Способ дооперационной диагностики распространенности рака мочевого пузыря

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДООПЕРАЦИОННОЙ ДИАГНОСТИКИ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ РАКА МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр онкологии и медицинской радиологии имени Н.Н.Александрова(72) Авторы Державец Лилия Александровна Лаппо Светлана Владимировна Прохорова Виолетта Игоревна Суконко Олег Григорьевич Шишло Людмила Михайловна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии имени Н.Н. Александрова(57) Способ дооперационной диагностики распространенности рака мочевого пузыря, заключающийся в том, что в моче методом иммуноферментного анализа определяют концентрации ядерного матриксного протеина -22, антигена опухоли мочевого пузыряи цитокератина мочевого пузыряи при концентрации -22 от более 12 до 30,4 Е/мл, концентрацииот более 14 до 35 Е/мл и концентрацииот более 15 до 27,8 мкг/л диагностируют поверхностный рак мочевого пузыря, а при концентрации 22 более 30,4 Е/мл и/или концентрацииболее 35 Е/м, и/или концентрацииболее 27,8 мкг/л - инвазивный рак мочевого пузыря. Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, в частности к способам лабораторной диагностики в онкоурологии. Известно, что заболеваемость раком мочевого пузыря растет в большинстве стран, в том числе и в Республике Беларусь. За последние 10 лет в Беларуси ежегодно раком мочевого пузыря (РМП) заболевало 990-1050 человек 1. Основной способ лечения этой категории больных - хирургический, а для определения тактики хирургического лечения(радикальное удаление мочевого пузыря или органосохраняющее лечение) больных раком мочевого пузыря важно на дооперационном этапе определить инвазивный или поверхностный рост опухоли. Это имеет принципиальное значение, так как при поверхностном РМП (отсутствует инвазия опухоли в мышечный слой , , 1001-3) опухоль удаляют трансуретрально 2-6. Но даже при имеющемся арсенале диагностической базы 13555 1 2010.08.30 всех случаях возможно точно установить степень распространенности опухолевого процесса ввиду объективных трудностей 7-10. Для выявления и адекватного стадирования рака мочевого пузыря необходимо применение комплексного обследования, включающего физикальные, инструментальные и лабораторные методы. Ведущую роль в диагностике опухолей мочевого пузыря на сегодняшний день занимает цистоскопия с биопсией, позволяющая оценить количество, локализацию, размеры, характер роста новообразования. Цистоскопия также обязательно используется в послеоперационном наблюдении за больными. Контрольная цистоскопия проводится через каждые 3 месяца в первые 1,5-2 года, в последующие 2 года 1 раз в 6 месяцев 1. Однако цистоскопия наряду с преимуществами имеет и ряд недостатков, среди которых на первом месте стоит неудобство для больного,вероятность осложнений, в первую очередь инфекции, высокая стоимость, необходимость высококвалифицированного персонала 11. В связи с этим в последние годы активно ведется поиск различных клинико-биохимических, молекулярно-биологических факторов прогноза рака мочевого пузыря, позволяющих улучшить диагностику и повысить эффективность противоопухолевого лечения, а также позволяющих отказаться от цистоскопии в послеоперационном периоде в пользу менее инвазивных лабораторных исследований крови и мочи. В течение последних 10 лет в отечественной и зарубежной литературе появляются серии работ, касающихся изучения информативности некоторых биохимических показателей, опухолевых маркеров, цитокинового профиля мононуклеаров для диагностики ранней и инвазивной онкопатологии 12-17. Однако ни один из существующих на сегодняшний день опухолевых маркеров не обладает 100 диагностической чувствительностью и специфичностью, в этой связи актуальным остается поиск высокочувствительных диагностических способов, которые позволят выявлять РМП на его ранних стадиях. Известен способ диагностики ранней и инвазивной онкопатологии у конкретного онкологического больного, предполагающий определение в периферической крови содержания тромбоцитов, эозинофилов, сегментоядерных, палочкоядерных и юных,лейкоцитов, гемоглобина, общего белка, глюкозы, общего билирубина, скорости оседания эритроцитов, цветного показателя, протромбинового индекса крови и расчет диагностических индексов 18. При отсутствии или наличии