Плотная яично-овощная питательная среда с лизином и рибофлавином для выращивания микобактерий туберкулеза

Номер патента: 9286

Опубликовано: 30.06.2007

Авторы: Кузнецов Олег Евгеньевич, Гельберг Илья Самуилович

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

ПЛОТНАЯ ЯИЧНО-ОВОЩНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА С ЛИЗИНОМ И РИБОФЛАВИНОМ ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Кузнецов Олег Евгеньевич Гельберг Илья Самуилович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) Ященко Т.Н. и др. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе.- М. Медицина, 1973. - С. 149150.2059715 1, 1996.92014100 , 1996.2059728 1, 1996.2215039 2, 2003.2193061 1, 2002.2115733 1, 1998.575888, 1979.(57) Плотная яично-овощная питательная среда с лизином и рибофлавином для выращивания микобактерий туберкулеза, содержащая яйцо куриное цельное, фильтрат отвара, приготовленного из 300 г фасоли белой, 300 г картофеля, 300 г моркови и 2 л воды, солевой раствор, состоящий из калия двуосновного фосфорнокислого, магнезии сернокислой, натрия лимоннокислого, лизина, глицерина и воды дистиллированной, рибофлавин и 2 раствор малахитовой зелени, при следующем соотношении компонентов яйцо куриное цельное, шт. 10-15 фильтрат отвара, мл 300 солевой раствор, мл 300 рибофлавин, мг/200 мл среды 20 2 раствор малахитовой зелени, мл 20,при этом солевой раствор содержит компоненты в следующем соотношении калий двуосновной фосфорнокислый, г 0,13 магнезия сернокислая, г 0,13 натрий лимоннокислый, г 0,13 лизин, г 1,91 глицерин, мл 38,3 вода дистиллированная, мл 600. Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может использоваться для культивирования микобактерий туберкулеза. 9286 1 2007.06.30 Трудности выделения микобактерий туберкулеза (МБТ) из патологического материала связаны с биологическими особенностями возбудителя (медленность роста), а также со снижением жизнеспособности микобактерий в результате применения антибактериальных препаратов для лечения туберкулеза и различных методов обработки при посеве материала. В настоящее время существует большое количество питательных сред для культивирования микобактерий. Однако именно большое количество питательных сред, предлагаемых для выделения микобактерий туберкулеза из патологического материала, говорит о том, что среды далеко не всегда отвечают необходимым требованиям. Это и явилось поводом для создания предлагаемого изобретения. Известна среда Гельберга для выращивания микобактерий туберкулеза, состоящая из 6 цельных яиц, 4 желтков, молока, картофельного отвара и раствора солей, содержащего калий двухосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магнезию сернокислую,пептон и глицерин (Ященко Т.Н., Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 150-151). Недостатком данной среды является трудоемкость в ее производстве и высокая стоимость. Известна среда Новая (Г. Мордовского), состоящая из равных объемов желтков куриных яиц и питательного раствора, в который входят калий одноосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, гликокол, глицерин (Ященко Т.Н.,Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 151). Недостатком данной среды является высокая стоимость. Наиболее близкой к предлагаемой является среда Левенштейна-Йенсена. Среда состоит из 1 л яичной массы, полученной из 10-15 яиц, к которой добавляют 600 мл солевого раствора и 20 мл 2 стерильного раствора малахитовой зелени. Солевой раствор содержит калий однозамещенный фосфорнокислый - 2,4 г, магнезию сернокислую - 0,24 г, магнезия лимоннокислая - 0,6 г, -аспарагин - 3,6 г, глицерин - 12 мл, вода дистиллированная 600 мл (Ященко Т.И. и др. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. С. 149-150). Недостатком данной среды является ее высокая стоимость. Задача изобретения - создание более дешевой питательной среды с сохранением качества исследования микобактерий туберкулеза. Поставленная задача решается путем создания яично-овощной плотной питательной среды с лизином и рибофлавином, содержащей яйцо куриное цельное, фильтрат отвара,приготовленного из 300 г фасоли белой, 300 г картофеля, 300 г моркови и 2 л воды, солевой раствор, состоящий из калия двухосновного фосфорнокислого, магнезии сернокислой,натрия лимоннокислого, лизина, глицерина и воды дистиллированной, рибофлавин и 2 раствор малахитовой зелени, при следующем соотношении компонентов яйцо куриное цельное, шт. 10-15 фильтрат отвара, мл 300 солевой раствор, мл 300 рибофлавин, мг/200 мл среды 20 2 раствор малахитовой зелени, мл 20. при этом солевой раствор содержит компоненты в следующем соотношении калий двухосновной фосфорнокислый, г 0,13 магнезия сернокислая, г 0,13 натрий лимоннокислый, г 0,13 лизин, г 1,91 глицерин, мл 38,3 вода дистиллированная, мл 600. 