Способ диагностики заболеваний щитовидной железы у детей

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ДЕТЕЙ(71) Заявитель Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии Минздрава РБ(73) Патентообладатель Научно-исследовательский институт радиационной медицины и эндокринологии Минздрава РБ(57) Способ диагностики заболеваний щитовидной железы у детей путем определения в крови популяции Тлимфоцитов с использованием нагрузочного индикатора, отличающийся тем, что в качестве нагрузочного индикатора используют раствор тиреоглобулина в концентрации 100-200 нг в объеме 10 мкл на пробу и при повышении числа Т-лимфоцитов на 10-15 от исходного уровня судят о доброкачественных заболеваниях щитовидной железы (эндемическом зобе, узловом зобе, аутоиммунном тироидите), а при отсутствии увеличения числа Т-лимфоцитов судят о злокачественном заболевании щитовидной железы.(56)960026 , 1997.764182, 1981.4677061, 1987.950995 , 1997.950996 , 1997.2654 , 1997.2655 , 1997.2656 , 1997. Макар Р. Д. // Врачебное дело. - 1991,10. - С. 16-19. Сачек М. Г. и др. Иммунологические аспекты хирургической инфекции. - Витебск, 1994. -С. 34-37. Изобретение относится к медицине, к разделам иммунологии, лабораторной диагностики и эндокринологии. Известны клинико-инструментальные, радиометрические, рентгенологические, ультразвуковые и цитологические способы диагностики заболеваний щитовидной железы (ЩЖ) у детей 1, 2, 3. Известно применение нагрузочных тестов в иммунологии с целью выявления различных заболеваний и патологических состояний иммунной системы, а также определения индивидуальной чувствительности и восприимчивости к воздействию ряда иммунокорректоров. Так, например, оценка Т-лимфоцитов с помощью проведенияпроб с тималином, декарисом и теофиллином позволяет выявить особенности и механизмы иммунодефицита, определить оптимальный вариант иммунокоррекции с последующей оценкой ее эффективности 4. С помощью нагрузочного теста с использованием левамизола показаны различия в розеткообразующей способности клеток здоровых доноров, больных хроническим бронхитом в фазах ремиссии и обострения и больных острой пневмонией 5. Однако для диагностики заболеваний ЩЖ использование нагрузочных иммунологических тестов авторами не выявлено. 4023 1 Задачей заявляемого способа диагностики является дифференциация характера патологического процесса в ЩЖ у детей с помощью нагрузочной пробы с тиреоглобулином (ТГ). Поставленная задача достигается тем, что предложен способ диагностики заболеваний ЩЖ у детей путем определения в крови популяции Т-лимфоцитов с использованием нагрузочного индикатора, отличающийся тем, что в качестве индикатора используют раствор тиреоглобулина (ТГ) в концентрации 100-200 нг/мл в объеме 10 мкл на пробу и при повышении числа Т-лимфоцитов на 10-15 и более от исходного уровня судят о доброкачественных заболеваниях щитовидной железы (эндемическом зобе, узловом зобе, аутоиммунном тироидите), а при отсутствии увеличения числа Т-лимфоцитов судят о злокачественном заболевании щитовидной железы. Поскольку онкопроцесс ингибирует в организме функциональную активность иммунокомпетентных клеток, в том числе и Т-лимфоцитов, отсутствие отвечаемости или пролиферации последних на воздействие ТГпозволяет судить о наличии специфического злокачественного процесса, так как ТГ проецируется эпителиальными клетками ЩЖ. Методика постановки нагрузочного теста с ТГ. Кровь забирают из вены в силиконированные пробирки с гепарином в концентрации 20-30 ЕД/мл. Суспензию лимфоцитов получают по общепринятой методике в градиенте плотности фиколл-верографина 6. Затем в чистые силиконированные центрифужные пробирки помещают 0,1-0,2 мл отмытой взвеси лимфоцитов в концентрации 2 млн. клеток в 1 мл суспензии 0,1-0,2 мл 0,5 суспензии эритроцитов барана и 10 