одного положительного диагностического индекса или значений показателей содержания гемоглобина, тромбоцитов и скорости оседания эритроцитов относительно порогового уровня диагностируют инвазивный рак, а при наличии двух и более положительных показателей дополнительно определяют средний диаметр опухоли, вес больного, содержание моноцитов в крови, тимоловую пробу и вновь рассчитывают диагностические индексы, и при отсутствии положительных значений диагностических индексов и показателя среднего диаметра опухоли относительно порогового уровня диагностируют инвазивный рак, а при наличии одного и более положительного теста опять проводят дополнительное определение. Определяют вес больного, средний диаметр опухоли, общую численность популяции всех лейкоцитов в крови, эритроцитов, тромбоцитов, сегментоядерных, лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов, объем циркулирующей крови, рассчитывают общую популяцию для данных клеток крови, после чего рассчитывают показатели соотношения всех вышеперечисленных параметров на средний диаметр опухоли и при отсутствии положительных показателей относительно порогового уровня диагностируют инвазивный рак, а при наличии одного и более положительных показателей - раннюю онкопатологию. Однако данный способ, включающий расчеты диагностических индексов по сумме показателей, имеет следующие недостатки 1. Не предназначен для дифференциальной диагностики отдельных нозологических форм злокачественных новообразований и в связи с этим имеет низкую диагностическую чувствительность при раке мочевого пузыря. 13555 1 2010.08.30 2. Расчет диагностических индексов осуществляют по неспецифическим клиникобиохимическим показателям, не включены в исследование патогномоничные для рака мочевого пузыря параметры. 3. Требует выполнения многочисленных гематологических, биохимических и антропометрических параметров, что является довольно трудоемким и материально затратным. Известен способ диагностики рака мочевого пузыря, основанный на определении ядерных матриксных белков, входящих в состав оболочки ядра клетки и ассоциированных с репликацией ДНК, синтезом РНК и экспрессией генов, при помощи иммуноферментного анализа 19. Антитела при этом методе распознают ядерный матриксный протеин-22. Материалом для исследования служит моча. Тест проводят сразу после сбора мочи в пластиковый контейнер. Для проведения анализа мочу обследуемого пациента вносят в тест-лунку и спустя 30 мин качественно оценивают результат, который появляется на кассете в виде полосок. Недостатками способа являются Не предназначен для количественного исследования -22 в моче больного, осуществляется только качественное определение маркера. Имеет низкую чувствительность. У пациентов с поверхностной формой РМП диагностическая чувствительность 37 , общая диагностическая чувствительность с впервые выявленным РМП-50 , с рецидивом РМП - 54 . Биологический материал (моча) не может длительно храниться и требует немедленного выполнения теста после сбора, что является неудобным для исследователя. Известен также способ диагностики рака мочевого пузыря, включающий определение опухолевого маркера рака мочевого пузыря 20. Способ основан на иммуноферментном анализе выявления цитокератинового антигенав моче. Антиген представляет собой растворимый фрагмент цитокератинов 8/18, характерных для быстроделящихся клеток эпителия мочевого пузыря. Материалом для исследования служит средняя порция утренней мочи. Его недостатками являются 1. Низкая информативность чувствительность теста с впервые выявленным поверхностном раком мочевого пузыря составляет 53 , при инвазивном раке - 78 . 2. Дает ложноположительные результаты при наличии воспалительных заболеваний мочеполовой системы, мочекаменной болезни, травмы мочевых путей, инструментальных, инвазивных методов исследования в течение трех недель перед проведением теста. Наиболее близким к предлагаемому изобретению по техническому исполнению и принятым за прототип является способ диагностики рака мочевого пузыря по определению недавно разработанных и мало изученных в нашей стране уринологических опухолевых маркеров 21. Суть способа состоит в определении содержания в моче опухолевых маркеров(антигена опухоли мочевого пузыря), -22 (специфического ядерного белка матрицы 22). Недостатками способа являются низкая диагностическая