Способ диагностики спонтанного бактериального перитонита у больного циррозом печени с асцитом

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СПОНТАННОГО БАКТЕРИАЛЬНОГО ПЕРИТОНИТА У БОЛЬНОГО ЦИРРОЗОМ ПЕЧЕНИ С АСЦИТОМ(71) Заявитель Гавриленко Дмитрий Иванович Силивончик Наталья Николаевна Малаева Екатерина Геннадьевна Кобрусева Лариса Аркадьевна Шпаковский Юрий Петрович Шулькина Елена Васильевна(72) Авторы Гавриленко Дмитрий Иванович Силивончик Наталья Николаевна Малаева Екатерина Геннадьевна Кобрусева Лариса Аркадьевна Шпаковский Юрий Петрович Шулькина Елена Васильевна(73) Патентообладатели Гавриленко Дмитрий Иванович Силивончик Наталья Николаевна Малаева Екатерина Геннадьевна Кобрусева Лариса Аркадьевна Шпаковский Юрий Петрович Шулькина Елена Васильевна(56) Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике. - Киев Выща школа, 1988. С. 189-192.2007128172 , 2009.2235325 2, 2004.(57) 1. Способ диагностики спонтанного бактериального перитонита у больного циррозом печени с асцитом, отличающийся тем, что осуществляют забор асцитической жидкости,определяют в ней содержание лейкоцитов по активности лейкоцитарной эстеразы и диагностируют спонтанный бактериальный перитонит при содержании лейкоцитов выше 250 в 1 мкл. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что содержание лейкоцитов определяют с использованием тест-полоски для определения лейкоцитов в моче. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что перед определением лейкоцитов в асцитической жидкости определяют содержание эритроцитов, которые удаляют центрифугированием при их количестве более 10000 в 1 мкл. Изобретение относится к области медицины, в частности к гастроэнтерологии и гепатологии, и может быть использовано для диагностики спонтанного бактериального перитонита (СБП) у больного циррозом печени с асцитом, в том числе геморрагического характера. Способ заключается в определении лейкоцитов по активности лейкоцитарной эстеразы в исследуемом образце асцитической жидкости (АЖ), в том числе геморрагического характера, и позволяет диагностировать СБП у больного циррозом печени с асцитом. Технический результат изобретения создание быстрого, недорогого и доступного способа диагностики СБП у больных циррозом печени с асцитом, в том числе геморрагического характера. 16444 1 2012.10.30 Ряд заболеваний протекает с инфицированием АЖ, например цирроз печени с развитием СБП, который является одним из вариантов первичного бактериального перитонита. Основной механизм развития СБП - бактериальная транслокация микроорганизмов из просвета кишечника в мезентериальные лимфатические узлы, а затем и в системный кровоток, АЖ 1. При циррозе печени проявления СБП трудно диагностируются в связи с неспецифическими клиническими признаками, а иногда и полным их отсутствием. Это сказывается на своевременности назначения антибактериальных препаратов и прогнозе для пациента. Наиболее распространенным способом диагностики СБП и выбора лечения является бактериологическое исследование асцитической жидкости с целью выявления микроорганизмов, их идентификации и определения чувствительности к антибактериальным средствам, для чего проводят посев АЖ на питательные среды. Колонии микроорганизмов,выросшие на питательных средах, подвергают родовой и видовой идентификации для определения их таксономической принадлежности и чувствительности к антибиотикам. Для этого оценивают возможности роста бактерий в аэробных и анаэробных условиях, их отношение к окраске по Грамму, характер роста на селективных питательных средах и угнетения под действием антибактериальных препаратов и др. 2. Недостатками этого способа является длительность получения результатов, использование дорогостоящих питательных сред, необходимость достаточного количества исследуемого материала (при применении посева 1 мл асцитической жидкости на обычные среды высеваемость составляет всего 43 , при использовании специальных флаконов для посевов - 93 ), трудность анаэробного культивирования и др. 3, 4. Известен также метод подсчета лейкоцитов в АЖ в гематологическом анализаторе 5,6. Метод достоверный, простой и быстрый, однако существует вероятность сбоя в работе аппарата при наличии примесей в образцах АЖ (например, нитей фибрина). К тому же не все лаборатории оснащены гематологическими анализаторами, что не позволяет использовать метод для рутинной диагностики СБП. Предложен также способ выявления СБП на основании определения в АЖ количественного и качественного состава короткоцепочечных жирных