,,и др.). Недостатком способа является то, что при этом не учитывается индивидуальный этиологический спектр микроорганизмов у каждого конкретного больного, соответственно,имеющие лимитированные точки приложения. Для местного лечения хронических воспалительных заболеваний, ассоциированных с., применяются средства, обладающие противомикробной активностью. Среди антисептиков особое положение занимают растворы альдегидов. В антисептических целях применяют водный раствор формальдегида (ФА) - формалин в виде 0,5-1 растворов, мазей, аэрозолей для антисептической обработки кожи лизоформ как антисептик для обработки рук (1-3 растворы) и для спринцеваний (1-4 растворы) при заболеваниях гениталий Красильников А.П. Справочник по антисептике. - Минск Вышэйшая школа. 1995. - С. 91, 124. Комбинации глутарового альдегида (ГА) с другими веществами бензизотиазолином, изотиазолином 2000273006, 2000273007, 2000, хлорогексидином глюконатом 4959220, 1990 и др. используют в качестве антисептиков. Недостатком этих препаратов является то, что ФА и ГА в высоких концентрациях (от 0,25 до 4 ) обладают резким запахом, оказывают выраженное раздражающее действие на кожу, слизистые, дыхательные пути, возможна сенсибилизация при контакте с кожей,токсичны и т.п. Наиболее близким к заявленному является способ лечения хронических воспалительных заболеваний внутренних половых органов женщин, заключающийся в применении метилурацила в качестве иммуномодулятора и внутрикожно-подкожном введении полиаутовакцины, состоящей из равных объемов аутовакцин,и. Рекомендуемая схема введения следующая 1-я инъекция - 0,1 мл внутрикожно в среднюю треть предплечья 2-я инъекция - 0,2 мл внутрикожно другой руки 3-я инъекция - 0,3 мл внутрикожно в среднюю треть предплечья по 0,15 мл в 2-е точки 4-я инъекция - 0,4 мл внутрикожно в среднюю треть предплечья по 0,2 мл в 2-е точки 5-я инъекция - 0,5 мл подкожно в плечо 6-я инъекция - 0,7 мл подкожно в плечо 7-я инъекция - 0,9 мл подкожно в плечо 8-я инъекция - 1,1 мл подкожно в плечо 9-я инъекция - 1,3 мл подкожно в плечо 10-я инъекция - 1,5 мл подкожно в плечо. Недостатком способа является травматичность из-за большого количества инъекций и недостаточная эффективность в связи с отсутствием дополнительного местного лечения. Задачей изобретения является повышение эффективности лечения хронических воспалительных заболеваний, ассоциированных с. и резистентных к стандартным схемам, с одновременным уменьшением травматичности лечения. Поставленная задача решается путем внутрикожно-подкожного введения аутовакцины, при этом отличительным моментом является то, что аутовакцину вводят в нарастающей дозировке от 0,1 до 1-1,5 мл с интервалом между введениями 72-96 ч, при этом дополнительно очаг воспаления обрабатывают каждые 6-8 ч смесью, содержащей 0,05 формальдегида и 0,025 глутарового альдегида. Низкие концентрации смеси растворов ФА и ГА не обладают раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки, дыхательные пути, не токсичны, аллергических реакций при их применении не отмечено, не обладают резким запахом, присущим высоким концентрациям альдегидов, могут длительно храниться (до года), не теряя при этом бактерицидных свойств, просты в приготовлении, при работе с готовыми растворами не нуждаются в особых условиях, для приготовления рабочих растворов требуют ничтожно малых количеств, что создает значительный экономический эффект. Предлагаемая ком 2 13578 1 2010.08.30 бинация растворов низкой концентрации ФА и ГА основывается на том, что, при недостаточной активности по отдельности, в комбинации их эффект не просто суммируется, а потенцируется, таким образом достигаются значимые бактериостатические качества и нивелируются вышеперечисленные недостатки растворов высокой