чувствительность каждого из определяемых тестов (64-80 ) и низкая прогностическая значимость(49-84 ). Исследуемые маркеры малоинформативны на ранних стадиях рака, их рекомендуют использовать в дополнение к другим методам диагностики. Задача изобретения - разработать неинвазивный способ дооперационной диагностики распространенности рака мочевого пузыря, обладающий высокой диагностической чувствительностью, доступностью в методическом выполнении и включающий минимальное количество информативных биохимических показателей с высокой степенью корреляционной связи с распространенностью опухолевого процесса. Решение поставленной задачи достигают тем, что у больного с подозрением на рак мочевого пузыря определяют в одной порции мочи такие опухолевые маркеры, как ядерный матриксный протеин -22 (0,85), антиген опухоли мочевого пузыря(0,85), цитокератин мочевого пузыря(0,69), имеющие высокую степень корреляционной связи ( - коэффициент корреляции) с распространенностью опухолевого 3 13555 1 2010.08.30 процесса. Оценку взаимосвязи исследуемых уринологических маркеров со степенью распространенности опухолевого процесса проводят методом рангового корреляционного анализа Спирмена (22). Предложенный способ осуществляется следующим образом. У больного до начала всех видов обследования в чистый сосуд берут одноразовую порцию мочи, находящуюся в мочевом пузыре не менее 3 часов (используют только образцы мочи, произвольно выпущенные). Мочу разливают на аликвоты для определения концентрации - в обычную пробирку для -22 - в пробирку со стабилизатором (прилагается вместе с набором реагентов для определения -22) для мочу центрифугируют 10 мин при 1000 . Образцы мочи можно хранить в морозильнике при -20 С в течение длительного времени. Размороженная моча стабильна и годна к исследованию в течение 14 дней при хранении в холодильнике (2-8 С). Размороженные образцы для исследования -22 могут храниться при комнатной температуре 96 часов. Для исследования концентрации мочевых маркеров используют коммерческие наборы реагентов с индивидуальной схемой тестирования, принцип методов которых основан на количественном иммуноферментном определении растворимых фрагментов цитокератинов 8 и 18 в моче , белка ядерного матрикса 22 (-22), антигена опухоли мочевого пузыря . Полученные в результате исследования значения онкомаркеров сравнивают с дискриминантным уровнем, который рассчитан нами для каждого изучаемого опухолевого маркера (, -22, ), с помощью пакета программ 6(таблица). За дискриминантный уровень (ДУ) конкретного исследуемого показателя принимают величину ср 2, полученную для групп, состоящих из 50 клинически здоровых лиц (нижний предел) и 100 больных поверхностным раком мочевого пузыря (верхний предел). ср - среднее арифметическое значение,- среднеквадратичное отклонение. Среднее арифметическое значение рассчитывают по формуле ср, где- - значение измеренной величины опухолевых маркеров- количество измерений. Среднеквадратичное отклонение рассчитывают по формуле, где- стандартное отклонение- результат последовательного -го измерения ср - среднее значение- количество результатов. Дискриминантные уровни (ДУ) изучаемых показателей Онкомаркеры Единицы измерения ДУ (нижний предел) ДУ (верхний предел) Е/мл 14,0 35,0 В случае, если у обследуемого больного все три маркера превышают ДУ нижнего предела и ни один из маркеров по своему уровню не превышает ДУ верхнего предела, у больного диагностируют поверхностный рак мочевого пузыря с диагностической точностью 87 . При наличии одного, двух или всех трех показателей, значительно превышающих дискриминантный уровень верхнего предела, больного направляют на 4 13555 1 2010.08.30 дополнительное инструментальное обследование с целью определения степени инвазии рака мочевого пузыря. Дополнительная информация является чрезвычайно важной, так как от точности идентификации инвазии рака зависит адекватное лечение больного в дальнейшем. Основные отличительные признаки предлагаемого изобретения 1. Дооперационную диагностику распространенности рака мочевого пузыря осуществляют по комплексу тестов, определяемых современными нетрудоемкими иммуноферментными методами. В одной порции мочи больного исследуют концентрацию трех опухолевых маркеров, не являющихся альтернативными, а дополняющими друг друга,которые в комплексе обладают высокой диагностической чувствительностью и эффективностью, что удовлетворяет требованиям, предъявляемым к диагностическим тестам. 