Штамм бифидобактерий Bifidobacterium adolescentis 91 – БИМ для получения препарата против нитратных токсикозов и диареи у молодняка сельскохозяйственных животных и птицы

(норсульфазолу, сульф адиметоксину, сульгнну,этазолу, сульфадимезшту, фталазолу). Предлагаемый штамм бифидобактерий Вййооьастепцш ааыезсепйз 91-БИМ (хранится в коллекции культур микроорганизмов Института микробиологии Акадешш наук Беларуси под Не 91-БИМ) обладает антагонизмом в отношении Е. сон, 5 тар 11. ацгепз, Рг. ушвапз,устойчив к пшроко пспользуемьш в ветеринарной практике антибиотикам канамгпдину, монет/пацану, гентамтщину, левомтщегшту, стрептомицину, полшшксину, нистатъшу, оисапиллину,неоветтшу, рифавегу, тетрациклин тетраолеанъп бицилину - 5 и сульфаниламидам норсульфазолу, сулфадиметоксину, сульггшу, этазолу, сульфадимезину, фталазолу. Штамм обладает значительной скоростью шаслотообразования сквашивает мэлоко за 12 час. Бактериальный препарат(пробиотитс), полученный с помощью предлагаемого штамма, обладает значительной сохранностью, хранится в жидком виде без снижения активности в течение 6 мес. Препарат благодаря антагонистической активности и устойчивости штамма В. аоо 1 езсеп 155 91-БИМ к антибиотикам и сульфаниламидам предупреждает и подавляет развитие патогенной микрофлоры. Бифидобактерии, обладая высокими адгезивнъшш свойствами, прикрепляясь к ворсинкам тошсого шппетшика и, повышая кислотность в приставочной области, блокируют проникновение нитратов из содержимого кншечника в кровь экивотного.Штамм Вййбоъастегйпш ас 1 о 1 езсеп 11 91-БИМ получен методом аутоселетсции на питательной среде с добавлением антибиотиков и сульфаниламидов.Полученный штамм Вййаоъастегйпш або 1 езсеп 115 91-БИМ обладает следующими морфолого-физиологическими и биокгпчпггчесштьш признаками.Клетки бифидобактерий характеризуются резко выраженным полиморфизмом, который проявляется на ранних стадиях развития. В экспоненциальной фазе преобладают короткие (0,4 - 0,5 х 8 мк) прямые или слегка изогнутые с булавовидными утолщениями на концах.средах с лактозой преобладают гранулированные палочковидные и кокковидные особи без признаков ветвления. При поверхностном выращивании на агаризованной среде колонии круглые, гладкие, с выпуклым профилем и ровньш краем, белые,блестящие, непрозрачные 1-3 мм в диаметре. В пробирках с высоким столбиком полужидкой агаризованной среды колонии имеют вид гвоздиков. Клетки не образуют спор, неподвижны, грамположительны, не образуют жгутики, фагоустойчивы. Культура анаэробная,растет при температуре 20-40 С оптимум 37-З 8 С.Штамм 91-БИМ глюкозу разлагает до уксусной и молочной кислоты, ферментирует также арабинозу, ксилозу, мальтозу, маннозу, рафинозу, лактозу и целлобиозу, вариабельно маншип, не ферментирует сорбит, штулин, салщин,сахарозу. Не образует каталазу, не разжижает желатин, редуцирует нитраты.Обладает антагонистической активностью к Е. сон серотипам 08, 086, 015, 0115, 0101,51 ар 11 у 1 ососсцз аигеиз 209 р, Рготеиз тлпдагйз 102. Устойппигв к антибиотикам канамишпту,мономицину, гентамицину, левомицетину,стрептомицину, полимиксииу, нистатину, оксациллину, кроме того к неоветину, рифавету,тетрацшслшту, тетраолеану, бшпшину - 5 и к сульфавиламидньш препаратам порсульфазолу На, сульфадтшетоксинуг, сульгшту, этазолу,сульфадштезину, фталазолу.