Средство для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных “Апистимулин-А”, способ его получения и способ стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ СРЕДСТВО ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ АПИСТИМУЛИН-А,СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ(73) Патентообладатель Красочко Петр Альбинович(57) 1. Средство для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных Апистимулин-А, включающее гидролизат перги, отличающееся тем, что оно содержит щелочной гидролизат перги. 2. Способ получения средства для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных, включающий гидролиз перги, отличающийся тем, что соты с пергой смешивают с 3-4-ным раствором гидроокиси натрия в соотношении 15, выдерживают в течение 30-45 мин при температуре 95-100 С. 3. Способ стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных, включающий пероральное введение гидролизата перги, отличающийся тем, что используют щелочной гидролизат перги,который вводят интрамускулярно в дозе 0,5-1,0 мг/кг 3-4 раза с интервалом 3-5 дней. Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к средствам для стимуляции иммунной системы животных, способам их получения и способам стимуляции иммунной системы животных. Известно средство для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных,включающее кислотный гидролизат пыльцы 1. Это средство предназначено для перорального использования, что может вызвать у сенсибилизированных моногастричных животных аллергические реакции. Известен способ получения средства для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных, включающий кислотный гидролизат пыльцы 1. Полученный кислотный гидролизат предназначен для перорального использования, вводится в корм в значительных количествах - 2-4 от суточной потребности, концентратов, что удорожает стоимость корма. Известен способ стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных, включающий ежедневное скармливание им кислотного гидролизата пыльцы 1. Однако скармливание кислотного гидролизата пыльцы животным приводят к нерациональному использованию сырья (пыльцы) и вызывает аллергию у животных. Задачей настоящего изобретения является создание средства, обеспечивающего снижение аллергенности и количества его введения, а также рациональное использование сырья (пыльцы или перги). Поставленная задача достигается тем, что средство для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных, включающее гидролизат перги, содержит щелочной гидролизат перги. В способе получения средства для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных, включающем гидролизат 2889 1 перги, соты с пергой смешивают с 3-4 -ым раствором гидрооксида натрия в соотношении 15, выдерживают 30-45 минут при температуре 95-100 С. В способе стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных, включающем введение им гидролизата перги, используют щелочной гидролизат перги, который вводят интрамускулярно в дозе 0,5-1,0 мг/кг 3 раза с интервалом 3-5 дней. Используемое средство из пчелиной перги не обладает аллергенными, токсическими свойствами, но в то же время активизирует Т- и В-систему лимфоцитов, фагоцитарную активность нейтрофилов, увеличивает титр интерферона, повышает активность лизоцима и бактерицидную активность сыворотки крови. Пример 1. Щелочной гидролизат перги - средство Апистимулин-А получают путем термогидролиза пчелиной перги с помощью 3-4 -ного раствора едкого натра в течение 30-45 минут при температуре 95-100 С. Компоненты берут из расчета 15 (на 1 часть перги с сотами, в которой не менее 75 ячеек, заполненных пыльцой, добавляют 5 частей 3-4 -ного раствора едкого натра на дистиллированной воде). После проведения гидролиза проводят его фильтрацию с помощью фильтров с размером пор 0,5-1 мм для отделения от грубых механических примесей и негидролизованных сот с пергой. Фильтрацию проводят сразу после гидролиза