Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Косинец Александр Николаевич Окулич Виталий Константинович Косинец Владимир Александрович Погоцкий Алексей Константинович Плотников Филипп Викторович Шилин Владимир Евгеньевич Федянин Сергей Дмитриевич Пинчук Алина Николаевна Мацкевич Елена Леонидовна(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(57) Тест-система для идентификации облигатно-анаэробных микроорганизмов, содержащая лунки с дегидрированными субстратами, отличающаяся тем, что выполнена в виде комплекта, включающего 96-луночный разборный плоскодонный планшет, состоящий из эластичного пластикового каркаса с механизмом защелкивания отдельных рядов лунок, 4 флакона деионизированной воды, 4 наконечника стерильных для автоматической пипетки вместимостью 200 мкл.(56) 1..,.,.,( 96)/. . 37(6). - 1999. - . 1824-1828 (прототип). 2. Свидетельство РБ о регистрации компьютерной программы 015, 2008. 92432013.06.30 Полезная модель относится к медицине, а именно к бактериологии, и может быть использована для идентификации облигатно-анаэробных микроорганизмов. Прототипом предложенной полезной модели является тест-система 32 фирмы(Франция) 1. Она предназначена для идентификации анаэробных микроорганизмов через 4-6 ч. В набор входит 29 тестов. Стрип 32 состоит из 32 микролунок, 29 из которых содержат дегидрированные субстраты. По окончании инкубации (4-6 ч) в аэробных условиях стрип читается визуально или на установках АТВили. Идентификация осуществляется при помощи программного обеспечения. Постановку идентификации облигатно-анаэробных бактерий проводят следующим образом. Пересевают культуру из одной изолированной колонии в свежеприготовленную чашку с кровяным агаром (агар Коламбиа 5 лошадиной или бараньей крови,витамин К 3). Инкубируют при 362 С в анаэробных условиях 24 ч. Подготавливают стрип. Удаляют поглотитель влаги. Накрывают стрип крышкой. Записывают информацию об образце на предназначенном для этого ярлыке. Приготавливают суспензию. Вскрывают ампулу со средой для приготовления 2 мл суспензии. Тампоном собирают всю биомассу с поверхности кровяного агара и переносят в ампулу. Готовят суспензию плотностью, равной 4 единицы МакФарланда (денситометр , стандарты МакФарланда). Суспензию вносят в стрип сразу после приготовления. Учет результатов проводят визуальным и инструментальным методами. ЛунТест ка 1.0 1.1 уреаза желтая красная аргининдигидролаза желтокрасная оранжевая желтоголубая зеленая бесжелтая цветная/5 мин 10 мин образование индола бесрозовая цветная/5 мин 10 мин щелочная фосфатаза бес- пурпурцветная ная пропинариламидаза лейцилглицинариламидаза восстановление нитратов беспироглюгаматарил- цветная 0.8-тирозиннафтиламид 0,044 оранжебледноамидаза вая оран-аланилаланин-0.90,052 тирозинариламидаза жевая нафтиламид 0.-глициннафтиламид 0,048 аланинариламидаза 0.-гистидиннафтиламид 0,04 глицинариламидаза-нафтиламид глютаминглютамат 0.-сериннафтиламид 0,068 ариламидаза 0.0,04 серинариламидаза 0. Пустая лунка Недостатками прототипа является то, что не все субстраты, имеющиеся в тестсистеме, по которым идентифицируются облигатно-аназробные микроорганизмы, доступны из-за высокой стоимости в лабораториях Республики Беларусь. Кроме того, стоимость тест-системы прототипа для идентификации только одного штамма обходится более 50000 белорусских рублей. Задача полезной модели создать тест-систему для идентификации облигатно-анаэробных микроорганизмов, позволяющую одномоментно идентифицировать от 1 до 4 микроорганизмов с использованием меньшего количества тестов. 3 92432013.06.30 Реализация данной задачи осуществляется за счет того, что после посева исследуемого материала на питательную среду для выращивания облигатно-анаэробных микроорганизмов производят идентификацию сразу 4-х микроорганизмов, используя комплект, включающий 96-луночный плоскодонный планшет с дегидрированными субстратами, состоящий из разборных рядов лунок, 4 флакона стерильной деионизированной воды, 4 наконечника стерильных для автоматических дозаторов вместимостью 200 мкл. Предложенная полезная модель работает как единое целое. Предложная полезная модель поясняется следующими материалами на фигуре изображен внешний вид комплекта тест-системы. Предложенная тест-система для идентификации облигатно-анаэробных микроорганизмов представляет комплект, включающий разборный планшет (1), состоящий из эластичного