Препарат против шттратньш токсикозов и диареи у молодняка сельскохозяйственных животных на основе В. ас 1 о 1 е 5 сепй 5 91-БИМ получают следующим образом. Сначала готовят лабораторную закваску, для этого используют питательную среду с компонентами в следующем количестве пептон - 10 г, Лактоза - 10 г, кукурузный экстракт - 50 шт, аскорбиновая кислота - 0,5 г, аммоний лимоннокислый- 2 г, натрий уксуснокислый - 5 г, магний сернокислый - 0,12 г, натрий фосфорнокислый однозамещенный - 2 г, калий фосфорнекислый двузамещештьтй - 2,5 г, натрий хлористый - 3 г, агар - 0,6-0,8 г, вода - остальное до 1 л. Начальное рН - 6,8-7, количество посевного материала 540 по объему, засеянную среду термостатируцот при 37 С в течение 14-16 час. Для подгучения препарата используют указанную ввпие питательную среду с лактозой иэкстрактом, разбавленную водой в отношении 11 кроме агара. Затем стерилизуют,охлаждают и вносят 540 полученной указанным выше методом закваски. Культивирование проводят при 37 С в течение 14-16 час, после чего проводят нейтрализацию до рН 6,84 и определяют стерильность препарата и его титр, который в конце культивирования составляет 1-5109 КОЕ/мл, а титруемая кислотность 80-90 Т.Пример 2. Сохранение ясизнеспособности клеток. Полученный описанным выше способом препарат достаточно длительное время сохраняет жизнеспособность клеток. Для проверки жизнеспособности используют жалкий препарат, которьпй хранят на среде с лактозой в холодильнике (б-8 С) или при комнатной температуре (20-22 С) (см. табл. 1).Изменение жизнеспособности бифидобактерий при хранении (КОЕ/шт)Пример 3 Чувствительность штамма 91-Б 1/Ш к антибиотикам и сульфашшашщньщ препаратам. В ветеринарной практике в случае острой формьт диареи и нитрат-пах токсикозов необходимо наряду с биопрепаратами применять лечебные препараты-антибиотики и сульфаниламиды. Для проверки чувствительности данного штамма к указанным препаратам использовали 16-ти часовую культуру, выращенную на среде с лактозой. Антибиотики и сульфаниламидные препараты в физиологической и максимальной дозах вносили в расплавленнуто и охлажденную до 60 Сразливали по пробиркам и тшокулировали в количестве 5 посевного материала. Результаты учитывали через 20, 48, 120, 168 часов культивировании при 37 С по активности роста,а также по титруемой кислотности среды при данной концентрации антибиотика. В опыт вводили антибиотики, указанные в паспорте на штамм В. асыевсепнз МС-42 и, кроме того,неоветин, рифавет, тетрациклтш, тетраолеан,бицилшт-5 и 3, окситетрациклин НС 1 в коицентрациях 10 и 20 мт/кг и сульфаниламиды- норсульфазол-Ыа, этазол На, сульфадтшезтш, сульфадиметоксин, сульгин, фталааолв концентрациях 20 и 30 Вьтявпено,что В. аасяевсепйз 91-БИМ устойчив ко всем антибиотикам, указанным в паспорте на штамм В. аао 1 евсепйв МС-42 и, кроме того, к антибио тикам, применяемьш в ветеринарной практикеНС 1, а также к сульфаниламидам, введенным в опыт как указано выше.Таким образом, предлагаемый штамм 91- БИМ устойчив к более широкому спектру антибио тиков, а шоке к сульфаниламидным препаратам, что позволяет рекомендовать его для леченияострых форм диареи и нитратных токсикозов в комплексе спрепаратами, 102 - т 6-8 С и 24 С соответствеъпто, без нейтрализацшх органических кислот 4 - т 6-8 С и 24 С соответственно, нейтрапизацияоргатшческих кислот до рН 7,0Пример 4. Полученный препарат Энтеробифилин используют новорожденным поросятам внутрь в дозе б мл/кг массы при концентрации 80-100 млн шпсробнъш тел н 1 мл два раза в сутки в течение 5 суток.