Способ прогноза рецидива или стойкой ремиссии хронического гепатита C после интерферонотерапии

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРОГНОЗА РЕЦИДИВА ИЛИ СТОЙКОЙ РЕМИССИИ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТАПОСЛЕ ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Лукашик Светлана Петровна Цыркунов Владимир Максимович Андреев Виктор Павлович Прокопчик Николай Иванович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(57) Способ прогноза рецидива или стойкой ремиссии хронического гепатита С после интерферонотерапии, заключающийся в том, что до и после интерферонотерапии в биоптате печени определяют гистологический индекс активности, а после интерферонотерапии дополнительно определяют количество агрессивных лимфоцитов из расчета на 100 синусоидов печени и при снижении гистологического индекса активности до 4 и менее и отсутствии или наличии единичных агрессивных лимфоцитов в 100 синусоидах печени прогнозируют стойкую ремиссию, а при снижении гистологического индекса активности до 4 и менее и наличии 30 и более агрессивных лимфоцитов в 100 синусоидах печени прогнозируют рецидив. Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням, и может использоваться для прогнозирования рецидива или стойкой ремиссии гепатита С после интерферонотерапии (ИФТ). Известны способы прогноза рецидива и стойкой ремиссии после ИФТ хронического гепатита С (ХГС), основанные на учете известных предикторов эффективности (женский пол, молодой возраст, малый срок от предполагаемого момента инфицирования (менее 5 лет),низкий титрв сыворотке крови, генотип, отличный от 1, низкое содержание железа в ткани печени, отсутствие признаков коинфекции, повышенный уровень трансаминаз в крови, антитела к вирусу гепатита С класса , антитела к 5 белку вируса гепатита С Мицура В.М. Значение показателей иммунного статуса в оценке эффективности комбинированной терапии хронического гепатита С автореф. дис канд. мед. наук. - Мн., 2004. . 14 и неэффективности (мужской пол, высокий исходный уровень виремии, генотип 1(особенно ), длительность заболевания, старшая возрастная группа пациентов, алкоголь,микст-инфекция другими гепатотропными вирусами, цирроз, гемосидероз, стеатоз печени и т.д. Майер К.-П. Гепатит и последствия гепатита. - М. ГОЭТАР Медицина, 1999. С. 188-197. 11036 1 2008.08.30 Однако данные показатели лишь косвенно определяют эффективность - определяют прогноз стойкой ремиссии, но не решают вопроса прогноза рецидива в группе больных в случае достижения полного ответа (ПО) после ИФТ. Известен способ прогноза рецидивов ХГС после проведения противовирусного лечения препаратами интерферона, основанный на определении активности и стадии процесса в печени по данным повторных биопсий (сразу после завершения лечения), методом световой микроскопии (окраска гематоксином-эозином) Серов В.В. Хронический вирусный гепатит. - М. Медицина, 2002. - С. 299-302. Однако данный способ не обеспечивает точность прогноза, так как в нем учитывается комплекс морфологических показателей, характеризующих общие признаки поражения печени, которые у больных после ИФТ, при достижении ПО, резко снижаются или исчезают, что не может быть критериями прогноза рецидива. Задача изобретения - повысить точность прогнозирования рецидива и стойкой ремиссии хронического гепатита С после ИФТ. Поставленная задача решается путем определения гистологического индекса активности (ГИСА) до и после интерферонотерапии в биоптате печени. После интерферонотерапии дополнительно определяют количество агрессивных лимфоцитов из расчета на 100 синусоидов печени и при снижении ГИСА до 4 и более баллов и отсутствии или наличии единичных агрессивных лимфоцитов в 100 синусоидах печени прогнозируют стойкую ремиссию, а при снижении ГИСА до 4 и менее и наличии 30 и более агрессивных лимфоцитов в 100 синусоидах печени прогнозируют рецидив. Способ осуществляют следующим образом. До начала интерферонотерапии больным проводят морфологическое исследование биоптата печени, определяют в нем гистологический индекс активности. При достижении ПО после проведенной ИФТ у больных ХГС осуществляют повторную биопсию печени (впервые биопсия берется до начала терапии препаратами интерферона). Для светооптического анализа фрагмент ткани печени (биоптат) фиксируют в смеси растворов фосфатного буфера и формальдегида , // . . . - 1982. - 31. -4. - . 