Способ спектрофотометрического определения витамина PP в пищевых продуктах

(51)01 21/63 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНАВ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Баркатина Елена Николаевна Застенская Ирина Алексеевна Полянских Елена Ильинична(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56) Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. - М. Брандес, Медицина, 1998. С. 162-167. ГОСТ Р 50479-93. Продукты переработки плодов и овощей. Метод определения содержания витамина РР. ГОСТ 30627.4-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина РР(ниацина). Веретенникова Н.Д. и др. Экологическая антропология. Экология человека в постчернобыльский период МатериалыМеждународной научнопрактической конференции. - Мн. Белорусский комитет Дзец Чарнобыля, 2002. - С. 289-291.2193191 2, 2002. Экспериментальная витаминология. Мн. Наука и техника, 1979. - С. 411-427.(57) Способ спектрофотометрического определения витамина РР в пищевых продуктах,включающий предварительную обработку исследуемого образца, очистку от мешающих определению веществ, количественное получение производного глутаконового альдегида,измерение оптической плотности его раствора при 400-425 нм в сравнении со стандартным раствором и вычисление массовой доли витамина РР, отличающийся тем, что предварительную обработку осуществляют в ультразвуковой бане с частотой 35 кГц при температуре 75 в течение 15 мин. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также пищевой промышленности и сельскому хозяйству. Известен способ определения витамина РР в продуктах переработки плодов и овощей,основанный на освобождении витамина РР путем кислотного гидролиза, очистке гидролизата от мешающих определению веществ, количественном получении окрашенного глутаминового альдегида, интенсивность окраски которого измеряют фотометрически 1. Способ является аналогом по отношению к заявляемому. 8349 1 2006.08.30 Однако указанный способ имеет недостатки. Во-первых, ограничен определением витамина РР только в продуктах переработки плодов и овощей. Во-вторых, кислотный гидролиз проводится в течение 1,5 ч, затем гидролизат охлаждают 2 ч на ледяной бане или оставляют на ночь в холодильнике, что значительно удлиняет время определения. Известен способ определения витамина РР в молочных продуктах для детского питания, основанный на освобождении витамина РР путем кислотного гидролиза, очистке гидролизата от примесей, количественном получении производного глутаконового альдегида, интенсивность окраски которого измеряют колориметрически 2. Способ является аналогом по отношению к заявленному. Вышеуказанный способ имеет следующие недостатки позволяет определять витамин РР только в молочных продуктах, кислотный гидролиз проводится в течение 1,5 ч, очистка и фильтрация гидролизата требует длительного времени. Известен способ определения витамина РР в пищевых продуктах, основанный на освобождении связанных форм витамина РР путем кислотного или щелочного гидролиза в зависимости от типа продукта, очистке гидролизата от мешающих определению веществ,количественном получении производного глутаконового альдегида и колориметрическом определении его массовой доли при 400-425 мм в сравнении со стандартным раствором 3. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако к недостаткам известного способа следует отнести длительное время проведения гидролиза,недостаточность очистки при добавлении сернокислого цинка, необходимость дополнительной очистки с перманганатом калия или перекисью водорода, которая увеличивает время анализа, а также получение окрашенных фильтратов, что усложняет определение витамина РР и искажает результаты анализа. Задачей заявляемого изобретения является сокращение времени предварительной обработки, повышение качества очистки и за счет этого точности определения, сокращение времени анализа. Поставленная задача достигается следующим образом. Представлен способ спектрофотометрического определения витамина РР в пищевых продуктах, включающий предварительную обработку исследуемого образца, очистку от мешающих определению веществ, количественное получение производного глутаконового альдегида, измерение оптической плотности его раствора при 400-425 нм в сравнении со стандартным раствором и вычисление массовой доли витамина РР, при этом предварительную обработку образца осуществляют в ультразвуковой бане с частотой 35 кГц при температуре 75 С в течение 15 мин. Пример. Определение витамина РР в пищевых продуктах. 1. Ультразвуковая обработка. К навеске продукта 1-10 г, которая должна содержать около 100 мкг витамина РР, в мерную колбу на 100 см 3 добавляют 75 см 3 концентрацией 0,1 моль/дм 3 и тщательно перемешивают. Ультразвуковую обработку осуществляют в ультразвуковой бане 106 с частотой 35 кГц при температуре 75 С в течение 15 мин. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры и доводят общий объем до метки дистиллированной водой, содержимое тщательно перемешивают, фильтруют через складчатый фильтр. Берут 25 см 3 фильтрата, переносят в мерную колбу на 50 см 3, добавляют 1-2 капли 1 раствора фенолфталеина и нейтрализуют раствором гидроксида натрия концентрации 10 моль/дм 3 до слабо-розового окрашивания. Нейтрализованный раствор фильтрата охлаждают. 