Способ флуориметрического определения фолиевой кислоты в кормах, продовольственном сырье и пищевых продуктах

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОЛИЕВОЙ КИСЛОТЫ В КОРМАХ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Воронцова Ольга Сергеевна Соколов Сергей Михайлович Белышева Людмила Леонидовна Полянских Елена Ильинична(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(57) Способ флуориметрического определения фолиевой кислоты в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах, при котором осуществляют гидролиз исследуемого образца в присутствии соляной кислоты, затем проводят ферментативный гидролиз с использованием такадиастазы, очищают гидролизат от примесей, окисляют содержащуюся в гидролизате фолиевую кислоту в 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновую кислоту, измеряют интенсивность флуоресценции 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновой кислоты в сравнении со стандартным раствором и вычисляют содержание фолиевой кислоты. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также сельскому хозяйству и пищевой промышленности. Известен способ флуориметрического определения фолиевой кислоты в печени и крови, основанный на ферментативном гидролизе, очистке гидролизата от примесей,окислении фолиевой кислоты в 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновую кислоту и измерении интенсивности флуоресценции образующегося соединения, которая прямо пропорциональна массовой доле фолиевой кислоты 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако указанный способ ограничен определением фолиевой кислоты только в печени и крови. Вовторых, ферментативный гидролиз проводится в течение 20-23 часов, что значительно удлиняет время анализа. В-третьих, необходимо длительное время для подготовки ферментного препарата, извлекаемого из почек свиней. Задачей заявляемого изобретения является сокращение времени ферментативного гидролиза, времени анализа, уменьшение количества используемых реактивов без снижения точности определения. 9590 1 2007.08.30 Поставленная задача достигается следующим образом. Способ флуориметрического определения фолиевой кислоты в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах, при котором осуществляют гидролиз исследуемого образца в присутствии соляной кислоты, затем проводят ферментативный гидролиз с использованием такадиастазы, очищают гидролизат от примесей, окисляют содержащуюся в гидролизате фолиевую кислоту в 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновую кислоту, измеряют интенсивность флуоресценции 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновой кислоты в сравнении со стандартным раствором и вычисляют содержание фолиевой кислоты. Для перевода связанных форм фолиевой кислоты в более простые соединения используют фермент, обладающий конъюгазным действием, извлекаемый из почек свиней. Предлагаемый способ, с использованием для ферментации такадиастазы, а для кислотного гидролиза - соляной кислоты, позволяет уменьшить время ферментативного гидролиза в 6-7 раз, анализа - в 5-6 раз, реактивов - в 2 раза без снижения точности измерения по сравнению с прототипом. Пример 1. Определение фолиевой кислоты в пищевых продуктах 1. Кислотный гидролиз Навеску исследуемого продукта 6 г помещают в колбу вместимостью 250 см 3 и приливают 150 см 3 соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм 3. Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин. По окончании гидролиза колбу с содержимым охлаждают до температуры 18-25 С, добавляют 5-7 см 3 насыщенного раствора натрия уксуснокислого и 1 см 3 толуола. 2. Ферментативный гидролиз К полученной по п. 1 смеси добавляют 5 см 3 2 -ного раствора такадиастазы и помещают в термостат, где выдерживают 3 часа при температуре (501) С. После этого гидролизат охлаждают до 18-25 С и фильтруют. 