концентрации. Способ осуществляют следующим образом. Больным вводят аутовакцину комбинированным внутрикожно-подкожным способом 8-10 раз в возрастающих дозах от 0,1 до 11,5 мл с интервалом в 72-96 ч в зависимости от выраженности местной и общей реакции. Папула на месте инъекции до 1,5 см в диаметре с гиперемией вокруг последней до 5 см является показанием для введения следующей дозы через 72 ч. Более выраженная реакция, а также присоединение общих симптомов (повышение температуры тела, головная боль, чувство ломоты в суставах и др.) являются показанием для использования прежней дозы или введения последующей через 96 ч или даже реже. Перед введением аутовакцину тщательно встряхивают и вводят внутрикожно от 0,1 до 0,2 мл в среднюю треть ладонной поверхности предплечья по типу реакции Манту или в кожу внутренней поверхности бедер, а последующие инъекции производят подкожно в плечо (можно вводить и в подлопаточную область). Введение вакцины чередуют то в правую, то в левую руку или бедро. Рекомендуемая схема введения аутовакцины 1-я инъекция - 0,1 мл внутрикожно в среднюю треть предплечья 2-я инъекция - 0,2 мл внутрикожно в среднюю треть предплечья другой руки 3-я инъекция - 0,3 мл подкожно в плечо 4-я инъекция - 0,4 мл подкожно в плечо 5-я инъекция - 0,6 мл подкожно в плечо 6-я инъекция - 0,8 мл подкожно в плечо 7-я инъекция - 1,0 мл подкожно в плечо 8-я инъекция - 1,2 мл подкожно в плечо 9-я инъекция - 1,4-1,5 мл подкожно в плечо. При проведении аутовакцинации детей от 1 до 15 лет вакцинацию заканчивают на дозе 0,6 или 0,8-1,0 мл (в зависимости от возраста). Аутовакцинотерапия является строго индивидуальным лечением, при котором опыт и знания врача являются решающими для успешной терапии. Курс лечения составляет 20-30 дней. Параллельно курсу аутовакцинотерапии осуществляют обработку очага воспаления раствором альдегидов низкой концентрации каждые 6-8 ч. Приводим доказательства возможности осуществления способа. С этой целью на базе УЗ ГОИКБ обследовано и пролечено 23 больных с хроническими воспалительными заболеваниями кожи и слизистых, 9 мужчин, 14 женщин, средний возраст 28,22,4 года, с локализацией процесса на коже, ротовой полости, верхних дыхательных путях, наружных половых органах, конъюнктиве. Обследование включало общеклиническое, бактериологическое и иммунологическое исследование (клеточный иммунитет). Забор патологического материала осуществлялся с помощью стерильного тампона утром натощак на этапе обострения. Помещали в пробирку с 1 стерильным сахарным бульоном (среда обогащения), а после инкубации в термостате при 37 С в течение 18-24 ч производили высев на пластинчатые среды для определения спектра микроорганизмов и их видовой принадлежности желточно-солевой и кровяной агар, среду Эндо, Сабуро. Идентификацию микроорганизмов проводили по общепринятым бактериологическим методикам. Аутовакцина готовилась из биомассы микроорганизмов, выделенных у больных, на бактерицидной жидкости (БЖ) в модификации С.Б. Позняка, М.В. Кажиной (1980). БЖ представляла собой смесь 250 мл стерильного 0,9 раствора хлорида натрия и 35 мл рыбьего жира (трескового). Смесь наливается в колбу емкостью 0,5 л, выдерживается в термостате при 37 С в течение 6 недель и каждые 3 дня тщательно перемешивается. Затем жидкость фильтруют через стерильный обеззоленный фильтр в стерильные флаконы и используют для приготовления аутовакцины. БЖ, разлитая в стерильные флаконы, закрытая 3 13578 1 2010.08.30 резиновыми пробками или запаянная в ампулы, может храниться при комнатной температуре в течение 1 года и более и пригодна для приготовления аутовакцины. Из выделенных от больных микробных ассоциаций на 0,5 стерильном растворе новокаина готовилась взвесь густотой 1,5-1,6 млрд. микробных тел в 1 мл по