9286 1 2007.06.30 При подборе ингредиентов для предлагаемой питательной яично-овощной среды с лизином и рибофлавином исходили из того, чтобы обеспечить нужное количество и качество белкового состава за счет фасоли и яиц, углеводов за счет картофеля и витаминов за счет моркови и рибофлавина. Смесь приготавливают следующим образом. Фасоль (300 г) замачивают в 1 л дистиллированной воды (на 20 часов). Затем доводят объем воды до 2,0 литров и кипятят 20 минут на малом огне с закрытой крышкой. К кипящему отвару добавляют в измельченном виде 300 г картофеля и 300 г моркови и продолжают кипятить еще 20 минут. Горячий отвар фильтруют через стерильный марлевый фильтр в стерильный флакон. 300 мл стерильного остывшего фильтрата прибавляют к 10 гомогенизированным в стерильной колбе яйцам, приливают солевой раствор, витаминную добавку (рибофлавин) в соотношении 20 мг рибофлавина на 200 мл среды и 20 мл 2 малахитового зеленого. Тщательно размешав полученный яично-овощно-солевой раствор, фильтруют его через стерильный марлевый фильтр в стерильный флакон. Готовую среду разливают в стерильные пробирки (45 мл) и сворачивают в свертывателе (трижды доводя температуру до 80 С). Предлагаемая среда хорошо сворачивается, не отстает от стенок пробирок и по внешним свойствам(цвет) напоминает среду Левенштейна-Йенсена, что положительно сказывается на работе врача и фельдшера не создает никаких трудностей при дифференцировке выросших колоний МБТ. Кроме того, приготовленный фильтрат отваров белой фасоли, картофеля и моркови может храниться при 0-4 С в течение 3-х месяцев, не меняя своих свойств,как отдельно от солевого раствора, так и вместе с ним. Были проведены сравнительные испытания в отношении роста МБТ яично-овощной среды с лизином и рибофлавином и среды Левенштейна-Йенсена. Провели 30 сравнительных посевов чистой культуры М.на среду яично-овощную среду с лизином и рибофлавином и на среду Левенштейна-Йенсена. Было установлено, что чистая культура МБТ растет на яично-овощной среде с лизином и рибофлавином так же хорошо, как и на среде Левенштейна-Йенсена (70 роста на 7-ой день, 100 роста на 8-9-ый день инкубации). Цвет и форма колоний МБТ на обеих средах идентичны друг другу. Массивность роста оценивалась по 3-х бальной системе (в плюсах) и отражена в таблице. Среда Яично-овощная питательная среда с лизином и рибофлавином Левенштейна-Йенсена До 20 колоний МБТ на поверхности среды, выраженный рост, сплошной рост по поверхности среды . Было произведено 53 сравнительных посева мокроты от пациентов, страдающих туберкулезом (бактериовыделителей), и установлено следующее скорость первичного роста МБТ на испытуемой яично-овощной среде с лизином и рибофлавином значительно опережала скорость первичного роста МБТ на среде Левенштейна-Йенсена (25,30,33 сутки и 33,860,87 сутки соответственно). Таким образом, предлагаемая плотная яично-овощная питательная среда с лизином и рибофлавином обеспечивает культивирование МБТ значительно лучше среды Левенштейна-Йенсена, и при этом стоимость яично-овощной питательной среды с лизином и рибофлавином в 2,0-2,5 раза ниже стоимости среды Левенштейна-Йенсена. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3

МПК / Метки

МПК: C12N 1/20, C12Q 1/04

Метки: выращивания, среда, питательная, лизином, туберкулеза, рибофлавином, яично-овощная, плотная, микобактерий

Код ссылки

<a href="https://bypatents.com/3-9286-plotnaya-yaichno-ovoshhnaya-pitatelnaya-sreda-s-lizinom-i-riboflavinom-dlya-vyrashhivaniya-mikobakterijj-tuberkuleza.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Плотная яично-овощная питательная среда с лизином и рибофлавином для выращивания микобактерий туберкулеза</a>

Похожие патенты