не допуская остывания раствора. Полученный щелочной гидролизат (концентрат) хранят при температуре 24 С для последующего определения концентрации сухих веществ, подлинности и биологической активности. Готовые лекарственные формы получают путем разведения концентрата до 25,01,0 мг/мл (жидкая форма) или 85,01,0 мг/мл (лиофильно высушенная форма). Пример 2. Изучение острой токсичности щелочного гидролизата перги Апистимулина-А проведено на белых мышах и белых крысах. На мышах испытано 4 дозы (500,0 1000,0 2000,0 3000,0 мг/кг), а на белых крысах 6 доз (500,0 1000,0 2000,0 5000,0 10000 15000,0 мг/кг) гидролизата перги Апистимулина-А, который вводился внутрижелудочно с помощью полой иглы. За экспериментальными животными вели постоянные клинические наблюдения в течение 14 дней. При этом учитывалось общее состояние, двигательная активность, поведенческие реакции, поедаемость корма, выживаемость. По окончании острых опытов экспериментальные животные были убиты для патологоанатомических исследований внутренних органов. Результаты исследований острой токсичности щелочного гидролизата перги Апистимулина-А представлены в табл. 1 и 2. Из таблиц 1 и 2 видно, что внутрижелудочное введение мышам и крысам Апистимулина-А в указанных дозах не вызывало гибели и не сопровождалось какими-либо отклонениями в физиологическом состоянии животных. На вскрытии убитых мышей и крыс не обнаружено патологоанатомических изменений внутренних органов /печень,почки, сердце, желудок и кишечник/. Таким образом, Апистимулин-А при внутрижелудочном введении не токсичен для белых мышей и белых крыс. Эксперименты по изучению хронической токсичности проведены на белых крысах. В хроническом опыте Апистимулин-А вводили внутримышечно на протяжении 3-х недель в дозах 0,5 1,0 5,0 и 10,0 мг/кг массы тела. Расчет доз Апистимулина-А для внутримышечного введения проводили по сухому веществу, содержащемуся в нм. В течение опыта за экспериментальными животными вели постоянные клинические наблюдения, регистрировали общее состояние, двигательную активность, заболеваемость и гибель. В конце опыта крысы были подвергнуты декапитированию, отобраны пробы крови для гематологических и биохимических исследований, изучено состояние внутренних органов и определены их весовые коэффициенты. Результаты испытаний свидетельствуют, что 3-х недельное внутримышечное введение АпистимулинаА в дозах 0,5 1,0 5,0 и 10,0 мг/кг массы тела не сопровождалось какими либо признаками интоксикации, не отмечено отклонений в физиологическом состоянии, а также не установлено гибели крыс. Проведенные гематологические исследования (табл.3) показали, что содержание эритроцитов у подопытных крыс, получавших Апистимулин-А в дозах 0,510,0 мг/кг было достоверно более высоким, чем у крыс контрольной группы. Причем наблюдается зависимость, что с увеличением дозы Апистимулина-А увеличивается и содержание эритроцитов в крови. Уровень гемоглобина у крыс подопытных групп достоверно не отличался от аналогичного показателя контрольной группы. Количество лейкоцитов у крыс, подвергшихся воздействию препарата в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг было достоверно более высоким по сравнению с контрольными животными. В то же время под влиянием Апистимулина-А в более высоких дозах (5,0 и 10,0 мг/кг) у крыс наблюдается достоверное снижение количества лейкоцитов. Следует отметить, что изменение содержания клеток крови (эритроцитов и лейкоцитов) у подопытных крыс не выходило за пределы физиологических колебаний у данного вида животных. Результаты биохимических исследований крови крыс приведены в табл. 4. Содержание общего белка в крови подопытных крыс, подвергшихся воздействию Апистимулина-А в дозах 0,5 1,0 5,0 и 10,0 мг/кг массы тела было достоверно более низким по сравнению с контрольными животными. 