Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ САРКОМЫ У КРЫСЫ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр онкологии и медицинской радиологии имени Н.Н.Александрова(72) Авторы Пономаренко Наталья Владимировна Крутилина Нина Ивановна Минченя Владимир Тимофеевич Дроздова Марина Васильевна Степаненко Дмитрий Александрович(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр онкологии и медицинской радиологии имени Н.Н.Александрова(57) Способ комбинированной терапии саркомы у крысы, включающий проведение сеансов ультразвукового воздействия и лучевой терапии, отличающийся тем, что ультразвуковое воздействие осуществляют на зону опухоли в течение 3 минут интенсивностью 2,0 Вт/см 2, частотой 22-23 кГц за 5 минут до сеанса лучевой терапии, а лучевую терапию проводят контактным методом 4 фракциями при разовой очаговой дозе 5 Гр в день. Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, в частности к способу комбинированной терапии саркомы у крысы. Известен способ терапии опухолей, включающий воздействие на патологическую ткань фокусированным низкочастотным ультразвуком с применением микропузырьков 1. Кавитационная пульсация микропузырьков под действием ультразвука приводит к эмболизации кровеносных сосудов опухоли. Известен способ терапии опухолей, включающий ультразвуковую гипертермию с частотой 800 кГц - 1 МГц, интенсивностью 1-2 Вт/см 2 в комплексном лечении сарком мягких тканей и рака молочной железы с химиотерапией и лучевой терапией 2. Применение локального ультразвукового нагрева до 40-41 С приводит к усилению противоопухолевого эффекта лекарственной и лучевой терапии как при раздельном, так и при комплексном применении. Недостатком известных способов является поражение здоровых клеток ткани из-за распространения ультразвуковых колебаний от зоны опухоли в сторону здоровых клеток. 13765 1 2010.10.30 Наиболее близким к заявляемому, принятым за прототип является способ терапии опухолей, включающий проведение сеансов ультразвуковой терапии, во время которых наблюдается генерация продольных ультразвуковых колебаний с помощью волноводной системы, возбуждение колебаний в патологической ткани и их фокусировка, с последующим применением антиоксидантов, гормональной, лучевой или химиотерапии 3. Частоту ультразвука выбирают из диапазона от 15 до 250 кГц, а интенсивность выбирают таким образом, чтобы она превышала кавитационный порог крови. Применение ультразвука индуцирует апоптоз патологических клеток. Недостатком этого способа является возможность поражения здоровых клеток ткани из-за большой удельной акустической мощности подводимого ультразвука. Эффективность применения ультразвука для терапии опухолей подтверждается рядом исследований 4-6. В работе 4 исследовалась чувствительность нормальных и раковых клеток к ультразвуку. Клетки подвергались воздействию ультразвука с интенсивностью 0,33 Вт/см 2 и частотой 20 кГц в течение 4 минут. После этого исследовалась жизнеспособность клеток. Результаты исследований показывают, что нормальные клетки являются слабо восприимчивыми к инсонификации (воздействие ультразвука на протяжении 4 минут вызывает подавление жизнеспособности клеток на 12-20 ), в то время как клетки меланомы и карциномы груди обладают повышенной чувствительностью (их жизнеспособность подавляется на 55-65 после 1 минуты воздействия и почти на 90 после 4 минут). В работе 5 исследовалось влияние ультразвука с пиковой интенсивностью 0,75 Вт/см 2 и частотой 150 кГц на пролиферацию клеток -лимфомы мыши. Длительность инсонификации 10-15 минут. После воздействия клетки культивировались в инкубаторе с подсчетом числа жизнеспособных клеток. Установлено, что в контрольной группе клеток,не подвергавшейся инсонификации, число жизнеспособных клеток после 24 часов инкубации увеличилось примерно в 2,5 раза, в то время как в группе клеток, подвергнутой инсонификации, число жизнеспособных клеток за соответствующий период уменьшилось примерно в 13,5 раза, то есть произошло подавление пролиферации. Существенную роль в процессе подавления пролиферации раковых клеток играет активный кислород, возникающий в результате сонохимических реакций. В работе 6 выдвинута гипотеза, что за счет поглощения ультразвука изменяется направление потока энтропии между нормальными и раковыми клетками. В условиях отсутствия внешних воздействий скорость производства энтропии в раковых клетках выше,чем в нормальных, поток энтропии направлен от раковых клеток к здоровым и информация также переносится от раковых клеток к здоровым. Здоровые клетки поглощают ультразвук сильнее раковых, и скорость производства дополнительной энтропии в здоровых клетках оказывается выше. Если разность скоростей производства дополнительной энтропии в нормальных и раковых клетках превышает по абсолютной величине разность скоростей производства энтропии для этих клеток при отсутствии внешних воздействий, то происходит