пластикового каркаса (2) с механизмом защелкивания (3) и отдельных прозрачных рядов лунок (4), выполненных из пластмассы с дегидрированными субстратами, стерильную деионизированную воду во флаконах по 5 мл - 4 шт. (5), наконечники стерильные для автоматических дозаторов вместимостью 200 мкл - 4 шт. (6). Разборный плоскодонный планшет может содержать от 24 до 96 лунок (12 колонок и 8 рядов, из них по 2 ряда (24 лунки) для идентификации одного облигатно-анаэробного микроорганизма) с налетами разных цветов на дне лунок, контрольная лунка - без налета. Последние две лунки каждого четного ряда не содержат субстрата. В зависимости от объема необходимых исследований в данной конкретной лаборатории планшет, благодаря разборной конструкции, позволяет идентифицировать от 1 до 4 штаммов микроорганизмов. При необходимости идентификации одного штамма микроорганизма в планшет благодаря механизму защелкивания вставляют только два ряда лунок, что является в данном случае экономически обоснованным. В случае если необходимо провести идентификацию двух облигатно-анаэробных микроорганизмов в планшет вставляют 4 ряда лунок с необходимыми тестами. Таким же образом собирают планшет для идентификации трех облигатно-анаэробных микроорганизмов - вставляют 6 рядов лунок и четырех микроорганизмов - вставляют 8 рядов лунок. Идентификацию облигатно-анаэробных микроорганизмов проводят следующим образом. Готовят взвесь микроорганизмов. Для этого бактериологической петлей вносят одну или более колоний микроорганизмов, выращенных в течение 18-24 ч при 37 С на селективной среде для облигатно-анаэробных микроорганизмов в стерильный флакон с 2 мл деионизированной воды. Оптическая плотность взвеси в пробирке после внесения микроорганизма должна соответствовать 4 оптическим единицам . Оптическую плотность определяют, используя стандарты Мак-Фарланда или денситометрили АТВ . Сразу после приготовления вносят по 150 мкл взвеси микроорганизмов в лунки планшета. Добавляют по 2 капли минерального масла в лунки (Моч) Мочевина (лунки 1, 1, 1,1). Накрывают планшет крышкой, инкубируют при 362 С в течение 4-6 ч в аэробных условиях. Для оценки результатов готовят соответствующие реактивы реактив Джеймс и реактив Фаст Блю. Для приготовления реактива Джеймса вносят во флакон 1 с реагентом Джеймс содержимое флакона 2 1 М соляной кислоты. Для приготовления реактива Фаст Блю (ФБ) вносят во флакон 3 с реагентом ФБ содержимое флакона 4 (растворитель для ФБ). Вносят в лунки по одной капле следующих реактивов лунка Нит (лунки 1, 1, 1, 1) - НИТ 1 (смесь сульфаниловой и уксусной кислот дополнительный реагент для учета теста восстановления нитратов)НИТ 2 (диметилнафтиламид - дополнительный реагент для учета теста восстановления нитратов) лунка Инд (-триптофан) (лунки 2, 2, 2, 2) - Джеймс лунки от Пал (2-нафтилфосфат) до СерА (-сериннафтиламид) (3-10, 3-10,3-10, 3-10) - ФБ. 4 92432013.06.30 Учет результатов проводят визуальным или инструментальным методами. Тест 1 Моч Арг Гал Гал Гл ю Глю Гур Наг Фук желтоголубая зеленая НИТ 1 НИТ 2/ восстановление 5 мин 10 мин нитратов Бесцветная красная Джеймс/5 мин 10 мин образование индола бесцветная розовая ФБ/5 мин 10 мин щелочная фосфотаза бесцветная розовая ФБ/5 мин 10 мин (Араргининариламидаза гАСерА) Инструментальный учет производят на иммуноферментном анализаторе Ф 300 с помощью программного обеспечения 2. Применение предложенной тест-системы для идентификации облигатно-анаэробных микроорганизмов позволяет уменьшить стоимость идентификации одного облигатноанаэробного микроорганизма с 50000 белорусских рублей при использовании зарубежного аналога до 10000 белорусских рублей. 5 92432013.06.30 Использование разборного планшета позволяет в случае необходимости идентифицировать любое (от 1 до 4) число облигатно-анаэробных микроорганизмов в зависимости от потребности, что, в свою очередь, позволяет экономически целесообразно использовать дорогостоящие реактивы. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6

МПК / Метки

МПК: C12N 1/00

Метки: микроорганизмов, тест-система, идентификации, облигатно-анаэробных

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/6-u9243-test-sistema-dlya-identifikacii-obligatno-anaerobnyh-mikroorganizmov.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Тест-система для идентификации облигатно-анаэробных микроорганизмов</a>

Похожие патенты