2889 1 Внутримышечное введение Апистимулина-А крысам сопровождалось изменениями активности трансфераз. Отмечена тенденция, что с увеличением дозы Апистимулина-А с 0,5 до 10,0 мг/кг снижалась активность аспартат- и аланинтрансфераз. Так, с увеличением дозы Апистимулина-А с 0,5 до 10,0 мг/кг отмечено достоверное снижение активности аланинтрансферазы с 71,1 до 55,8 объемных единиц. Аналогичная закономерность выявлена и при исследовании аспартатаминотрансферазы, однако достоверное изменение активности отмечено лишь у крыс, которым вводили Апистимулин-А в дозе 0,5 мг/кг массы. Установлено, что, активность глутамилтрансферазы увеличивалась с увеличением дозы АпистимулинаА и имела достоверное отличие у крыс, получавших Апистимулин-А в дозах 5,0 и 10,0 мг/кг. При вскрытии крыс, декапитированных после 3-х недельного введения Апистимулина-А в дозах 0,510,0 мг/кг не было выявлено патологоанатомических изменений внутренних органов (печени, почек,сердца). В местах инъекций (мышцы бедра левой и правой лапки) Апистимулина-А отсутствуют какие либо изменения (абсцессы, инфильтраты, уплотнения) со стороны тканей, прилегающих к месту введения. Определены весовые коэффициенты печени, почек и сердца. Результаты приведены в табл. 5. Из таблицы видно, что у крыс, которым внутримышечно вводили Апистимулин-А в дозе 10,0 мг/кг прослеживается достоверное изменение весового коэффициента почек, т.е, происходит увеличение массы органа. Таким образом, после 3-х недельного парэнтериального введения крысам Апистимулина-А в дозах 0,51,0 мг/кг массы тела выявлен стимулирующий эффект, проявляющийся в увеличении числа эритроцитов,лейкоцитов и повышении активности аспартат- и аланинтрансфераз. С увеличением дозы Апистимулина-А/5,0 - 10,0 мг/кг) происходит снижение числа лейкоцитов и повышение уровня сахара в крови, снижается активность аспартат- и аланинтрансфераз, повышается активность глутамилтрансферазы. Оценка аллергенных свойств Апистимулина-А проведена на 2-х видах животных кроликах и крысах. В эксперименте на крысах после 3-х недельного введения Апистимулина-А в дозах 0,5-10,0 мг/кг в конъюнктивальный мешок левого глаза закапывали Апистимулин-А, а в правый - изотонический раствор натрия хлорида. Реакцию конъюнктивы на воздействие препарата учитывали в течение суток. В эксперименте на кроликах, которым внутримышечно в течение 3-х недель вводили Апистимулин-А в дозах 0,5 1,0 и 5,0 мг/кг развитие сенсибилизации оценивали по реакции конъюнктивы и внутрикожной пробе. При внутрикожной пробе Апистимулин-А в дозе 0,1 мл вводили внутрикожно. Контрольным кроликам в качестве плацебо вводили внутрикожно- изотонический раствор натрия хлорида. Тестирование реакции проводили в течение 48 часов. При глазной пробе кроликам в конъюнктивальный мешок левого глаза закапывали Апистимулин-А, а в правый -изотонический раствор натрия хлорида и на протяжение 24 часов наблюдали за реакцией слизистой оболочки. Результаты оценки аллергенных свойств Апистимулина-А приведены в табл. 6 и 7. Из таблиц 6 и 7 видно, что после 3-х недельного парэнтериального введения Апистимулина-А в дозах для крыс 0,510,0 мг/кг и для кроликов 0,55.0 мг/кг, конъюнктивальная и внутрикожная пробы были отрицательными. Таким образом, на кроликах так же как и на крысах установлено, что Апистимулин-А при парэнтериальном введении аллергенными свойствами не обладает. Пример 3. Для изучения влияния средства Апистимулин-А на иммунную систему телят был проведен опыт на данном виде животных. Было сформировано 6 групп телят возрастом 3-4 месяца живой массой 60-70 кг. Телят 1-ой опытной группы обрабатывали Апистимулином-А в дозе 0,5 мг/кг массы тела 2-й группы - 1,0 мг/кг З-ей групп - 5,0 мг/кг 4-й группы 10 мг/кг 5-й группы (клинически больные телята с признаками пневмоэнтеритов) - 1,0 мг/кг 6-я группа - контрольные клинически здоровые телята. Животных обрабатывали трехкратно с интервалом в 3 дня. Для исследования была взята кровь до обработок, через 8 и 15 дней. В крови изучались основные показатели клеточного (лимфоциты, Т- и В-лимфоциты, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс) и гуморального иммунитета (титр интерферона, бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови). Результаты исследований представлены в табл. 8 и 9. Изучение клеточного иммунитета при обработке телят Апистимулином-А в разных дозах показало, что наиболее эффективными являются дозы 0,5 и 1,0 мг/кг. При этом, Апистимулин-А в основном активизирует Т-систему лимфоцитов, и в несколько меньшей степени - В-систему лимфоцитов. Обработка телят Апистимулином-А способствует активизации фагоцитарной активности нейтрофилов. Особенно активизируется фагоцитоз при обработке телят препаратом в дозе 1,0 мг/кг, хотя и другие дозы также вызывают значительные изменения в его активности. Изучение гуморального иммунитета при обработке телят Апистимулином-А показало, что он способствует активизации биосинтеза интерферона и лизоцима. Бактерицидная активность сыворотки крови изменяется незначительно по сравнению с исходными данными и показателями животных контрольной группы. Особенно характерно воздействие средства Апистимулин-А на иммунную систему клинически больных телят, у которых отмечен иммунодефицит. Их обработка способствует активизации угнетенных звеньев иммунитета и восстановления их до уровня показателей клинически здоровых животных. Это относится к ак 3 2889 1 тивности фагоцитоза. содержанию Т- и В-лимфоцитов, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, титру интерферона. Таким образом, использование препарата Апистимулин-А способствует активизации иммунитета как у здоровых животных, так и у больных с угнетенными звеньями иммунной системы. Пример 4. Проведение лабораторных исследований опытных серий средства Апистимулин-А на лабораторных и сельскохозяйственных животных показало его высокую иммунологическую активность. Все это послужило основанием для проведения дальнейшей работы по клиническим испытаниям в условиях хозяйств с целью активизации иммунной системы при респираторных заболеваниях телят. Исследования проведены в ряде животноводческих комплексов (колхоз Рассвет Зельвенского района Гродненской области и колхоза Перамога Стародорожского района Минской области) и животноводческой фермы (колхоз им.Дзержинского Сморгонского района Гродненской области). В данных хозяйствах для опыта было обработано Апистимулином-А 1150 телят и 1120 животных было контрольными. Всех опытных телят обрабатывали с профилактической целью (клинически здоровых) или лечебной целью (больных респираторными заболеваниями) средством Апистимулин-А в дозе 1,0 мг/кг трехкратно (интервал 5 дней для профилактики и 3 дня для терапии). При лечении телят параллельно использовались антибактериальные препараты. Результаты производственных испытаний представлены в табл. 10. Из данных, представленных в таблице, видно, что введение в комплекс лечебно-профилактических мероприятий щелочного гидролизата перги Апистимулина-А позволяет значительно снизить заболеваемость и отход телят от респираторных заболеваний. Так, после обработки телят Апистимулином-А заболеваемость сократилась с 66,7-95 до 22-32,5 в зависимости от технологии содержания животных. Отход при этом сократился также с 17,3-23,3 до 4,8-7 . Среднесуточный прирост живой массы у обработанных телят возрос на 84-145 г. Таблица 1 Острая токсичность Апистимулина-А для мышей при интрагастральном введении Доза Мг/кг 500 1000 2000 3000 Контроль плацебо Летальность за указанные сроки (дни) 3 7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 14 0 0 0 0 0 Таблица 2. Острая токсичность Апистимулина-А для крыс при интрагастральном введении Летальность за указанные сроки (дни) 3 7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Гематологические показатели крови у крыс после 3-х недельного введения Апистимулина-А Группы животных, получавших Апистимулин-А в дозах 0,5 мг/кг 1,0 мг/кг 5,0 мг/кг 10,0 мг/кг Контроль Примечание Жирный текст и курсив - достоверное отличие от контроля. 