Берут две группы новорожденных поросят(контрольную и подопытнуто). Поросята контрольной грушты с секретом мологшых желез(молозивом) получают 48,51,92 мг/л нитратов по нитрат-Иону. У поросят в первые дни жизни появляются клиничесше признаки токсикозов и диареи. Содержание нитрат-иона составляет в крови -.1 З,9048 ш/л, кале - 7221138 МГ/Ю и моче - 93,41,59 мг/л. Содержание нитратов определяют ионометричестсшч методом с использованием ионоселективного электрода ЭИ М-11. Жщотттые подопытной группы, получавшие перед сосанием энтеробифидгш остаются клинических здоровыми. Содержание нитратов в тотже период составляет в секрете молочных желез свиноматок 52,21,6 З мг/л, у поросят в крови 18,010,29 мг/л, в кале - 3051153 маг/ш в моче - 45,0193 ш/л нитрат-иона.Полученные результаты (см табл. 2) показывают, что использование энтеробифидшта вызывает снижение у поросят содержания- нитратов в.-крови на 24,7, в кале - 57,8, вмоче на 51,8, предотвращает развитие ток СИКОЗЗ ПО СРШЗНВЕЩО С НСИВОТВЫЪШ контрольнойПример 5. Сравнительная оценка эффективности использования биологического препарата энтеробифидин для профилактики нитратных токсикозов у поросят и аскорбиновой кислоты в дозе 40 ш/хсг втассы внутрь и 0,2 мл/кг массы 5 И, раствора внутримышечно, показывает,что энтеробифидин достоверно снижает содержание нитратов в оргаштзме новорожденных поросят при их повьштенном поступлении с секретом молочных желез и профилактирует развитие токсикоза, метгемоглобннемтш диарейнш расстройств у новорожденных В тоже время аскорбиновая кислота в меньшей степени снижает содержание нитратов (см. .Таблица 2 Содержание нитратов в секрете молочных желез свиноматок,крови кале и моче поросят при обычном кормленииекрет молочных желез мг/л47,9 25,7 77,6 95,5 46,8 24,5 74,1 91,2 50,1 26,3 70,8 89,1 58,9 24,0 74,1 87,1 45,7 22,4 66,1 91,2 44,7 22,4 67,6 95,5 38,0 21,9 72,4 97,7 46,8 22,9 81,3 102,0 49,0 24,0 77,6 87,1 57,5 25,1 60,3 97,7 Среднее М 1 ш 48,5411917 1 23920,475 72,191973 9 З,411,589 С добавлением препарата 49,0 18,2 37,1 49,0 51,3 17,8 36,3 47,9 50,1 17,0 28,8 43,6 46,8 16,6 . 30,9 42,7 45,7 18,6 32,4 38,9 49,0 18,2 24,0 50,1 53,7 17,8 27,5 46,8 57,5 17,4 25,7 56,2 58,9 19,5 30,2 37,1 60,3 19,1 31,6 38,0 Среднее М 1111 52,2311626 180210285 304511331- 45,031,929 Уровень значимости разлитой (Р) 0,05 0,001 0,001 0,001Содержание нитратов и метгемоглобшш у поросят при обычном корьшеншех, применении аскорбиновой кислоты и энтеробифидина1. Поросята контрольной груп пы 302. Поросята, которым применяли аскорбиновую кислоту в течение З дней 52д Таблица 4 Содержание ъштраюв в молозиве (молоке) коров, крови, печеъш и кале телят при обычном кормлешш и с добавлениемпрепарата энтсробифидш (мг/л (100)263,0 . 32,4 37,1 а . 126,0 123,0- - 24,5 1 30,9 в 69,2 д-195,0- в . 27,5 38,0 - 83,2 126,0 - 24,0 36,3 с а 66,1 105,0 а с 22,4 - - 38,9 - 00,3 ц Среднее 174,4 39,91 26,2 2,15 . 36,2 1,72 81,0 12,94 С добавлением дтрепарата - 1 251,0 20,9 с 26,3 , 72,4 186,0 19,9 . 25,7 54,9 155,0 19,5 25,7 38,9 275,0 21,9 26,9 74,1 162,0 19,1 , 27,5 32,4 138,0 14,8 не определялось 28,2 151,1 19,1 не определялось 36,3 132,0 12,0 не определялось 28,2 209,0 20,9 не определялось 66,1 195,0 18,6 не определялось 62,4 Среднее 185,4 12,23 18,7 1,07 26,4 0,39 49,4 4,97 табл.3) в крови, способствует уменьшешаю Пример 6. Г 1 олученный препарат энтерог уровня метгемоглобпна, не влияет на концен- бифидин дают телятам в дозе 100 мл 1 раз трацшо нитратов в кале н не предотвращает в день в течение 5 суток. Как следует из диареи у поросят. таблицы 4, использование препарата снижает Таблица 5 , Результаты испытания препарата энтеробнфидин при диарейггхьъх болезнях у поросят