Способ диагностики менингита на ранней стадии

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МЕНИНГИТА НА РАННЕЙ СТАДИИ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Лиопо Татьяна Валерьевна Цыркунов Владимир Максимович Дорошенко Евгений Михайлович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(57) Способ диагностики менингита на ранней стадии, отличающийся тем, что осуществляют забор цереброспинальной жидкости, определяют в ней уровень серотонина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с детектированием по флуоресценции при 340 нм при длине волны возбуждения флуоресценции 280 нм и при уровне серотонина 15 нг/мл или выше диагностируют менингит. Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням(нейроинфекциям) и неврологии, может применяться в клинической практике для диагностики менингита и дифференциальной диагностики менингеального синдрома. Известны способы диагностики менингита, основанные на характерных жалобах больных клинической триаде (головная боль, повышенная температура, рвота) и менингеальных симптомах (ригидность мышц затылка, симптомы Кернига, Брудзинского и др.), свидетельствующих о наличии гипертензионного церебрального синдрома, обусловленного воспалением мозговых оболочек и повышением внутричерепного давления Дадиомова М.А.,Пратусевич Р.М. Острые серозные менингиты и энцефалиты у детей, 1974. - С. 7. Однако приведенные характерные клинические симптомы не являются специфичными, так как могут быть обусловлены другой патологией, включая неинфекционную, кроме того, могут отсутствовать при наличии атипичного менингита, клинически мало выраженного Цыркунов В.М., Лиопо Т.В. Менингеальный симптомокомплекс вопросы клинической дифференциации // ГрГМУ. - 2005. -1. - С. 81-85. Функциональными аналогами предлагаемого способа диагностики менингита являются методы, основанные на магнитно-резонансной томографии (МРТ) и компьютерной томографии (КТ) головного мозга, которые позволяют диагностировать нарушения ликвородинамики, выявить локальные признаки воспаления мозговых оболочек Команцев В.И. Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2005. - С. 54. 14541 1 2011.06.30 Однако данные методы визуализации позволяют диагностировать только выраженные(грубые) изменения со стороны ликвородинамики и мозговых оболочек и не могут быть использованы для диагностики начальных стадий или невыраженных признаков воспаления мозговых оболочек. Кроме того, они не лишены побочных эффектов, связанных с облучением, являются дорогостоящими и трудно выполнимыми в условиях стационара, не располагающего данным оборудованием (районные больницы, инфекционные стационары). Недостаточная доступность МРТ для больных в остром периоде заболевания, возрастные ограничения к использованию нейросонографии (неприменима у детей до 1 года) также усложняют использование данных методов для диагностики менингита. Аналогом предлагаемого способа диагностики менингита является метод, основанный на определении уровня серотонина в крови у больных менингококковой инфекцией,осложненной развитием инфекционно-токсического шока (ИТШ) при наличии менингита,который автор применил для прогнозирования исходов осложнения Карпов И.А. Автореф. дис.докт. мед. наук, 1999. - С. 14. Недостатком способа является то, что данный способ не может быть применен с целью диагностики менингита, так как содержание серотонина определяется в крови, а не в ликворе. Кроме того, при тяжелой генерализованной форме менингококковой инфекции(сепсис) изменение содержания серотонина в крови могут быть связаны с поражением не только мозговых оболочек, но и других систем, поражение которых может влиять на содержание серотонина в крови, что подтверждает неспецифический характер изменений уровня нейромедиатора. Наиболее распространенным и близким к предлагаемому способу является способ диагностики менингита, основанный на определении количества клеток в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ), которое у здоровых людей не должно превышать 8 клеток в 1 мкл ликвора Васильев В.С., Комар В.И., Цыркунов В.М. Практика инфекциониста. - Минск Вышейшая школа. - 1993. - С. 100. Однако данный способ имеет существенные недостатки, так как не позволяет выявить ранние стадии менингита или менингит у больных, которые до исследования ЦСЖ получали антибиотики, или противовоспалительные средства, из-за чего количество клеток в 1 мкл в момент исследования может не отражать степень повреждения (воспаления) мозговых оболочек. Задача изобретения - расширение арсенала способов диагностики разных стадий и форм менингита (типичных, атипичных, начальных, конечных), обладающих высокой чувствительностью и эффективностью. Поставленная задача решается путем биохимического исследования цереброспинальной жидкости, при этом отличительным моментом является то, что методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с