кислот (уксусной, пропионовой, изомасляной и др.), которые являются метаболитами анаэробной и аэробной микрофлоры 7. Метод позволяет не только определить инфицированность АЖ, но и верифицировать микробный состав. Недостатками являются относительность результатов(связаны с метаболической активностью микрофлоры), потеря до 15-20 метаболитов в процессе подготовки проб. В качестве альтернативы подсчету лейкоцитов с помощью микроскопии предлагается определение лактоферрина в АЖ. Уровень лактоферрина в биологических жидкостях увеличивается пропорционально количеству лейкоцитов. Однако имеющиеся данные об эффективности метода ограничены одним исследованием 8. Кроме того, исследование имеет высокую стоимость. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ диагностики СБП, основанный на подсчете содержания нейтрофильных лейкоцитов в АЖ в счетной камере при микроскопии. Цитоз в АЖ удобно определять аналогично счету клеток в спинномозговой жидкости 9. СБП диагностируется при количестве нейтрофилов 250 и более в 1 мкл (250 кл/мкл) в отсутствии интраабдоминального источника инфицирования. Однако способ-прототип является трудоемким и в некоторой степени субъективным. Кроме того, при повышениии низкой осмолярности биологической жидкости ускоряется лизис лейкоцитов. Это приводит к быстрому уменьшению количества клеток и через 2-3 ч может произойти практически полное их разрушение 10. Задачей настоящего изобретения является создание быстрого, недорогого и доступного способа диагностики СБП у больных циррозом печени с асцитом, в том числе геморрагического характера (содержание эритроцитов 10000 кл/мкл). 2 16444 1 2012.10.30 Изобретение основано на выявленном техническом результате, заключающемся в том,что тест-полоски для исследования мочи можно использовать для диагностики СБП у пациента с циррозом печени с асцитом, в том числе при наличии в АЖ более 10000 эритроцитов в 1 мкл (геморрагический характер АЖ). Способ основан на определении активности эстеразы нейтрофильных лейкоцитов и позволяет относительно просто обнаруживать лейкоциты в АЖ. Нейтрофильные лейкоциты содержат эстеразы, гидролизирующие аминокислотный эфир пиррола с освобождением 3-гидрокси-5-фенилпиррола. 3-гидрокси-5-фенилпиррол вступает в реакцию диазотирования, образуя пурпурную окраску аналитической зоны полоски. Интенсивность окраски определяется числом нейтрофильных лейкоцитов в выпоте. Чувствительность метода подобрана таким образом, чтобы обеспечить отрицательную реакцию при нормальном числе нейтрофильных лейкоцитов и положительную - при их увеличении 10, 11. Другие типы клеток, присутствующие в АЖ - эритроциты, эпителиальные клетки и бактерии не содержат эстеразу и не способны катализировать реакцию в тест-полоске. Реакция на эстеразу может быть положительной в образцах АЖ, в которых нейтрофилы не были обнаружены при микроскопии осадка АЖ. Это бывает при лизисе нейтрофилов в АЖ и выходе фермента из их цитоплазмы. При сравнении окраски тест-полоски с окраской цветовой шкалы, если интенсивность окраски аналитической зоны тест-полоски и цветовой шкалы близка или совпадает - концентрация исследуемого компонента в образце приближается или равна количественному значению, указанному на шкале. Спонтанный бактериальный перитонит диагностируется у больных ЦП при количестве нейтрофилов в АЖ 250 и более в 1 мкл (250 кл/мкл) в отсутствии интраабдоминального или хирургически леченого источника инфекции. При количестве эритроцитов в АЖ более 10000 в 1 мкл (геморрагический характер АЖ) оценка изменения интенсивности окраски аналитической зоны тест-полоски затруднена. В таком случае следует осаждать эритроциты центрифугированием в течение 10 мин при 1500 об/мин, после чего погружать тест-полоску в надосадочную область образца АЖ. Способ выполняется с помощью тест-полосок, традиционно используемых для исследования мочи. В нашей работе исследования были выполнены у 24 больных циррозом печени с асцитом (0,01). Использовались тест-полоски 10 (фирмы.) Способ осуществляют следующим образом. Больному с подозрением на СБП проводят забор АЖ (5 мл) из брюшной полости при парацентезе или путем пункции под контролем ультразвукового исследования (УЗИ). Затем в пробирку с образцом АЖ погружают тест-полоску на 2-3 секунды. При содержании в АЖ эритроцитов более 10000 в 1 мкл (геморрагический характер АЖ) их осаждают в пробирке центрифугированием в течение 10 мин при 1500 об/мин, после чего в образовавшуюся надосадочную область образца АЖ погружают тест-полоску на 2-3 