3. Очистка гидролизата К 50 см 3 полученного по п. 2 фильтрата добавляют 0,5-1 см 3 57 раствора хлорной кислоты, перемешивают и оставляют стоять на льду 30 мин. Для удаления выпавшего в осадок белка охлажденный раствор фильтруют или центрифугируют и тотчас же рН фильтрата или центрифугата доводят до 7 раствором гидроксида калия 5 н. Затем оставляют стоять на холоде в течение 10 мин, после чего фильтруют для удаления выпавшего в осадок перхлората калия и измеряют объем. 4. Окисление фолиевой кислоты в 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновую кислоту Полученный по п. 3 фильтрат и рабочий стандартный раствор фолиевой кислоты концентрацией 0,05 мкг/см 3 делят на 2 части. К одной части по каплям добавляют 4 -ный раствор перманганата калия до неисчезающей розовой окраски. Смесь выдерживают в течение 5 мин и избыток перманганата удаляют 5 -ным раствором перекиси водорода, если образуется мутный раствор, фильтруют. 5. Измерение интенсивности флуоресценции 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновой кислоты Интенсивность флуоресценции 2-амино-4-гидроксиптеридин-6-карбоновой кислоты измеряют при светофильтрах, дающих максимум длины волны возбуждения при 265 нм и флуоресценции при 450-470 нм. 6. Обработка результатов Содержание фолиевой кислоты в мг/100 г рассчитывают по формуле(12 )где 1 - показание флуориметра для испытуемой пробы после окисления, ед. прибора А 2 - показание флуориметра для испытуемой пробы до окисления, ед. прибора 2 9590 1 2007.08.30 1 - показание флуориметра для рабочего стандартного раствора фолиевой кислоты после окисления, ед. прибора 2 - показание флуориметра для рабочего стандартного раствора фолиевой кислоты до окисления, ед. прибора- масса фолиевой кислоты в 1 см 3 рабочего стандартного раствора- фактор разведения а - навеска пробы продукта, взятой для анализа, г 10 - коэффициент пересчета из мкг/г в мг/100 г. Вычисления проводят с точностью до третьего знака с последующим округлением до второго десятичного знака. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений. Результаты определения фолиевой кислоты в пищевых продуктах предлагаемым и известным способами представлены в таблице. Определение фолиевой кислоты в пищевых продуктах Время ферВыход фолиеСпособ опредеВремя ана- Количество используемых ментативного вой кислоты,ления лиза, ч реактивов гидролиза, ч Известный (по 20-23 23-26 1. Гепарин 106 прототипу) 2. Ацетатный буфер 3. Уксусная кислота 4. Хлорная кислота 5. Гидроксид калия 6. Тирозин 7. Триптофан 8. Этиловый спирт 9. Трихлоруксусная кислота 10. Перекись водорода 11. Толуол 12. Серная кислота 13. Формальдегид 14. Бихромат калия 15. Хинин сульфат 16. Фолиевая кислота 17. Хлорид натрия 18. Ацетат ртути 19. Ферментный препарат из почек свиней Предлагаемый 3 4-5 1. Соляная кислота 95 2. Уксуснокислый натрий 3. Толуол 4. Такадиастаза 5. Хлорная кислота 6. Гидроксид калия 7. Фолиевая кислота 8. Перманганат калия 9. Перекись водорода Пример 2. Определение фолиевой кислоты в кормах Определение фолиевой кислоты в кормах проводится аналогично примеру 1. 3 9590 1 2007.08.30 Пример 3. Определение фолиевой кислоты в продовольственном сырье Определение фолиевой кислоты в продовольственном сырье проводится аналогично примеру 1. Таким образом, заявляемый способ обладает следующими преимуществами сокращает время ферментативного гидролиза в 6,6-7,6 раза сокращает время анализа в 5,2-5,8 раза уменьшает количество используемых дорогостоящих реактивов в 2 раза не снижает точность измерений по сравнению с прототипом. Источники информации 1. Экспериментальная витаминология / Под ред. Ю.М. Островского. - Минск Наука и техника, 1979. - С. 353-389. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4

МПК / Метки

МПК: G01N 33/02

Метки: кислоты, продуктах, пищевых, флуориметрического, продовольственном, способ, сырье, кормах, фолиевой, определения

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/4-9590-sposob-fluorimetricheskogo-opredeleniya-folievojj-kisloty-v-kormah-prodovolstvennom-syre-i-pishhevyh-produktah.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ флуориметрического определения фолиевой кислоты в кормах, продовольственном сырье и пищевых продуктах</a>

Похожие патенты