2. Способ является неинвазивным, дает возможность на первом этапе обследования больного цистоскопию не использовать, что позволяет предупредить возникновение негативных побочных эффектов. 3. Способ не требует нахождения больного в стационаре, может использоваться в условиях поликлиники, что способствует рациональному использованию средств, выделяемых на обследование больного. Способ иллюстрируется следующими примерами. Пример 1 Пациент Б.В.Ф., 43 года, а/к 3978/06, ист. болезни 11324/06. 10.08.06 поступил в онкоурологические отделение РНПЦ ОМР им. Н.Н.Александрова с подозрением на рак мочевого пузыря. Сопутствующих заболеваний нет. 11.08.06 проведено определение онкомаркеров- 16,3 мкг/л- 15,0 Е/мл -22 - 14,0 Е/мл. Концентрация всех 3 определяемых онкомаркеров превышает ДУ нижнего предела, но меньше ДУ верхнего предела, у больного диагностируют поверхностный рак мочевого пузыря. 18.08.06 пациенту проводят трансуретральную резекцию (ТУР) мочевого пузыря. Опухоль единичная,папиллярная, на ножке, в диаметре 3 см, локализация - левая боковая стенка. Гистологическое заключение 119860-909 - переходноклеточный рак. Данных за инвазию в мышечный слой нет. Диагноз - рак мочевого пузыря 100,стадия. Пример 2 Пациент Б.М.А., 58 лет, а/к 1119/06, ист. болезни 3688/06. Поступил в онкоурологическое отделение РНПЦ ОМР им. Н.Н.Александрова 13.03.06, подозрение на рак мочевого пузыря. Сопутствующие заболевания артериальная гипертензиястепени,ишемическая болезнь сердца, атеросклероз аорты, ожирениестепени. 14.03.06 больному проведено определение мочевых маркеров- 15,45 мкг/л- 15,8 Е/мл -22 13,0 Е/мл. Концентрация всех 3 определяемых онкомаркеров не превышает ДУ верхнего предела, по данному исследованию у пациента диагностируют поверхностный рак мочевого пузыря. 16.03.06 пациенту проводят трансуретральную резекцию мочевого пузыря. Опухоль единичная. Гистологическое заключение 62093-103 - переходноклеточный рак, участок слизистой оболочки мочевого пузыря с умеренным хроническим воспалением. Диагноз - рак мочевого пузыря, 100,стадия. Пример 3 Пациент А.В.В., 70 лет, а/к 3216/07, ист. болезни 4948/07. Поступил в онкоурологическое отделение РНПЦ ОМР им. Н.Н.Александрова 10.04.07. При обследовании больного установлен клинический диагноз - рак мочевого пузыря. Сопутствующие заболевания ишемическая болезнь сердца, атеросклирический кардиосклероз, атеросклероз аорты, коронарных сосудов. 11.04.07 больному проведено определение мочевых маркеров 100,5 мкг/л- 46,8 Е/мл -22 - 67,0 Е/мл. Концентрация трех определяемых онкомаркеров значительно превышает ДУ верхнего предела, по данному исследованию больному показано дополнительное исследование с целью определения степени инвазии рака мочевого пузыря. 13.04.07 пациенту проводят диагностическую ТУР мочевого пузы 5 13555 1 2010.08.30 ря. Гистологическое заключение 77110-219 - папиллярные структуры переходноклеточного рака, с инфильтрированием, врастанием в мышечный слой стенки мочевого пузыря. Радикальная ТУР невозможна. 05.06.07 больной вновь поступает в онкоурологическое отделение. 18.06.07 больному проводят радикальную цистэктомию с илеоцистопластикой по Хаутманну. Гистологическое заключение 101582-602 - переходноклеточный рак с врастанием в глубокую мышцу. Диагноз - 200,стадия. Пример 4 Пациентка Б.М.П. , 70 лет, а/к 1252/06, ист. болезни 3535/06. Поступила в онкоурологическое отделение РНПЦ ОМР им. Н.Н.Александрова 09.03.06. Клинический диагноз рак мочевого пузыря. Сопутствующие заболевания ишемическая болезнь сердца, атеросклероз аорты, коронарных сосудов, хронический пиелонефрит. 10.03.06 больной проведено определение мочевых маркеров- 49,3 мкг/л- 80,8 Е/мл -22 - 87,0 Е/мл. Концентрация трех определяемых онкомаркеров превышала ДУ верхнего предела. По данным лабораторного исследования пациентке показано дополнительное инструментальное обследование с целью определения степени инвазии рака мочевого пузыря. Пациентке проводят эндоскопическое, рентгенологическое, ультразвуковое исследование и 16.03.06 - диагностическую ТУР мочевого пузыря. Гистологическое заключение 14149 переходноклеточный рак. 17.04.06 - радикальная цистэктомия с илеоцистопластикой по Хаутманну. Гистологическое заключение 74468-95 - низкодифференцированный переходноклеточный рак, прорастание стенки мочевого пузыря и распространение на околопузырные ткани. Диагноз - рак мочевого пузыря, 300,стадия. Таким образом, предлагаемый неинвазивный способ дооперационной диагностики распространенности рака мочевого пузыря обладает высокой информативностью, диагностической чувствительностью и может быть рекомендован к использованию в онкологических урологических отделениях. Источники информации 1. Алгоритм диагностики и лечения злокачественных новообразований / Под ред. члена-кор. НАН Беларуси, д-ра мед. наук, проф. И.