оптическому стандарту и затем смешивалась с БЖ. К приготовленной взвеси (6-7 мл) добавлялось равное количество БЖ в стерильной пробирке или пенициллиновом флаконе. Густота вакцины - 700-800 млн. клеток в 1 мл. Через 1 сутки нахождения вакцины при комнатной температуре проверяли ее стерильность путем высева на соответствующие питательные среды. Время изготовления аутовакцины - 3-5 дней. Если вакцина была стерильна, ее разливали в стерильные пенициллиновые флаконы по 10 мл, запаивали и в дальнейшем применяли для вакцинотерапии. Срок годности приготовленной таким образом вакцины - 1 год, при условии хранения ее в холодильнике при температуре 4-8 С. Противогрибковая эффективность различных концентраций альдегидов и их смесей на грибы родаопределяли. Для этого на стерильном растворе 0,9 хлорида натрия готовили взвесь микроорганизмов густотой 2-3 млрд./мл микробных тел по оптическому стандарту и эту взвесь по 0,1 мл вносили в приготовленные пробирки с различными концентрациями альдегидов. Контролем служила пробирка с 1 мл 0,9 раствора хлорида натрия. Выдерживали пробирки при комнатной температуре и через 10 и 30 мин производили высевы на чашки Петри со средой Сабуро. Чашки помещали в термостат при 37 С на 48 ч, после чего производили учет результатов ( - рост есть, - - роста нет). Результаты представлены в табл. 1. Таблица 1 Противогрибковая активность ФА и ГА и их смеси на грибы родаКонцентрация альдегидов,Время,Альдегид мин 1 0,5 0,25 0,125 0,05 0,025 Контроль 10 Как видно из табл. 1, к отдельно взятым ФА и ГА чувствительность кандида невысокая чувствительны к ФА 1 и ГА 0,5 при экспозиции 10 мин, к ФА 0,5 и ГА 0,25 при экспозиции 30 мин. К смесям этих же альдегидов чувствительность возрастает в 4-8 раз так, кандида чувствительны к 0,125 раствору этих альдегидов при экспозиции 10 мин и 0,05 при экспозиции 30 мин. Эффективность способа леченияв отношении массивности роста микроорганизмов после завершенного курса представлена в табличных данных. Местные аппликации смеси растворов альдегидов осуществляли параллельно курсу аутовакцинотерапии. Таблица 2 Сравнительное исследование количества выросших колоний из патологического очага Количество выросших колоний при посеве (КОЕ/мл) Количество Среды исследований до лечения после обработки после лечения 2 1 ЖСА 23 2-410 0-210 0-2101 МПА кр. 23 3-5102 5-10101 3-8101 1 1 Эндо 23 0-2 1-310 0-110 2 1 Сабуро 23 0-5 2-410 0-210 4 13578 1 2010.08.30 Проведенные исследования показали, что при использовании комбинированного метода лечения количество выделяемых из патологического очага микроорганизмов (в том числе и.) значительно меньше. Иммуномодулирующее действие курса лечения представлено в табл. 3. Таблица 3 Результаты иммуномодуляции под влиянием аутовакцинотерапии Уровень статиДо аутовакциноте- После аутовакциноПоказатель Норма стической знарапии терапии чимостиЛейкоциты (абс.) 3,5-9,0 6,380,42 5,080,20 0,001(абс.) 0,4590,085 0,3800,046 0,05 ИРИ 1,4-2,0 1,280,08 1,640,11 0,001 Фагоцитарная ак 60-90 63,791,65 64,771,99 0,05 тивность Фагоцитарное чис 7-12 7,480,26 7,560,28 0,05 ло НСТ-тест 1,5-3,0 3,090,39 2,570,30 0,05 Статистически значимое снижение нейтрофильного лейкоцитоза, повышение 3,4, 8, 16, 19 лимфоцитов и иммунорегуляторного индекса. Получено значимое снижение лейкоцитоза с 6,40,4109 до 5,10,2109 преимущественно за счет нейтрофилов - 3,30,2109 после против 4,00,4109 до аутовакцинотерапии (0,05), при этом нормализовалась функциональная гиперреактивность нейтрофилов по результатам НСТ-теста 3,10,4 до и 2,60,3 после (0,05). Отмечен прирост общего количества лимфоцитов (3) с 28,51,5(0,520,05109) до 39,11,3(0,700,04109). Задействованы -клетки(16) с 19,72,1(0,350,04109) до 24,11,6(0,430,03109) и следующие популяции лимфоцитов