изменение направления потока энтропии. Таким образом,вышеописанные результаты использования ультразвука свидетельствуют о возможности его применения в онкологической практике. Задачей изобретения является создание способа комбинированной терапии саркомы у крысы, позволяющего осуществлять воздействия на патологическую (опухолевую) ткань с помощью ультразвуковых колебаний малой интенсивности, обеспечивая при этом изоляцию патологической ткани от окружающей здоровой ткани, и лучевой терапии. Поставленная задача решается тем, что способ включает воздействие на опухоль ультразвуком низкой частоты и низкой интенсивности с последующим облучением. С помощью волноводной системы осуществляют генерацию продольных ультразвуковых колебаний,трансформацию в изгибные колебания замкнутого контура, возбуждение колебаний в 13765 1 2010.10.30 опухолевой ткани и их фокусировку. Частота ультразвука составляет 22-23 кГц, а удельная акустическая мощность (интенсивность) - 2,0 Вт/см 2. Способ осуществляется следующим образом. Исследованияпроводят на белых беспородных крысах массой тела 120170 граммов, которым подкожно в пахово-бедренную область перевивают по 0,5 мл опухолевой взвеси штамма саркомы -1. По достижении опухоли размера 1,0-1,5 см начинают экспериментальное воздействие. Животных разделяют на 3 группы. Первая опытная группа - животные, подвергающиеся радиационному воздействию в режиме РОД 5 Гр, 4 фракции, СОД 20 Гр (1-я опытная с ЛТ) вторая опытная группа - животные, подвергающиеся радиационному воздействию в режиме РОД 5 Гр, 4 фракции, СОД 20 Гр в условиях ультразвуковой модификации перед каждым сеансом лучевой терапии с интенсивностью 2,0 Вт/см 2 и рабочей частотой преобразователя 22-23 кГц в течение 3 минут (2-я опытная с УЗЛТ) третья группа - контрольная (без какого-либо воздействия). Ультразвуковое воздействие (УЗ) и лучевую терапию (ЛТ) проводят в условиях общей анестезии с использованием 0,005 раствора фентанила 0,1 мл и 0,25 раствора дроперидола 0,2 мл на 1 животное на сеанс, что обеспечивает длительность сна крысы около 20 минут. Во время воздействия животных фиксируют к деревянным подставкам. Ультразвуковые колебания в зону опухоли подводят с интенсивностью 2,0 Вт/см 2 и рабочей частотой преобразователя 22-23 кГц в течение 3 минут. Лучевую терапию проводят контактным методом на аппарате(гамма-излучение 192) с использованием трехпроводникового аппликатора. Режим воздействия - разовая очаговая доза (РОД) 5 Гр в день, 4 фракции,суммарная очаговая доза (СОД) 20 Гр. В последующий период наблюдения производят измерение размеров опухоли 3 раза в неделю. Критерии оценки эффекта торможение роста опухоли средний прирост объема опухолевой массы выживаемость и продолжительность жизни павших животных морфологические изменения в опухолевой ткани изменение биохимических показателей перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной системы (АОС). Торможение опухолевого роста оценивают по общему объему опухолевой массы после окончания лечения, по сравнению с контролем(контроль - опыт)/контроль 100 ,где контроль и опыт - объем опухолевой массы в опытной и контрольной группах животных в конце эксперимента. Увеличение средней продолжительности жизни павших животных определяют в процентах по отношению к контролю(СПЖопыт - СПЖконтроль)/СПЖконтроль 100 ,где СПЖопыт и СПЖконтроль - средняя продолжительность жизни (СПЖ) павших животных в опытной и контрольной группах животных в конце эксперимента. Сравнительный анализ кривых выживаемости проводят с помощью непараметрического - теста. Излеченность животных (в ) оценивают по отсутствию опухоли спустя 30 суток после воздействия. Анализ достоверности различий между исследуемыми группами проводят методом -. Морфологические исследования выполняют методом световой микроскопии срезов опухолевой ткани, окрашенных гемотоксилин-эозином. При гистологическом изучении отмечают тип опухоли, процентное соотношение посттерапевтического некроза и неповрежденной опухоли, признаки дистрофических изменений опухолевых клеток. Производят качественное и полуколичественное сравнение срезов опухолей 1-й опытной группы и 2-й опытной группы между собой и с контрольной группой. Грейдирование посттерапевтического патоморфоза производят по 4 степеням (ПТИ , , ,степени). 