мкл раствора ТГ в концентрации 100-200 нг/мл. Выдерживают 1015 мин в термостате при 37 С, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин и оставляют в холодильнике на 1824 часа при 4 С, после чего пипетируют осадок и считают (в камере Горяева) число розеткообразующих клеток. Параллельно оценивают пробы и без добавления ТГ. В табл. 1 приведены результаты постановки нагрузочного теста по заявляемому способу диагностики, где видно, что у детей с диагнозом рак ЩЖ не произошло увеличения количества Т-лимфоцитов после воздействия ТГ, в то время как у детей с узловым зобом, эндемическим зобом и аутоиммунным тироидитом зарегистрировано увеличение числа Т-лимфоцитов от 11 до 15 . Пример выполнения (табл. 2). 1. Больная Атрашкова Е.В., 1986 года рождения. Диагноз аутоиммунный тироидит Берут кровь из вены в силиконированные пробирки с гепарином в концентрации 20-30 ЕД/мл. Суспензию лимфоцитов получают путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина при 2000 об/мин в течение 15 мин. Затем в одну силиконированную пробирку помещают 0,1-0,2 мл отмытой взвеси лимфоцитов в концентрации 2 млн. клеток в 1 мл суспензии 0,1-0,2 мл 0,5 суспензии эритроцитов барана и 10 мкл раствора ТГ в концентрации 100-200 нг/мл, а в другую пробирку - 0,1-0,2 мл отмытой взвеси лимфоцитов в той же концентрации и 0,1-0,2 мл 0,5 суспензии эритроцитов барана. Выдерживают 10-15 мин в термостате при 37 С, центрифугируют при 1000 об/мин и оставляют в холодильнике на 18-24 часа при 4 С,после чего считают в осадке, помещенном в камеру Горяева, число розеткообразующих клеток параллельно в двух пробах. В 1-й пробирке с ТГ процент Т-лимфоцитов составил 42 , во 2-й - 25 , изменения в процентах составили 17. Контроль цитологический (пункционная биопсия) подтвердил диагноз аутоиммунного тироидита. 2. Козлова А.А., 1982 года рождения. Диагноз рак щитовидной железы Берут кровь из вены в силиконированные пробирки с гепарином в концентрации 20-30 ЕД/мл. И далее по аналогии с примером 1. Результат постановки в 1-й пробирке с ТГ процент Т-лимфоцитов составил 36 , во 2 й - 34(табл. 2). Контроль гистологический (постоперационный) подтвердил диагноз рак щитовидной железы. Таким образом, заявляемый способ позволяет без значительных материальных затрат получить достоверную информацию о характере патологического процесса в щитовидной железе. Не требует использования дорогостоящих реактивов и оборудования. Может быть использован в эндокринологических отделениях больниц и специализированных клиниках. 4023 1 Таблица 1 Изменение относительного количества Т-лимфоцитов в нагрузочном тесте с ТГ у детей с патологией щитовидной железы Т-лимфоциты,Узловой зоб 36,40,8877 18-52 Эндемический зоб 39,80,8817 17-52 АИТ 37,41,2930 20-56 Рак 36,90,950 23-49 Контроль 39,91,3834 24-55- достоверность различий, 0,05.- достоверность различий, р 0,001.- достоверность различий, р 0,1. Таблица 2 Индивидуальные изменения относительного количества Т-лимфоцитов у детей с патологией щитовидной железып/п АИТ эндемич. зоб узловой зоб рак ЩЖ Источники информации 1. Макар Р.Д. Актуальн птання дагностики раку щитовдно залози // Врачебное дело. - 1991. -10. -С. 16-20. 2.А 61 В 10/00,01 33/48. Способ диагностики злокачественных новообразований ЩЖ / Кириллов В.А., Ющенко Ю.П. -2655 А, 1997. 3.А 61 В 10/00,01 33/48. Способ диагностики рака ЩЖ / Ющенко Ю.П., Кириллов В.А. - 950995 А 1997. 4. Успенский В.М., Ващенков В.М. Значение проб с тималином, декарисом и теофиллином при оценке Тлимфоцитов // Лабораторное дело. - 1984. -6. - С. 332-335. 5. Понякина И.Д. Нагрузочные тесты в розеткообразовании // Лабораторное дело. - 1984. - 10. - С. 606609. 6. Новиков Д.К., Новикова В.И. Клеточные методы иммунодиагностики. -Минск, 1979.-211 с. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 3