детектированием по природной флюоресценции определяют содержание серотонина и при его уровне 15 нг/мл и выше диагностируют менингит. Способ осуществляют следующим образом. У больного с любыми клиническими проявлениями менингеального синдрома (маловыраженными или манифестными) или при подозрении на менингит производят забор ликвора. Определяют серотонин в ликворе с помощью ион-парной высокоэффективной жидкостной хроматографии в следующей модификации. Определение проводят в пробах ЦСЖ после осаждения белка 0,2 М раствором хлорной кислоты, содержащим 10 мкМ ванилиновой кислоты (внутренний стандарт) на колонке 3250 мм Диасорб С 16 Т, 8 мкм (Элсико, Россия) при 20 С с использованием подвижной фазы 0,1 М КН 2 РО 4, 0,017 М СН 3 СООН, рН 3,65 320 мг/л гептилсульфоната натрия, 80 мг/л октилсульфоната натрия, 50 мг/л ЭДТА, 12(об.) метанола. Скорость потока 0,5 мл/мин. Детектирование по природной флуоресценции при длинах волн возбуждения 280 нм, излучения - 340 нм Дорошенко Е.М. Формирование фонда биогенных аминов и нейроактивных аминокислот в головном мозге крыс при алкогольной интокси 2 14541 1 2011.06.30 кации и отмене этанола Автореф. дис.канд. биол. наук. Минск, 1994. - 20 с В случае,если уровень серотонина в ликворе превышает 15 нг/мл, диагностируют менингит. Приводим доказательства возможности осуществления способа. В обследование включено 2 группы больных. Контрольная группа (7 больных) представлена больными ОРВИ, у которых полностью исключен диагноз менингита (нейроинфекции с поражением мозговых оболочек). Исследование ЦСЖ в этой группе было проведено для исключения менингита при поступлении в инфекционный стационар в связи с наличием клинической триады (головная боль, рвота, температура) и ригидности мышц затылка. Все больные группы до поступления в стационар не принимали лекарственных препаратов (антибиотиков, противовирусных, противовоспалительных). Клинико-лабораторные показатели и содержание серотонина в ЦСЖ в контрольной и опытной группах Симптомы Больные Менинг. Гол. боль Температура симптомы Менингит (опытная группа) В опытную группу больных (7) вошли больные с окончательным диагнозом менингита,так как содержание серотонина в ЦСЖ превышало 15 и более нг/мл. Результаты исследования ЦСЖ у больных контрольной группы и опытной групп представлены в таблице. Как видно из таблицы, у всех больных контрольной группы не выявлено каких-либо признаков воспаления мозговых оболочек, о чем свидетельствовали результаты, в частности цитоз в ЦСЖ колебался от 1 до 5 клеток в 1 мкл, а содержание серотонина в ликворе контрольной группы больных составило от 2,63 до 14,52 нг/мл. Как видно из таблицы, опытная группа представлена больными с клиническими проявлениями менингита, у которых цитоз в ликворе колебался от 3 до 480 клеток в 1 мкл. Содержание серотонина в ликворе опытной группы больных составило от 17,91 до 64,85 нг/мл. Обращало на себя внимание, что у 1 больной (выделено жирным шрифтом) цитоз был в пределах нормальных показателей, однако уровень серотонина в ликворе значительно превышал норму. В связи с полученными данными данной больной был установлен окончательный диагноз менингита. Приводим конкретные примеры, подтверждающие возможность использования способа. 3 14541 1 2011.06.30 Пример 1. Больной О.М., 11 лет, поступил в УЗ ГОИКБ в первые сутки от момента заболевания с жалобами на головную боль, многократную рвоту, повышение температуры тела. При объективном исследовании выявлены положительные менингеальные симптомы. Цитоз ликвора составил 161 клетки в 1 мкл. Содержание серотонина - 51,98 нг/мл, что подтверждает диагноз менингит. Пример 2. Больная В.С., 21 год, поступила в УЗ ГОИКБ на вторые сутки от момента заболевания. При поступлении беспокоила головная боль и повышенная температура тела. Рвоты не было. При исследовании ЦСЖ общеклиническими методами патологии не выявлено,цитоз составил 3 клетки, однако уровень серотонина составил 26,16 нг/мл, что характерно для менингита. Таким образом, предварительный диагноз ОРВИ с явлениями менингизма соответствовал диагнозу менингит, который был подтвержден повторной пункцией через 5 дней, проведенной по клиническим показаниям (нарастание головной боли, сохранение интоксикации), когда цитоз в ликворе нарос до 79 клеток в 1 мкл. Было установлено,что первоначальный низкий показатель цитоза был обусловлен коротким сроком болезни и приемом в домашних условиях нестероидных противовоспалительных препаратов. Преимуществами способа являются повышение точности диагностики менингита, включая начальные стадии болезни и минимальные ее клинико-лабораторные проявления на фоне возможного лечения болезни до поступления в стационар ускорение сроков диагностики менингита и своевременного выбора тактики ведения и лечения больных менингитов, что снижает частоту осложнений и неблагоприятных исходов. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4