423-428, дофиксировали 2,5 глютаральдегидом на 0,1 М фосфатном буфере и 1 раствором четырехокиси осмия Морфофункциональные методы исследования в норме и при патологии. - Киев ЗДОРОВЯ. 1983. - С. 107. После дегидратации образцы ткани заливают в смесь стирола и метеприлата. Полутонкие срезы толщиной 0,5 мкм окрашивают метиленовой синькой и основным фуксином. Затем определяют гистологический индекс активности (ГИСА) и количество агрессивных лимфоцитов в синусоидах (расчет ведется на 100 синусоидов). При снижении(наличии) показателей ГИСА до 4 и более баллов и отсутствии агрессивных лимфоцитов в синусоидах печени после проведенного лечения прогнозируют стойкую ремиссию при сохранении (наличии) агрессивных лимфоцитов в синусоидах печени до 30 и более, несмотря на возможное снижение показателей ГИСА, прогнозируют рецидив. Приводим доказательства возможности осуществления способа. На базе гепатологического отделения Гродненской инфекционной больницы 20 больным ХГС проводилась противовирусная терапия реальдироном по 3 млн ЕД в/м 3 раза в неделю в течение 9-12 мес. У всех больных по окончании терапии был достигнут полный ответ (нормализация показателей АлАТ, элиминация РНКиз крови по данным ПЦР,снижение активности процесса в печени по данным пункционной биопсии печени). Больные наблюдались в течение года после отмены интерферона для оценки длительного ответа. По завершении наблюдения у части больных процесс сохранялся в стадии ремиссии(1 группа - 13 больных), а у части - развился рецидив (2 группа - 7 больных). В повторных биоптатах печени, полученных в 1 и 2 группах, изучались биохимические и морфологические показатели (ГИСА, подсчитывалось количество агрессивных лимфоцитов в ткани печени). 2 11036 1 2008.08.30 Результаты терапии представлены в табл. 1 и 2. Как видно из табл. 1, уровень АлАТ в динамике проведенной терапии достоверно снизился в обеих наблюдаемых группах, независимо от последующего исхода, что подтвердило низкую информативность АлАТ в качестве критерия прогноза рецидива. Таблица 1 Показатели АлАТ до и после проведенной терапии у больных ХГС Группы Количество больных АЛТ до лечения АЛТ после лечения Ст. ремис.13 3,130,34 0,440,07 Рецидив 7 1,340,14 0,440,05 Примечание- достоверные различия до и после лечения (Р 0,05) ПО - полный ответ. В табл. 2 представлены показатели ГИСА, однако после проведенной терапии и достижении ПО в обеих группах показатель ГИСА также достоверно снизился до низких показателей, что снизило его диагностическую ценность для прогноза рецидива. Таблица 2 Показатели ГИСА до и после проведенной терапии у больных ХГС Группы Количество больных ГИСА до лечения ГИСА после лечения Ст. ремис.13 16,921,65 3,671,27 Рецидив 7 11,304,40 2,301,40 Примечание- достоверные различия до и после лечения (Р 0,05) ПО - полный ответ. В табл. 3 представлены предлагаемые показатели для прогнозирования рецидива. Таблица 3 Показатели ГИСА и количества агрессивных лимфоцитов (АЛ) в печеночной ткани при ХГС после проведенной терапии в группах Группы Кол-во больных ГИСА АЛ, количество Ст. ремис.13 3,631,43 0,910,65 Рецидив 7 2,301,40 61,19,90 Примечание- достоверные различия между группами 1 и 2 (Р 0,05), ПО - полный ответ. Как видно из табл. 3, несмотря на снижение показателей ГИСА и их близкие абсолютные значения, свидетельствующие о стабилизации (отсутствии) активности, у 7 больных развился рецидив гепатита. В этой группе больных количество АЛ в печеночной ткани было высоким (61,19,90). В группе с отсутствием рецидива количество АЛ было незначительным (единичные, 1,50,99 на 100 синусоидов). Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования с использованием морфологического показателя - количества АЛ в синусоидах, является значительно более информативным в диагностическом и прогностическом аспекте, чем традиционно используемая динамика АлАТ, ГИСА и другие. Преимуществом предложенного способа является его точность, простота выполнения,возможность количественной оценки морфологических изменений и высокая диагностическая ценность. Способ может быть использован в специализированных лечебных учреждениях для прогноза стойкого рецидива и стойкой ремиссии у больных ХГС после достижения ПО в процессе ИФТ. Внедрение новых подходов будет способствовать снижению социальноэкономических затрат и улучшению качества жизни данной категории пациентов. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3