13765 1 2010.10.30 Исследование биохимических показателей выполняют в нормальной мышечной ткани и в тканях опухолей перевитых штаммов после их удаления. В исследуемых образцах определяют содержание продуктов системы ПОЛ-АОС. Об интенсивности процессов перекисного окисления липидов судят по ненасыщенности липидов на основании определения двойных связей липидов (ДСЛ) и величине вторичного продукта - малонового диальдегида (МДА), о состоянии антиоксидантной системы - по активности ферментативного (супероксиддистмутазы - СОД) и неферментативного звена (общие сульфгидрильные группы белков - -группы). Полученные результаты представляют в табл. 1 и на фигуре. Таблица 1 Средняя продолжительность жизни животных с опухолями штамма саркома -1 Группа 1-я опытная с ЛТ 2-я опытная с УЗЛТ Контрольная Увеличение средней продолжительности жизни животных в 1-й опытной группе составляет 162,5 по сравнению с контролем, во 2-й опытной группе составляет 283,1 по сравнению с контролем и 45,9 по сравнению с 1-й опытной группой. Выживаемость О при УЗ 2,0 Вт/см и ЛТ 20 Гр Выживаемость животных с опухолями штамма саркома -1 Средний прирост опухоли в 1-й опытной группе составляет 0,3400,093 мл/2 дня, во 2-й опытной группе - 0,0500,038 мл/2 дня, в контрольной группе - 3,6020,805 мл/2 дня. Торможение опухолевого роста у животных в 1-й опытной группе составляет 87,0 по сравнению с контролем, во 2-й опытной группе составляет 97,54 по сравнению с контролем и 81,06 по сравнению с 1-й опытной группой. Эпителиит 0 степени и 3 степени отмечают в 1-й опытной группе, 0 степени - во 2-й опытной группе. С целью изучения комбинированного влияния лучевой терапии и ультразвукового воздействия на опухолевую ткань животных-опухоленосителей с перевитой саркомой -1 13765 1 2010.10.30 исследуют показатели системы ПОЛ-АОС в контрольной и опытных группах. По результатам исследования выявляют активацию процессов перекисного окисления липидов и угнетение показателей антиоксидантной системы (0,05). Полученные результаты представлены в табл. 2. Таблица 2 Показатели системы ПОЛ-АОС в опухолевой ткани саркомы -1 экспериментальных животных при комбинированном воздействии Изучаемые показатели Исследуемые -группы,МДА,ДСЛ,СОД, ед/мл группы ммоль/л усл. ед/мл ммоль/мл цитозоля цитозоля цитозоля цитозоля контроль 2,030,12 1933,9352,32 119,08,65 16,02,86 1-я опытная 1,420,08 2299,9157,50 119,59,62 64,53,14 УЗ 2,0 Вт/см 2 группа (ЛТ) ЛТ СОД 20 Гр 2-я опытная группа 1,260,14 2386,0224,15 129,05,77 46,24,96(УЗЛТ) Примечание- статистически значимое различие по сравнению с контрольной группой (0,05)- статистически значимое различие между опытными группами (0,05). В рамках изучения комбинированного ультразвукового и радиационного воздействия на опухоль у животных с перевитой саркомой -1 определяют морфологические изменения в опухолевой ткани контрольной и опытных групп. Контрольная группа морфологически представляет собой полиморфноклеточную, густоклеточную мезенхимальную опухоль (саркома) солидно-альвеолярного строения, 3. Поля некроза занимают до 30 площади среза опухоли. Некрозы центральной локализации, преимущественно геморрагического типа, ишемического характера. Дистрофические изменения клеток выражены слабо. В опухолевых образцах фокусы некроза локализуются преимущественно по краю опухоли. Некроз фибриноидного типа, с лейкоцитарной инфильтрацией. Признаки дистрофии клеток выражены более значительно. ПТИ опухолей соответствуетст. Площадь некроза в опухолевых образцах 1-й опытной группы составляет 44 . В опухолевых образцах 2-й опытной группы отмечают некоторое увеличение площади некроза (47,5 ). Пример. Белая беспородная крыса массой тела 130 граммов. Подкожно в пахово-бедренную область перевивают 0,5 мл опухолевой взвеси штамма саркомы -1. Через 7 дней размер перевитой опухоли достигает 1,2 см в диаметре. Начинают экспериментальное воздействие. Шерсть над опухолью выстригают. Животное усыпляют (внутримышечно вводят 0,005 раствор фентанила 0,1 мл и 0,25 раствор дроперидола 0,2 мл, что обеспечивает длительность сна крысы около 20 минут) и фиксируют к деревянной подставке. Кожу над опухолью смазывают раствором вазелина. К опухоли фиксируют кольцевидный фокусирующий элемент. Проводят сеанс ультразвукового воздействия с интенсивностью 2,0 Вт/см 2 и рабочей частотой преобразователя 22-23 кГц в течение 3 минут. Через 5 минут проводят сеанс лучевой терапии контактным методом на аппарате(гамма-излучение 192) с использованием трехпроводникового аппликатора РОД 5 Гр, 4 фракции, СОД 20 Гр. В последующий период наблюдения производят измерение размеров опухоли 3 раза в неделю. Таким образом, предлагаемый способ комбинированной терапии саркомы у крысы позволяет увеличить продолжительность жизни животного и снизить темпы опухолевого роста. Наименование воздействия 1. Патент США 20070123780. 2. Кузнецов В.Н. Модифицированная химиолучевая терапия местно-распространенных сарком мягких тканей и рака молочной железы с применением ультразвука и СВЧполей Автореф. дис.докт. мед. наук. - Ташкент, 1993. - 20 с. 3. Патент США 5984882, (прототип). 4..,.//.- . 105.-6.- 1997.- . 15751578. 5...// Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.

МПК / Метки

МПК: A61N 7/00, A61N 5/06

Метки: саркомы, комбинированной, терапии, способ, крысы

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/6-13765-sposob-kombinirovannojj-terapii-sarkomy-u-krysy.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ комбинированной терапии саркомы у крысы</a>

Похожие патенты