Способ приготовления эритроцитарного диагностикума на основе вируса диареи крупного рогатого скота

(12) ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ ведомство РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬДИАГНОСТИКУМА НА ОСНОВЕ ВИРУСА ДИАРЕИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТАСпособ приготовления эритроцитарного диагностикума на ОСНОВЕ вируса диареи КруПНОГО рогатого скота, предусматривающий сенсибилизацию стабилизированных эритроцитов антигеном вируса диареи с помощью конъюгирующего агента, отличающийся тем, что для СЕНСИОИЛИЗЗЦНИ ЭРИТРОЦИТОВ ИСПОЛЬЗУЮТ штамм вируса диареи крупного рогатого скота ВК-1 М 928 в концентрации 55-6,5 1032 ТЦД(71) Заявитель Белорусский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского (ВЧ)(73) Патентообладатель Белорусский научноисследователъский институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесскою50/мл, а в качестве конъюгирующего агента используют смесь, состоящую из 01-ного раствора хлорного хрома и раствора трипапового синею в разведении 1500 при соотношении 51.(56) 1. Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Частная вете ринарная вирусология. М. Колос, 1979. 03423419.Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, и в частности к диагностике вирусных болезней животных.При изготовлении диагностических препаратов, используемых при диагностике вирусной диареи крупного рогатого скота, применяются референтные штаммы вирусов. Выделенные За рубежом Орегон С-24 У, ЫАВЬ, зтцааегт,Ыеу-Шогк и др. 1.В отечественных диагностических препаратах используется в основном референтный штамм Орегон С-24 У, но штаммы вирусов,выделенные в нашей стране для изготовления диагностикумов не применяются.Для повышения чувствительности диагностикума на основе вируса диареи для сенсибилизации используют вакцинный штамм вируса ВК-1 19928 и для улучшения связывания вирусного антигена со стромой эритроцитов используется смесь О,1-ного раствора хлорида хрома с раствором трипанового синего в разведении 1500 при соотношении компонентов 51.Штамм вируса диареи крупного рогатого скота (Воуппе утга 1 сНаггЬае шпсоза (йзеазе) ВК 1 Ы 928 выделен из селезенки больного теленка и предназначен для изготовления живой вирус-вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота.Существенным отличием предлагаемого способа изготовления эритроцитарного диагностикума от известных является то, что при сенсибилизации стабилизированных акролеином, танизированпых эритроцитов крупного рогатого скота в качестве вирусного антигена используется штамм вируса диареи крупного рогатого скота ВК 1 Ы 928 в титре 5,5-6,5 1 ТЦД 50/ мл и конъюгирующими агентами являются 0,1 раствор хлорида хрома с раствором трипанового синего 11500 в соотношении 51.Обоснованием для применения трипанового синего как дополнительного конъюгирующего вещества является то, что он взаимодействует с неживыми клетками и белками. В данном изобретении носитель антигена, стабилизированные акролеином эритроциты и вирусный антиген присоединяют триггановый синий, что усиливает сорбцию антигена на эритроцитах.Предлагаемый способ приготовления эритроцитарного диагностикума с антигеном вируса диареи крупного рогатого скота предлагается для выявления диагностически ценных антител у животных, переболевших вирусной диареей, вакцинированных вирус-вакциной, а также при определении качественного состава сывороточных биологических препаратов.Пример. Кровь получают от клинически здоровых бычков возрастом 8-18 месяцев из яренной вены в колбу со стеклянными бусами и дефибринируют. Эритроциты отмывают 3-х кратно изотоническим раствором натрия хлорида до исчезновения белка в надосадочной жидкости путем центрифугирования при 2-3 тыс. об/ мин. Эритроциты стабилизируют путем соединения равных частей 10-ной суспензии эритроцитов И 0,2-ного раствора акролеина (акрилового альдегида) на фосфатном буферном растворе (ФБР) рН 7,2 иконтакта 30-45 минут при 37 С. Стабилизированные эритроциты отмывают ФБР 2-3 раза до исчезновения запаха акролеина. Их хранят при 24 С в течение 4-х лет без потери способности к сорбции вирусных антигенов.Танизацию эритроцитов производят путем соединения 5 -ной взвеси стабилизированных акролеином эритроцитов и раствора танина 1220000 в соотношении 11. Смесь выдерживают в течение 30-40 минут при 37 С, после чего 2 раза отмывают ФБР и 2 раза изотоническим раствором натрия хлорида (для удаления фосфат-ионов). Сенсибилизацию стабилизированных акролеином, танизирован ных эритроцитов крупного рогатого скота осуществляли путем соединения компонентов в следующих пропорциях- 50 И, -ная суспензия стабилизированных акролеиномланизированных эритроцитов крупного рогатого скотаиз штамма ВК 1 Ы 928натрия хлорида рН 7,2в разведении 1500 на изотоническом растворе натрия хлорида- 0,1 -ный раствор хлорида хрома на изотоническом растворе натрия хлорида свежеприготовленный - 5 частей.Компоненты тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут при комнатной температуре, после чего сенсибилизацию останавливают 10-ти кратным количеством 0,02 М ФБР и в конце после 2-х кратного Центрифугирования осадок ресуспендируют в 0,3-ном фенолизированном изотоническом растворе натрия хлорида с 1-ом нормальной кроличьей или лошадиной сыворотки, инактивированной при 56 С в течение 30 минут и абсорбированной нормальными эритроцитами крупного рогатого скота при 37 С в течение 30 минут.Хранится полученный эритроцитарный диагностикум, приготовленный на основе вируса диареи при 24 С в течение 12 месяцев без потери активности.Государственное патентное ведомство Республики Беларусь.