секунды. После смачивания тест-полоски в аналитических зонах происходит запуск химических реакций. Через 2 мин сравнивают интенсивность окраски аналитической зоны тест-полоски с окраской зон цветовой шкалы и оценивают результат, согласно которому делают вывод о наличии или отсутствии СБП. Полученный положительный результат является основным критерием назначения антибактериального лечения. Ниже приведены примеры наблюдения больных циррозом печени с диагностированным СБП с помощью тест-полосок для анализа мочи. Пример 1. Пациент 71 г. Диагноз декомпенсированный цирроз печени неуточненной этиологии,класс С, минимальной степени активности, печеночно-клеточная недостаточность, портальная гипертензия (коррекция портальной гипертензии - операция Сигоури в 2006 г.,асцит, печеночная энцефалопатия 3 ст.). Острый герпетический стоматит. Респираторный дистресс-синдром. Токсическая нефропатия. Двусторонняя гипостатическая пневмония. Двусторонний гидроторакс. ДН. 3 16444 1 2012.10.30 Жалобы не детализирует. Из анамнеза известно неоднократно госпитализировался в стационары с диагнозом цирроз печени. В 2006 г. выполнена операция Сигоури для коррекции портальной гипертензии. При поступлении состояние тяжелое. Кожные покровы и склеры желтушные. Отмечается пастозность передней брюшной стенки, отеки голеней и стоп. Периферические лимфоузлы не увеличены. В легких дыхание везикулярное, резко ослабленное в нижних отделах. Частота дыхания 26 в мин. Тоны сердца приглушенные,ритмичные, шумов нет. ЧСС 84 в мин. Живот увеличен в объеме за счет напряженного асцита. Печень увеличена, выступает из-под края реберной дуги на 14 см. Селезенка не пальпируется. Проведенное обследование общий анализ крови - эритроциты 2,391012/л, гемоглобин 97 г/л, лейкоциты 49109/л, тромбоциты 31109/л, палочкоядерные нейтрофилы 62 , сегментоядерные нейтрофилы 20 , лимфоциты 11 , моноциты 7 . Общий анализ мочи микроскопия осадка эпителиальные клетки 1-2 в п/зр., лейкоциты 1-3 в п/зр., эритроциты нет в п/зр., цилиндры гиалиновые 1-3 в п/зр. Биохимическое исследование крови глюкоза 4,6 ммоль/л, белок общий 66,0 г/л, мочевина 19,9 ммоль/л, креатинин 184 мкмоль/л, общий билирубин 96,0 мкмоль/л, прямой билирубин 27,2 мкмоль/л, непрямой 68,8 мкмоль/л,АЛТ 270 Е/л,630 Е/л, амилаза 42 Е/л. Ультразвуковое исследование брюшной полости визуализация печени затруднена КВР 182 мм, структура диффузно уплотнена, эхогенность повышена. Внутрипеченочные желчные протоки незначительно расширены. Воротная вена 14,5 мм. Селезенка отсутствует (удалена). Поджелудочная железа - эхогенность повышена, структура диффузно неоднородная, визуализируется фрагментарно. В брюшной полости значительное количество свободной жидкости, в правом плевральном синусе не менее 170 мл, в левом не менее 500 мл. Заключение - эхо-картина может соответствовать циррозу, асцит, диффузные изменения в поджелудочной железе, двусторонний гидроторакс. Рентгенография органов грудной клетки и средостения с двух сторон, больше справа над диафрагмой и в синусах небольшое количество выпота. Справа над диафрагмой легочный рисунок сгущен и обогащен за счет высокого положения диафрагмы, коллабирование легкого, на фоне чего нельзя исключить присоединившиеся инфильтративные изменения. Корни уплотнены, расширены. Сердце не увеличено. Заключение - двусторонний гидроторакс. При наличии клиники - гипостатическая пневмония справа. Под контролем УЗИ проведен забор АЖ (40 мл) из брюшной полости. Исследована АЖ подсчет нейтрофильных лейкоцитов в счетной камере - 798 кл/мкл,в автоматическом гематологическом анализаторе - 660 кл/мкл. Таким образом, диагноз СБП при циррозе печени доказан. При исследовании светло-желтой асцитической жидкости с помощью тест-полоски выявлены следующие изменения по интенсивности окраски тест-полоски уровень лейкоцитов - большое содержание (500 кл/мкл 3). Пример 2. Пациентка 57 лет. Диагноз цирроз печени, неуточненной этиологии, класс тяжести С,неактивный, гепатоцеллюлярная недостаточность, портальная гипертензия в стадии декомпенсации (асцит, правосторонний гидроторакс, гепаторенальный синдром, печеночная энцефалопатия 2-3 ст.). Поступила с жалобами боль в животе, увеличение живота, отеки на голенях. Из анамнеза известно считает себя больной около 3 лет, когда появилась и стала нарастать слабость, увеличился в размерах живот. Настоящее ухудшение около месяца, когда к вышеуказанным жалобам присоединились боли в животе. При поступлении кожные покровы и склеры желтушной окраски. Отмечается пастозность передней