2. Очистка фильтрата. В мерную колбу с нейтрализованным фильтратом (по п. 1) добавляют 2 см 3 раствора сульфата цинка концентрации 0,8 г/см 3 и вносят по каплям гидроксид натрия концентрации 4 моль/дм 3 до получения слабо-розового окрашивания, содержимое колбы тщательно 2 8349 1 2006.08.30 перемешивают, розовое окрашивание удаляют несколькими каплями раствора соляной кислоты концентрацией 1 моль/дм 3. Оставляют стоять 10 мин, затем добавляют 1-2 капли этилового спирта (для удаления пены) и доводят объем до метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр. 3. Проведение цветной реакции. Цветную реакцию проводят в восьми пробирках с притертыми пробками вместимостью 20-25 см 3 в одну пробирку вносят 5 см 3 дистиллированной воды (контрольный раствор на реактивы) в три пробирки вносят по 5 см 3 рабочего стандартного раствора витамина РР концентрации 2 мкг/см 3 в четыре пробирки вносят по 5 см 3 очищенного фильтрата испытуемой пробы. Все пробирки на 5 мин помещают в водяную баню при температуре 502 С, после чего в 2 пробирки с очищенным фильтратом вносят по 2 см 3 дистиллированной воды(контроль к испытуемому раствору), а во все остальные пробирки - по 2 см 3 роданбромидного раствора (заранее готовят бромную воду в темную склянку с притертой пробкой вносят 100 см 3 дистиллированной воды и под тягой 5-6 см 3 брома, встряхивают, хранят под тягой. Роданбромидный раствор готовят непосредственно перед применением к 15 см 3 охлажденной на ледяной бане бромной воды прибавляют по каплям раствор роданистого калия концентрации 100 г/дм 3 до полного обесцвечивания брома. Затем постепенно, небольшими порциями вносят карбонат кальция до прекращения выделения пузырьков и образования осадка. Раствор фильтруют в склянку с притертой пробкой из темного стекла и оставляют стоять на ледяной бане до использования. Все пробирки закрывают пробками, встряхивают и помещают в водяную баню при температуре 50 С 2 С на 10 мин. По истечении этого времени пробирки вынимают,охлаждают под водой до комнатной температуры, ставят на 10 мин в темное место и затем добавляют по 3 см 3 раствора метола (непосредственно перед применением 8 г перекристаллизованного метола вносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 и доводят объем до метки раствором соляной кислоты 0,5 моль/дм 3). Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и оставляют на 1 ч в темном месте. 4. Измерение оптической плотности. Оптическую плотность растворов, полученных по п. 3, измеряют по отношению к воде на спектрофотометре с длиной волны 400 нм. Если растворы мутные, перед измерением оптической плотности их фильтруют через плотный бумажный фильтр. 5. Обработка результатов. Массовую долю ниацинав мг на 100 г продукта вычисляют по формуле,(1 )11310 где А - оптическая плотность испытуемого раствора (среднее из двух параллельных определений), ед. прибора А 1 - оптическая плотность раствора контроля к испытуемому раствору (среднее из двух параллельных определений), ед. прибора М - масса ниацина в 5 см 3 рабочего стандартного раствора, мкг- общий объем гидролизата, см 3 2 - объем после очистки гидролизата сульфатом цинка, см 3 В - оптическая плотность стандартного раствора (среднее из двух параллельных определений), ед. прибора 1 - оптическая плотность раствора контроля на реактивы, ед. прибора 1 - масса пробы, взятой для анализа, г 1 - объем гидролизата, взятый на очистку, см 3 3 - объем очищенного гидролизата, взятый для проведения цветной реакции, см 3 3 8349 1 2006.08.30 10 - коэффициент пересчета из мкг/г в мг/100 г продукта. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, рассчитанных до третьего и округленных до второго десятичного знака. Результаты определения витамина РР в пищевых продуктах предлагаемым способом представлены в таблице. Определение витамина РР в пищевых продуктах Время предСпособ предИнтенсивИзвлечение варительной Общее время варительной ность окраски витамина РР,обработки,анализа, ч обработки фильтрата мин кислотный от светло- до Известный или щелоч 90 темно 78 28(по прототипу) ной гидролиз желтого ультразвукоПредлагаемый 15 прозрачный 97 8 вая обработка Способ определения Таким образом, заявляемый способ обладает следующими преимуществами сокращает время предварительной обработки в 6 раз упрощает стадию очистки сокращает время анализа в 3,5 раза повышает точность определения на 19 . Источники информации 1. ГОСТ Р 50479-93 Продукты переработки плодов и овощей. Метод определения содержания витамина . Введ. 01.01.94. - М. Госстандарт России, 1993. - С. 7 (аналог). 2. ГОСТ 30627.4-98 Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина РР (ниацина). Введ. 01.05.2000. - Мн. Изд-во стандартов, 1998. - С. 6(аналог). 3. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов/Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. -М. Брандес, Медицина, 1998. - С. 162-167 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4