Т-хелперы (4) с 20,51,2(0,380,04109) до 30,21,5(0,390,03109) (0,01). Изменения среди лимфоцитов повлекли сдвиг иммунорегуляторного индекса с 1,30,1 до 1,70,1 (0,01). Экспрессия 25 (маркер активации) составила 16,71,5(0,310,04109) до и 16,81,1(0,320,03109) после (0,05),5 13578 1 2010.08.30 что является оптимальным значением показателя, фагоцитарная активность (63,81,7 и 64,82,0) и фагоцитарное число (7,50,3 и 7,60,3) также соответствовали норме и не отличались (табл. 3). Эффективность аутовакцинотерапии оценивали на основании клинического критерия в течение года и более индивидуально хороший эффект - исчезновение симптомов заболевания (выделения из носа, заложенность носа, кашель, приступы удушья, симптомы интоксикации) и отсутствие обострений на протяжении 1 года и более улучшение уменьшение симптомов заболевания и частоты обострений, улучшение общего самочувствия отсутствие эффекта. По данным корреляционного анализа выявлена умеренная положительная связь (0,42 и 0,29 соответственно,0,05) прироста количества 4 и 25 лимфоцитов с клиническим эффектом, что характеризует их как основную точку приложения для аутовакцины. Применение заявленного способа дает хороший клинический эффект. При этом наблюдается уменьшение размеров очагов воспаления, исчезновение болей и их эквивалентов, уменьшение аллергических реакций, гнойных выделений. Основным преимуществом способа является длительная ремиссия - до 3 и более лет. По сравнению с антибиотикотерапией аутовакцинотерапия в сочетании с местным применением растворов альдегидов при хронических воспалительных заболеваниях, наряду с положительным клиническим эффектом, оказывает иммуномодулирующее действие, восстанавливая исходно сниженные показатели клеточного и гуморального иммунитета и факторов естественной резистентности организма. Аутовакцинотерапия повышает эффективность базового лечения, предупреждает рецидивы болезни или переход заболевания в более затяжную хроническую форму, как следствие, снижается количество обращений в связи с данной патологией. Последнее, наряду с технологической простотой метода и относительно низкими затратами на его реализацию, обусловливает значительный экономический эффект. Таким образом, заявляемый способ менее травматичен, так как он позволяет уменьшить количество инвазивных вмешательств, болевых раздражителей и, следовательно,снизить риск местных и общих реакций организма на вакцинацию, которые, как правило,развиваются именно при внутрикожном введении препарата. Полиаутовакцина вводится внутрикожно только 2-кратно в дозе 0,1 и 0,2 мл (в отличие от прототипа, где внутрикожное введение продолжают до 0,4 мл, причем 0,3 и 0,4 мл вводятся в две точки по 0,15 и по 0,2 мл соответственно), а далее переходим на подкожное введение аутовакцины. Кроме того, после введения 0,4 мл дозу вакцины рекомендуем увеличивать не на 0,1 мл (как в прототипе), а на 0,2 мл, так как к этому времени уже достигнут достаточный десенсибилизирующий эффект и побочных реакций у больных не отмечается, что также позволяет уменьшить количество инъекций. Учитывая, что болевой раздражитель является мощным иммуносупрессивным фактором (а в результате вакцинации мы стремимся получить иммуностимулирующий эффект), сокращение количества инъекций также немаловажно,особенно у детей. Для уменьшения побочных реакций мы предлагаем увеличить интервал между введениями вакцины до 72-96 часов (в прототипе - через 48 часов), что также уменьшает риск развития общих и местных побочных реакций на вакцинацию, без снижения эффективности аутовакцинотерапии. Кроме того, одновременное местное воздействие антисептического раствора смеси ФА и ГА в низких концентрациях также повышает эффективность лечения. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6