Штамм бактерий Klebsiella pneumoniae КМИЭВ В-132 – штамм-антиген

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(72) Авторы Ломако Юрий Васильевич Опарина Ирина Владимировна Гусев Анатолий Алексеевич Новикова Оксана Николаевна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(56)2224019 2, 2004.2221864 2, 2004.2105809 1, 1998.2054477 1, 1996. БОРИСОВЕЦ Д.С. Экология и животный мир. - 2009. -1. - С. 4-10. КИЧА Е.И. Ученые записки учреждения образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины, 2006. Т. 42. - Вып. 2. - Ч. 1. - С. 91-93. АНДРОСИК Н.Н. Эпизоотология, иммунобиология, фармакология, санитария. - 2008. -1. - С. 9-15. Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано в биотехнологии для приготовления вакцины для профилактики клебсиеллеза сельскохозяйственных животных, а также ассоциированных вакцин для профилактики желудочно-кишечных инфекций животных. В ветеринарной микробиологии применяют ряд штаммов-антигенов для производства вакцин против клебсиеллеза сельскохозяйственных животных. За прототип взят штамм бактерий 24, обладающий следующими свойствами. Таксономическая принадлежность. Штамм бактерий 24 отнесен к семейству , к роду , виду. Культурально-морфологические признаки. Грамотрицательные короткие палочки, не образует спор, образует капсулу, не имеет жгутиков, неподвижен. На МПБ через 5-6 часов роста наблюдается равномерное помутнение среды с последующим образованием тонкой поверхностной пленки, на МПА - полупрозрачные с ровными краями крупные колонии 17487 1 2013.08.30 слизистой консистенции, на среде Эндо - бледно розовые колонии с красноватым центром, на среде Плоскирева - розовые колонии с желтым центром. Физико-биологические свойства. Аэроб, способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум 7,2 при температуре 37 С. Ферментативные свойства. Активно расщепляет глюкозу и глицерин с образованием кислоты и газа, а также сахарозу, лактозу, рамнозу, мальтозу, сорбит, маннит, инозит, не образует индол, сероводород, образует ацетилметилкарбинол в реакции ФогесПроскауэра. Антигенная структура. Серотипирован набором клебсиеллезных К-сывороток НИИВС им. Мечникова какК 2. Патогенен для белых мышей, 50 составляет 3,1108 клеток при внутрибрюшинном заражении 1. Недостатком указанного штамма является то, что он выделен не в Республике Беларуси и поэтому менее специфичен, что может отразится на эффективности вакцины на его основе, а также данный штамм менее вирулентный. Задачей предлагаемого изобретения является селекционирование штамма бактерий, пригодного для конструирования профилактических препаратов при клебсиеллезе и ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях животных, высоковирулентного и специфичного для Республики Беларусь Поставленная задача достигается тем, что в качестве штамма-антигена был селекционирован штаммКМИЭВ В-132 - штамм-антиген, обладающий стабильными свойствами и высокой вирулентностью по отношению к эпизоотическим штаммам,циркулирующим в хозяйствах Республики Беларусь. Штамм выделен в 2008 году в Государственном природоохранном учреждении Национальный парк Припятский Петриковского района Гомельской области из печеночной ткани павшего зубра пятилетнего возраста, больного гастроэнтеритом, путем посева ткани печени на среду Эндо с последующим выделением чистых культур и отбора из них активного в антигенном отношении штамма вида, из которого путем селекции выделен штаммКМИЭВ В-132, отличающийся высокой вирулентностью. Штамм бактерийКМИЭВ В-132 - штамм-антиген депонирован в коллекции РУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского. Штамм бактерийе КМИЭВ В-132 - штамм-антиген обладает следующими свойствами. Таксономическая принадлежность. Предложенный штамм бактерийе КМИЭВ В-132 - штамм-антиген отнесен к семейству , к роду, виду. Морфологические признаки. Грамотрицательные, неподвижные, толстые палочки размером 1,06,0 мкм, спор не образуют, образуют капсулу. Культуральные признаки. На МПБ дает помутнение и образование осадка, поднимающегося при встряхивании в виде косички, при росте на МПА - крупные (4-5 мм), выпуклые, влажные, часто сливающиеся колонии слизистой консистенции, на агаре Эндокрупные, влажные, сливающиеся малиновые колонии с металлическим блеском. Биохимические свойства. Образует индол, расщепляет глюкозу, маннит, сахарозу, мочевину, утилизирует цитраты, дает положительную реакцию Фогес-Проскауэра. Патогенность. Патогенен для белых мышей, 50 составляет 123 млн микробных клеток при внутрибрюшинном заражении. Условия хранения. Штамм хранится в защитной среде в лиофилизированном состоянии при влажности не более 3 , от минус 2 С до минус 10 С. Заявленный штамм бактерийКМИЭВ В-132 - штамм-антиген выделен в животноводческом хозяйстве Республики Беларусь и поэтому является специфичным для крупного рогатого скота в пределах Республики, его включение в вакцину 2 17487 1 2013.08.30 против клебсиеллеза позволяет усилить ее специфичность и повысить эффективность профилактики клебсиеллеза. Пример 1. Приготовление среды Эндо для культивирования штамма-антигенаКМИЭВ В-132. Штамм-антигенКМИЭВ В-132 выращивали на среде Эндо следующего состава, г дистиллированная вода 1000,0 питательный агар, сухой 26,5 ЭКДА 1,22 фуксин основной 0,23 сахар молочный 10,7 динатрий фосфат 0,48 сульфит натрия безводный 0,83 натрий углекислый 0,03. Оптимальная температура инкубирования 37 С, срок инкубации 18-20 ч, Н 7,20,2. Пример 2. Определение 50 штамма бактерийКМИЭВ В-132 - штаммаантигена на белых мышах. Для определение 50 штамма бактерийКМИЭВ В-132 - штамма-антигена сформировали 4 группы белых мышей массой 16-18 г по 4 головы в каждой. Для этого готовили последовательные разведение бактериальных клеток на физиологическом растворе, с концентрацией 500, 250, 125, 62,5 млн клеток в 1 мл, которые инъецировали внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. Учет гибели животных вели в течение 4 дней. Расчет 50 проводили по формуле Кербера в модификации Ашмарина. 50 штамма бактерийКМИЭВ В-132 - штамма-антигена для белых мышей составила 123 млн микробных клеток при внутрибрюшинном заражении. Источники информации 1. Патент 2224019 МПК 71 1/20,61 39/108, 2004 (прототип). 2. Бедоева З.М. Тест-системы для иммунологического мониторинга и прогнозирования острых кишечных инфекций животных и усовершенствование средств специфической профилактики автореф. дис. докт. биол. наук 16.00.03 03.00.23. - М., 2006. - 51 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3