Способ повышения сократительной активности клеток в культуре ткани миокарда

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ СОКРАТИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК В КУЛЬТУРЕ ТКАНИ МИОКАРДА(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Полукошко Елена Федоровна Никандров Виталий Николаевич(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(57) Способ повышения сократительной активности клеток в культуре ткани миокарда, заключающийся в том, что сначала получают культуру ткани миокарда из сердечной мышцы или целого сердца, при этом их дезинтегрируют механически или ферментативно,полученную суспензию клеток наносят на покрытое коллагеном покровное стекло и выращивают в синтетической питательной среде ДМЕМ, содержащей 10 телячьей эмбриональной сыворотки, в течение 7-10 суток, а затем в культуральную жидкость вносят раствор стрептокиназы до концентрации 1000-10000 МЕ/мл. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию ткани сердца животных. Известен способ получения культуры ткани миокарда для общебиологических исследований, а также для тестирования и отбора кардиотропных препаратов(например, антиаритмических). Он заключается в том, что сердце животных и человека подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки,нанесении полученной суспензии на покрытые коллагеном покровные стекла или пластиковые чашки Петри и выращивании их в синтетической питательной среде(, США), содержащей 10 телячьей эмбриональной сыворотки, и дальнейшем культивировании требуемой культуры. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому 1. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является механическое и ферментативное дезинтегрирование органа (сердца) и культивирование клеток миокарда путем использования синтетической питательной среды и добавления к ней биологически активных веществ. Применяемая для получения культур телячья эмбриональная сыворотка позволяет получить зрелую, дифференцированную культуру ткани миокарда, однако недостаточно активно проявляющую сократительную способность мышечными элементами. 10349 1 2008.02.28 Задачей заявляемого способа является получение функционально высокоактивной культуры клеток миокарда. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ получения культуры ткани миокарда путем механического и ферментативного дезагрегирования тканей сердечной мышцы (или целого сердца) на отдельные клетки с последующим нанесением полученной суспензии на покрытые коллагеном стекла и выращивания их в синтетической питательной среде ДМЕМ, содержащей 10 телячьей эмбриональной сыворотки, причем в синтетическую питательную среду дополнительно вводят стрептокиназу в концентрации 1000-10000 МЕ/мл (международных единиц на мл). Стрептокиназа представляет собой белок массой 45-55 кДа -гемолитических стрептококков группы С, являющийся сильным активатором плазминогена. Стрептокиназа используется в клинической медицине для растворения внутрисосудистых тромбов и отложений фибрина 2. Введение ее в питательную среду позволяет получить культуры ткани миокарда, длительно проявляющие сократительную способность мышечных элементов. Пример 1 Берут ткань сердечной мышцы (или целого сердца) и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию на покрытые коллагеном покровные стекла или пластиковые чашки Петри и выращивают их в синтетической питательной среде , содержащей 10 телячьей эмбриональной сыворотки. В культуральную жидкость 7-суточной культуры ткани миокарда крысы вносят асептически стерильно приготовленный раствор стрептокиназы 10000 МЕ/мл. До и после внесения стрептокиназы с помощью светового микроскопа в 10 полях культуры визуально учитывают число сокращающихся скоплений кардиомиоцитов и регистрируют частоту сокращений по секундомеру. До добавления стрептокиназы (контроль) в 10 полях наблюдали 4 скопления клеток,сокращающихся с частотой 5-15 сокращений в минуту. После внесения стрептокиназы (опыт) в 10 полях наблюдали 7 скоплений клеток, сокращающихся с частотой 10-60 сокращений в минуту. Эта же картина наблюдалась через 24 часа после внесения стрептокиназы. Пример 2 Берут ткань сердечной мышцы (или целого сердца) и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию на покрытые коллагеном покровные стекла или пластиковые чашки Петри и выращивают их в синтетической питательной среде , содержащей 10 телячьей эмбриональной сыворотки. В культуральную жидкость 10-суточной культуры ткани миокарда вносят асептически стерильно приготовленный раствор стрептокиназы в концентрации 1000 МЕ/мл. До и после внесения стрептокиназы с помощью светового микроскопа в 10 полях культуры визуально учитывают число сокращающихся скоплений кардиомиоцитов и регистрируют частоту сокращений. До добавления стрептокиназы (контроль) в 10 полях наблюдали 4 скопления клеток,сокращающихся с частотой 3-17 сокращений в минуту. После внесения стрептокиназы (опыт) в 10 полях наблюдали 4 скопления клеток, сокращающихся с частотой 7-30 сокращений в минуту. Эта же картина наблюдалась через 24 часа после внесения стрептокиназы. Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет получить культуру ткани сердца с активно сокращающимися кардиомиоцитами 2 10349 1 2008.02.28 при увеличении частоты сокращений в 2-10 раз, возбуждении сократительной способности у скоплений молчащих мышечных клеток и сохранении сократительной функции мышечных элементов до 24 часов после внесения стрептокиназы. С учетом того, что стрептокиназа является фармакологическим препаратом, достаточно доступным для использования, данный способ может найти широкое применение в экспериментальной кардиологии и кардиофармакологии. Источники информации 1. Борисов А.Б. Методы культивирования клеток Сб. науч. трудов. - Л. Наука, 1988, С. 290-299 (прототип). 2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Москва Новая Волна, 2005. - С. 483-484. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3