брюшной стенки,голеней. В легких дыхание жесткое, несколько ослабленное над правым легким. Частота дыхания 17 в 1 мин. Тоны сердца приглушенные, ритмичные, шумов нет. ЧСС 84 в 1 мин. Живот увеличен в объеме за счет ненапряженного асцита, болезненный при пальпации в 4 16444 1 2012.10.30 правом подреберье. Печень увеличена, выступает из-под края реберной дуги на 10 см. Селезенка не пальпируется. Проведенное обследование общий анализ крови - эритроциты 2,381012/л, гемоглобин 84 г/л, лейкоциты 13,6109/л, палочкоядерные нейтрофилы 38 , сегментоядерные нейтрофилы 54 , лимфоциты 5 , моноциты 3 , СОЭ 35 мм/ч. Общий анализ мочи микроскопия осадка эпителиальные клетки 12-15 в п/зр. лейкоциты 8-10 в п/зр. эритроциты 2-4 в п/зр. бактерии, дрожжевые грибки. Биохимическое исследование глюкоза 4,3 ммоль/л холестерин 4,1 ммоль/л, белок общий 78,3 г/л, альбумин 33,6 г/л, общий билирубин 120,8 мкмоль/л, прямой билирубин 63,4 мкмоль/л, АЛТ 0,12 мккат/л,0,09 мккат/л,щелочная фосфатаза 91 ед/л амилаза 116 ед/л. Ультразвуковое исследование брюшной полости печень значительно увеличена - правая доля ККР 170 мм, КВР 130 мм левая доля ККР 100 мм. Структура неоднородная, контуры бугристые. Печеночные вены обычно диаметра, воротная вена расширена до 15 мм. Желчный пузырь не виден из-за значительного количества жидкости в брюшной полости. Селезенка контуры четкие, размеры нормальные (11542 мм). Поджелудочная железа и почки без особенностей. Рентгенография органов грудной клетки и средостения очаговых и инфильтративных изменений не выявлено. Легочный рисунок деформирован. Контуры диафрагмы ровные,синусы свободные. Сердце расширено в поперечнике. Посттравматическая деформация ребер справа. Слева в междолевой плевре незначительный выпот. Заключение кардиомегалия, левосторонний междолевой осумкованный гидроторакс. Под контролем ультразвукого исследования произведена пункция брюшной полости. Аспирировано 40 мл светло-красной АЖ. Асептическая повязка. Исследована АЖ подсчет нейтрофильных лейкоцитов в счетной камере - 1360 кл/мкл,в автоматическом гематологическом анализаторе - 960 кл/мкл. Таким образом, диагноз СБП при циррозе печени доказан. При определении лейкоцитов в АЖ с использованием тест-полоски получены следующие результаты в нативном образце оценка интенсивности окраски аналитической зоны тест-полоски не представляется возможной из-за геморрагического характера выпота в другом образце АЖ после осаждения эритроцитов центрифугированием в течение 10 мин при 1500 об/мин образовалась надосадочная прозрачная область, которую использовали для дальнейшего исследования после погружения и извлечения тест-полоски выявлено изменение окраски аналитической зоны, соответствующее положительному результату (большое содержание лейкоцитов 500 кл/мкл 3). Таким образом, предлагаемый способ позволяет быстро и достоверно диагностировать СБП на основании определения в АЖ лейкоцитов по активности лейкоцитарной эстеразы с использованием тест-полоски для определения лейкоцитов в моче. Источники информации 1..,.,..//. . - 2006. - . 12. - . 1493-1502. 2. Джавец Э., Мельник Дж., Эйдельберг Э. Руководство по медицинской микробиологии Пер. с англ. под ред. д.м.н. Т.В. Перадзе / - М. Медицина, 1982. Т. 2. - С. 273-292. 3. Аншелевич Ю. Проблема спонтанного бактериального перитонита в современной медицине // Терапевт. арх. - 2000. -2. - С. 69-70. 4. Буеверов А. Асцит как осложнение цирроза печени // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. - 2001. -6. - С. 24-28. 5 16444 1 2012.10.30 5..,.,..//. . - 2008. - . 14. . 5689-5694. 6..,.,//. . - 2009. - . 15. - . 1042-1049. 7. Патент РФ 2002122771/15. 8..,.,..// . - 2008 - . 135. - . 803-807. 9. Базарнова М.А. и др. Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике учебное пособие / Под общ. ред. М.А.Базарновой, В.Т.Морозовой. Киев Выща школа, 1988. - 318 с. (прототип) 10. Швецова Д.Г., Козлов А.В. Применение тест-полосок для определения состава мочи //- Электронный ресурс. - 2006. - Режим доступа Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6

МПК / Метки

МПК: G01N 33/50

Метки: асцитом, спонтанного, бактериального, печени, циррозом, диагностики, перитонита, способ, больного

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/6-16444-sposob-diagnostiki-spontannogo-bakterialnogo-peritonita-u-bolnogo-cirrozom-pecheni-s-ascitom.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ диагностики спонтанного бактериального перитонита у больного циррозом печени с асцитом</a>

Похожие патенты