Способ получения гидролизата белков крови

23 1/06, 23 3/12 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОЛИЗАТА БЕЛКОВ КРОВИ(71) Заявители Витебская биофабрика,Витебская государственная академия ветеринарной медицины(57) 1. Способ получения гидролизата белков крови, включающий разделение плазмы и эритроцитов крови,разведение эритроцитов дистиллированной водой, прогревание и ферментолиз термокоагулята эритроцитов,отличающийся тем, что ферментолизу подвергают смесь плазмы и термокоагулята эритроцитов в соотношении 0,70-0,751 в присутствии 10-20 см 3/дм 3 питьевой соды, 10-12 см 3/дм 3 хлороформа, 28-30 г/дм 3 панкреатина или 280-320 г/дм 3 поджелудочной железы в течение 96 часов при температуре 42-45 С, рН 7,8-8,2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что плазму и эритроциты разделяют путем сепарации или центрифугирования. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что эритроциты разводят дистиллированной водой в соотношении 13 и прогревают в течение 40-60 минут при температуре 85-90 С. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ферментолизат крови прогревают при температуре 85-90 С в течение 40-60 минут в присутствии 7,5-10,0 см 3/дм 3 хлороформа. Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению биологически активных веществ, которые могут найти использование в ветеринарии. Известен способ получения гидролизата из форменных элементов крови, включающий разделение плазмы и эритроцитов крови, разведение эритроцитов дистиллированной водой, прогревание и ферментолиз термокоагулята эритроцитов 1. Однако этот способ сложен в осуществлении, а полученный гидролизат обладает недостаточной биологической активностью. Задачей изобретения является упрощение способа, повышение биологической активности гидролизата за счет рационального содержания микроэлементов, разномолекулярных пептидов и аминокислот. Поставленная задача достигается тем, что в способе получения гидролизата белков крови, включающим разделение плазмы и эритроцитов крови, разведение эритроцитов дистиллированной водой, прогревание и ферментолиз термокоагулята эритроцитов, ферментолизу подвергают смесь плазмы и термокоагулята эритроцитов в соотношении 0,70-0,75 1 в присутствии 10-20 см 3/дм 3 питьевой соды, 10-12 см 3/дм 3 хлороформа, 28-30 г/дм 3 панкреатина или 280320 г/дм 3 поджелудочной железы в течение 96 часов при температуре 42-45 С, рН 7,8-8,2. Причем плазму и эритроциты разделяют путем сепарации или центрифугирования, эритроциты разводят дистиллированной водой в соотношении 13 и прогревают в течение 40-60 минут при температуре 85-90 С, а ферментолизат крови прогревают при температуре 85-90 С в течение 40-60 минут в присутствии 7,5-10,0 см 3/дм 3 хлороформа. 1995 1 Пример выполнения способа. Для разделения плазмы и форменных элементов, кровь центрифугируют или сепарируют. В ферменторе смешивают эритроциты и дистиллированную воду в соотношении 13. Полученную смесь инкубируют при температуре 85-90 С в течение 40-60 минут. Смешивают 1 дм 3 термокоагулята эритроцитов и 0,7-0,75 дм 3 плазмы (сыворотки). К 1 дм 3 смеси, нагретой до 45 С добавляют 10-120 см 3 питьевой соды, 28-30 г панкреатина или 280-320 г поджелудочной железы. Ферментолиз осуществляют в течение 96 часов при температуре 42-45 С, рН 7,8-8,2. Ферментолизис завершают при содержании в смеси аминного азота 900 мг и более. Ферментолизат прогревают при 80-90 С в течение 16-20 часов, добавляют хлороформ 7,5-10 см 3/дм 3. Смесь инкубируют в течение 40-60 минут при температуре 100-120 С, охлаждают до 15-20 С, отстаивают 4-5 суток. Недостаток декантируют, устанавливают рН 6,8-7,4,прогревают при 115-120 С в течение 30-40 минут, добавляют дистиллированную воду до содержания в гидролизате амминого азота 400-450 мг, добавляют 40-й стерильный раствор глюкозы до 2-го содержания, центрифугируют. Готовый продукт расфасовывают в стеклянные флаконы емкостью 200 см 3, укупоривают резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками, стерилизуют при температуре 1205 С в течение 3040 минут. Сравнительные биохимические показатели гидролиза и гидролизата (ГБК) представлены в таблицах 1, 2,3. Таблица 1. Биохимические показатели гидролизина и ГБК Препараты Гидролизин (биофабричный) Гидрозилизат (предлагаемый) Содержание фракций с различной молекулярной массой Препараты Гидролизин Гидрозилизат Содержание основных аминокислот Аминокислоты Фенилаланин Триптофан Тирозин Аргинин Гистидин Лизин Метионин Треонин Лейцин Изолейцин Валин Аспарагиновая кислота Глютаминовая кислота Цистинцистеин Гидролизат содержит 5 фракций пептидов, причем фракции высокомолекулярных пептидов составляют около 50 белкового состава, широкий набор аминокислот, микроэлементов. Отмечено высокое содержание в ГБК глютаминовой кислоты, цистина, изолейцина. Это подтверждает высокую биологическую активность гидролизата, его выраженное влияние на клинико-гематологические показатели. 1995 1 Таблица 4 Химический состав препаратов, полученных различными способами Состав Пептиды Аминокислоты Сахар Натрий Калий Железо Кальций Магний Хлор Фосфор При подкожном введении ГБК телятам 2 раза через 7 дней в дозе 1 мл на кг снижалось количество альбумина и резко (на 5,4-12,1) увеличилось количество гемоглобинов крови. Уровень бактерицидности сыворотки крови телят увеличивался в 2 раза. Поглотительная способность нейтрофильных лейкоцитов возросла на 69. Если введение гидролизина способствовало увеличению фагоцитарного числа и индекса в первые дни, то ГБК вызывал достоверные изменения в течение 15-20 дней после последнего введения (за счет присутствия в препарате высокомолекулярных пептидов). ГБК положительно влияет на увеличение привесов телят, по сравнению с контрольными животными. Эффективно применение ГБК в комплексном лечении бронхопневмонии у телят в дозе 1,5 мл/кг 1 раз в 6 дней. Заказ 7045 Тираж 20 экз. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.