В. Залуцкого, д-ра мед. наук, проф. Э.А. Жаврида.- Минск, 2007. - С. 407. 2. Роль органосохраняющего лечения инвазивного рака мочевого пузыря / Б.П. Матвеев, С.Д. Саллум, Б.Ш. Камолов и др. // Урология. - 2005. -3. - С. 3-6. 3. Рекомендации Европейской ассоциации урологов по лечению рака мочевого пузыря// Онкоурология. - 2007. -3. - С. 32-35. 4. Красный С.А. Радикальное хирургическое лечение инвазивного рака мочевого пузыря // Онкоурология. - 2007. -1. - С. 69-73. 5. Аль-Шукри С.Х., Корнеев И.А. Общие принципы лечения больных раком мочевого пузыря. Значение клинических, гистологических и биологических факторов прогноза для выбора метода лечения // Практическая онкология. - 2003. - Т. 4,4. - С. 205-213. 6. Болотина Л.В., Русаков И.Г. Инвазивный рак мочевого пузыря. Современные подходы к лечению // Российский онкологический журнал. - 2007. -6. - С. 47-52. 7. Проточная цитофлуориметрия осадка мочи в диагностике рака мочевого пузыря / А.Д. Каприн, В.К. Боженко, Т.М. Кулинич и др. // Вопр. онкологии. - 2006. -5. - С. 579581. 8. Мартов А.Г., Гнатюк А.П. Современные эндоскопические методы диагностики и лечения поверхностного рака мочевого пузыря // Онкологическая урология от научных исследований к клинической практике материалы конф.- М., 2004. - С. 37-40. 9. Матвеев В.Б. Фотодинамическая диагностика рака мочевого пузыря.-съезд онкологов и радиологов СНГ. Избранные лекции и доклады, Баку, 28 сент.- 1 окт., 2006 г. / НЦО Минздрава Азербайджанской Республики. - Баку, 2006. - С. 208. 6 13555 1 2010.08.30 10. Мазо Е.Б. , Беличенко О.И., Шария М.А., Концедалов Д.В. Магнитно-резонансная томография в диагностике и стадировании рака мочевого пузыря // Урология. - 2000.1. - С. 43-45. 11./ , , . , // . - 2000. - . 56,3. - . 37-39. 12. Воробьев А.В. Обзор важнейших событий в онкоурологии // Практ. онкол. - 2005. Т. 6,1. - С. 58-60. 13..// . - 2005. - . 168,5. - . 1955-1959. 14.// . . - 2005. - . 47, 6. - . 736-748. 15. Шелепова В.М., Кадагидзе З.Г. Опухолевые маркеры в современной клинической практике // Вест. Московского онкологического общества. - 2007. -1. - С. 2-3. 16. Цитокиновый профиль мононуклеаров плазмы крови как маркер стадии рака мочевого пузыря / П.В. Глыбочко, А.Н. Понукалин, Н.Б. Захарова и др.// Онкоурология. Материалыконгресса Российского общества онкоурологов.- Москва, 4-5 октября 2007. 2007. - С. 76-77. 17. Сергеева Н.С. Серологические опухолеассоциированные маркеры в мониторинге онкологических больных //съезд онкологов и радиологов СНГ Материалы съезда 14-16 мая 2008 г. - Ташкент, 2008. - С. 136. 18. Патент РФ 2133466. Способ диагностики ранней и инвазивной онкопатологии у конкретного онкологического больного, 1999, МПК 01 33/48. 19. Эффективность определения специфического ядерного белка матрицы 22 в моче при диагностике рака мочевого пузыря // Урология. - 2006. -6. - С. 48-51. 20. Паршина В.Н., Серегин И.В., Самойленко В.М. Роль опухолевого маркерав диагностике рака мочевого пузыря // Онкоурология Материалыконгресса Российского общества онкоурологов. - Москва, 4-5 октября 2007. - С. 103. 21..,.//. - 2007. - . 30,1. - . 38-45 (прототип). 22. Плавинский С.Л. Биостатистика планирование, обработка и представление результатов биохимических исследований при помощи системы . - СПб. Издательский дом СПбМАПО, 2005. - С. 115-120. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.

МПК / Метки

МПК: G01N 33/50

Метки: способ, дооперационной, пузыря, мочевого, рака, диагностики, распространенности

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/7-13555-sposob-dooperacionnojj-diagnostiki-rasprostranennosti-raka-mochevogo-puzyrya.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ дооперационной диагностики распространенности рака мочевого пузыря</a>

Похожие патенты