Устройство для определения адгезии лейкоцитов

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ УСТРОЙСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДГЕЗИИ ЛЕЙКОЦИТОВ(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Козловский Владимир Иосифович Селезнева Ольга Михайловна(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(57) Устройство для определения адгезии лейкоцитов, состоящее из корпуса, термостатируемой кюветы для суспензии лейкоцитов, нейлонового фильтра, отличающееся тем, что в корпус устройства помещен блок для циркуляции лейкоцитарной суспензии, состоящий из насоса для прокачки суспензии, двух полипропиленовых трубок и пластиковой колонки.(56) 1. Жирнова И.Г. Способ определения адгезивных свойств лейкоцитов крови / И.Г.Жирнова, И.В.Ларина. М.И.Царева, И.В.Ганнушкина // Патент РФ на изобретение 2246728. Заявка 2003109324. Приоритет изобретения 03 апреля 2003. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20 февраля 2005. 2. Крюков А.А. Генерация активных форм кислорода в моноцитах при адгезии к стеклу / А.А.Крюков. Е.П.Семенкова, С.П.Черенкевич // Цитология. - 2006. - Т. 48 (2). - С. 142-148. 3./ , , // . . . - 1978. -61 (3). . 697-702. 4.,,/ , , А.Г. // . . . . 1974. - . 291. -642-646. 5. Заявка на полезную модель 20110448, 06.06.2011 (прототип). Полезная модель относится к медицинской технике, используется для определения адгезии лейкоцитов. Известно устройство, которое состоит из пластикового микропланшета, в лунках которого инкубируется лейкоцитарная суспензия затем определяют разницу количества лейкоцитов во взвеси до и после инкубации 1. Другое устройство представлено стеклянной пластинкой, помещенной в чашку Петри суспензию лейкоцитов инкубируют на пластинке и затем подсчитывают количество адгезированных на стекло лейкоцитов на единицу площади с помощью светового микроскопа и камеры Горяева 2. Недостатком устройств является трудоемкость и недостаточная точность подсчета лейкоцитов в камере Горяева механическим способом. Существует устройство, состоящее из планшета и расположенного на нем монослоя человеческих эндотелиальных клеток цельную гепаринизированную кровь инкубируют в течение 15 мин на монослое эндотелиоцитов, подсчитывают разницу количества лейкоцитов до и после инкубации и определяют процент адгезированных лейкоцитов 3. Главными недостатками устройства являются использование дорогостоящих расходных материалов,сложность процедуры выращивания человеческих эндотелиальных клеток, необходимость специальных химических реагентов. Известно устройство, представляющее собой пастеровскую пипетку с помещенной в нее колонкой нейлонового фильтра длиной 15 мм, к которому адгезируются лейкоциты 4, 1 мл гепаринизированной цельной крови наслаивают на фильтр и фильтруют через него в течение 10 мин. Регистрируют количество лейкоцитов в вытекающем из фильтра материале и сопоставляют с исходным уровнем лейкоцитов (в процентах). Недостатками данного устройства являются частичное вытекание суспензии из фильтра, невозможность регистрации динамики процесса адгезии лейкоцитов на волокнистый субстрат. Прототипом предлагаемой полезной модели является устройство для определения адгезии лейкоцитов, состоящее из корпуса с термостатируемой кюветой для суспензии лейкоцитов, фильтра из нейлоновой ткани, фиксаторов для фильтра, блока для отжима фильтра 5. Адгезию лейкоцитов оценивают по изменению коэффициента светопропускания, измеренного на агрегометре АР-2110 СОЛАР. Недостатком устройства является невозможность изучения динамики адгезии лейкоцитов на нейлоновый фильтр. Задачей, на решение которой направлено создание полезной модели, является разработка устройства, позволяющего регистрировать скорость адгезии лейкоцитов по изменению оптической плотности суспензии и время завершения адгезии этих клеток на фильтре, что повышает информативность и точность исследования. 83772012.06.30 Реализация данной задачи достигается за счет того, что предлагаемое устройство состоит из корпуса, термостатируемой кюветы с суспензией лейкоцитов, нейлонового фильтра, и в корпус устройства помещен блок для циркуляции лейкоцитарной суспензии,который включает насос для прокачки суспензии, две полипропиленовые трубки и пластиковую колонку для нейлонового волокна. Изобретение поясняется следующим графическим изображением. На фигуре изображена схема устройства для определения адгезии лейкоцитов. Устройство для определения адгезии лейкоцитов состоит из корпуса (1), термостатируемой кюветы 840 мм для суспензии лейкоцитов (2), нейлонового фильтра (3), блока для циркуляции суспензии (4), который включает две полипропиленовые трубки диаметром 2 мм и длиной 6,5 и 1,5 см (5), насос для прокачки суспензии (6) и пластиковую колонку длиной 15 мм для нейлонового волокна (7). Блок (4) помещен в корпус прибора (1). Все манипуляции с клетками с целью сокращения потерь производят в силиконированной или пластиковой посуде (пробирки, пипетки, кюветы, трубочки). Для проведения исследования забор крови производят утром натощак из локтевой вены объемом 4,5 мл. Затем кровь помещают в чистую пластиковую или силиконированную пробирку, вносят 0,5 мл 3,8 раствора цитрата натрия. Кровь отстаивают для получения лейкоцитарной суспензии. Подготовка фильтра нейлоновые волокна массой 50 мг помещают в колонку (7). Устройство работает следующим образом 1,3 мл лейкоцитарной суспензии вносят в полистирольную кювету (2), помещают кювету в корпус прибора (1). Затем включают устройство и прогревают в течение 20 мин до достижения температуры суспензии лейкоцитов 37 С с последующим поддержанием ее в пределах 37,00,1 С. Регистрируют исходное значение светопропускания суспензии лейкоцитов (1) с помощью агрегометра АР 2110 СОЛАР. Включают блок для циркуляции лейкоцитарной суспензии (4) и в течение 10 мин проводят запись кривой изменения светооптической плотности лейкоцитарной суспензии, прошедшей через нейлоновый фильтр. При циркуляции суспензии с каждым циклом на нейлоновом фильтре адгезируется часть лейкоцитов, что проявляется в постепенном увеличении оптической плотности суспензии скорость этого процесса обусловлена адгезивной активностью лейкоцитов. Регистрируют время окончания агрегации лейкоцитовпо точке прекращения нарастания оптической плотности суспензии и оптическую плотность лейкоцитарной суспензии в этой точке (2), вычисляют скорость агрегациипо формуле(21) / . Положительным эффектом предложенной полезной модели является то, что за счет использования блока для циркуляции лейкоцитарной суспензии появляется возможность определения динамики адгезии лейкоцитов на фильтр, что повышает точность и информативность исследования. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3