4 2889 1 Таблица 4 Биохимические показатели крови у крыс после 3-х недельного введения Апистимулина-А Показатели Общий белок, г/л Глюкоза, ммоль/л Аспартатаминотранс-фераза. И/Л Аланинаминортранс-фераза,И/Л Глутамил трансфераза, И/Л Примечание 1 И/Л - объемная активность. Примечание 2 Жирный текст и курсив - достоверное отличие от контроля. Таблица 5 Весовые коэффициенты органов у крыс, получавших Апистимулин-А в течение 3-х недель Группы опытных животных и доза Почки Сердце Печень препарата Группа 1, 0,5 мг/кг 9,650,4 4,80,3 49,52,2 Группа 2, 1,0 мг/кг 9,950,3 4,80,1 48,82,2 Группа 3, 5,0 мг/кг 9,980,5 4,40,47,61,9 Группа 4, 10,0 мг/кг 11,480,8 4,50,3 46,31,3 Контроль 9,030,2 4,20,2 44,72,3 Примечание 1 весовой коэффициент - это относительная величина, определяющая отношение веса органа ( в мг) к весу тела ( в г). Примечание 2 Жирный текст и курсив - достоверное отличие от контроля. Таблица 6 Реакция конъюнктивы у крыс на воздействие Апистимулина-А при 3-х недельном введении Группы опытных животных и доза препарата Таблица 7 Конъюнктивальная и внутрикожная пробы у кроликов при 3-х недельном парэнтеральном введении Апистимулина-А Группы опытных животных и доза препарата 1 Группа 1, 0,5 мг/кг Группа 2, 1,0 мг/кг Группа 3, 5,0 мг/кг 1 Группа 4, 10,0 мг/кг Контроль Наличие реакции Конъюнктивальная проба Внутрикожная проба 3 часа 6 часов 24 часа 3 часа 6 часов 24 часа 2 3 4 5 6 7 отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. 2 3 4 5 6 7 отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр,отр. отр. отр. отр. 5 2889 1 Таблица 8 Показатели состояния клеточного иммунитета у телят после обработки различными дозамиА п и с т и м у л и н а- АГруппа Жип/п вотных До обработки Через 8 дней Через 15 дней До обработки Через 8 дней,Через 15 дней До обработки Через 8 дней Через 15 дней До обработки Через 8 дней Через 15 дней До обработки Через 8 дней Через 15 дней До обработки Через 8 дней Через 15 дней Таблица 9 Показатели гуморального иммунитета у телят, получавших различные дозы Апистимулина-А Титр интерферона,28.96.2 Бактерицидная активность сыворотки крови,76.22.37 Лизоцим, мкг/мл 5.950.64 Титр интерферона,31.22.23 Бактерицидная активность сыворотки крови,79.25.8 Лизоцим, мкг/мл 6.980.51 Тигр интерферона,46.73.43 42.23.1 41.23.02 35.62.61 38.92.92 28.82.11 Бактерицидная активность сыворотки крови,81.15.95 83.66.13 78.45.79 80.33.88 79.35.82 75.85.56 Лизоцим, мкг/мл 8.51.87 9.551.05 9.551.05 10.1 З 0.67 8.00.6 6.980.41 2889 1 Таблица 10 Результаты производственных испытаний иммуностимулирующего препаратаА пистимулин-А Показатели Колхоз Перамога Колхоз Рассвет К-з им. Дзержинского п/п Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Количество животных в 300 300 600 600 250 220 1 опыте, голов Заболело респиратор 2 ными заболеваниями, голов 60 200 195 570 78 197 Процент 2066.732.59531.289.6 Отход (падеж и вынуж 3 денный убой Голов 22 70 41 157 12 38 Процент 7.323.36.822.64.817.3 Среднесуточный при 4 рост живой массы, грамм 460 320 389 305 260 115 Длительность лечения 5 заболевших телят, дней 5.1 11.1 4.9 10.1 4.2 9.7 Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 7

МПК / Метки

МПК: A61K 35/78, A61K 35/64

Метки: системы, средство, сельскохозяйственных, животных, иммунной, способ, апистимулин-а, организма, стимуляции, получения

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/7-2889-sredstvo-dlya-stimulyacii-immunnojj-sistemy-organizma-selskohozyajjstvennyh-zhivotnyh-apistimulin-a-sposob-ego-polucheniya-i-sposob-stimulyacii-immunnojj-sistemy-organizma-selskoho.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Средство для стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных &#8220;Апистимулин-А&#8221;, способ его получения и способ стимуляции иммунной системы организма сельскохозяйственных животных</a>

Похожие патенты