Способ микроклонального размножения полукустарниковых растений

Номер патента: 8688

Опубликовано: 30.12.2006

Авторы: Налобова Вера Леонидовна, Садовская Татьяна Вячеславовна

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(71) Заявитель Республиканское унитарное предприятие Институт овощеводства Национальной академии наук Беларуси (ВУ)(72) Авторы Садовская Татьяна Вячеславовна Налобова Вера Леони довна (ВУ)(73) Патентообладатель Республиканское унитарное предприятие Институт овощеводства Национальной академии наук Беларуси (ВУ)Способ микроклонального размножения полукустарниковых растений путем культивирования эксплантов из побегов растений на питательной среде Мурасиге-Скуга, отличающийся тем, что экспланты культивируют при 24-часовом фотопериоде при интенсивности освещения 1000-1500 люкс и температуре воздуха 18-22 С, при этом питательная среда дополнительно содержит в качестве адсорбента фенолов активированный уголь в количестве 5-10 г/л среды.Изобретение относится к области биотехнологии и может найти применение в сельском хозяйстве при закладке плантаций полукустарниковых растений.Известен способ микроклонального размножения полукустарниковых растений, например котовника гибридного (Ыерега ггапбййога х Ыерега ггапзсаййсазйса), путем использования в качестве эксплантов листьев и стеблей, которые посажены на питательную среду,содержащую макро- и микросоли, витамины по Гамборгу, фитогормоны, для инициации каллусообразования и последующей регенерации до полноценных растений 1.Этот способ обладает недостатками, которые заключаются в дороговизне компонентов питательной среды, сравнительно длинном процессе регенерации, доходящем до 45 суток.Известен способ микроклонального размножения полукустарниковых растений, например мяты перечной (Мента рйрегйга), заключающийся в использовании в качестве экспланта микрочеренков побегов, которые выращивают на питательной среде МурасигеСкуга, с добавлением стимуляторов роста 2.Этот способ обладает недостатком, заключающимся в длительном периоде культивирования (до 30 дней).Известен способ микроклонального размножения полукустарниковых растений, например голубики высокой (Уассшшш уййз-йбеа), путем использования побегов в качестве эксплантов и выращивания эксплантов при 16-часовом фотопериоде при интенсивностиосвещения 2500-3000 люкс И температуре воздуха 22-25 С на питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением ростовых веществ И ингибиторов фенолов поливинилпирролидона ( 1, 5, 10 г/л), диэтилдитиокарбомата (10, 30, 50 мг/л), аскорбиновой и лимонной Кислоты (50, 75, 100 мг/л)3.Этот способ обладает недостатком, заключающимся в использовании достаточно токсичнь 1 х ингибиторов фенолов.Задачей настоящего изобретения является уменьшение количества времени, необходимого для получения нужного количества посадочного материала, сокращение количества этапов культивирования 111 уйгго, уменьшение затрат на приготовление сред и черенкование, повышение экологической безопасности.Поставленная задача достигается тем, что в способе микроклонального размножения полукустарниковь 1 х растений путем культивирования эксплантов из побегов растений на питательной среде Мурасиге-Скуга, экспланть 1 культивируют при 24-часовом фотопериоде при интенсивности освещения 1000-1500 люкс и температуре воздуха 18-22 С, при этом питательная среда дополнительно содержит в качестве адсорбента фенолов активированнь 1 й уголь в количестве 5-10 г/л среды.Предлагаемый способ микроклонального размножения полукустарниковь 1 х растений,например котовника гибридного, осуществляется следующим образом.Разработанным способом микроклонального размножения можно размножать все полукустарниковь 1 е растения, потому что они имеют сходное морфологическое и анатомическое строение и развитие данной группы растений в культуре 111 что протекает по единой схеме.Приготовление питательной среды. В качестве питательной среды для выращивания котовника гибридного в культуре 1 п что использовали среду Мурасиге-Скуга следующего составамакросоли аммоний азотнокислый - 1650 мг/лмикросоли марганец сернокислый - 22,3 мг/листочники железа железо сернокислое- 27,8 мг/л трилон Б (Ыа 2 ЭДТА) - 37,3 мг/л витамины тиамин - 0,5 мг/листочник углеводного питания растений сахароза - 30 г/лВ данную среду добавляли ингибитор фенолов - активированный уголь в количестве 5-10 г/л. Внесение активированного угля в среду в Количестве менее 5 г/л не будет стимулировать конгломерацию - индукцию и развитие побегов из всех меристематических зон экспланта. В количестве свыше 10 г/л активированный уголь будет существенно изменять гормональный баланс среды, что приведет к ингибированию роста регенерантов и их гибели.Все веЩества взвешивали на химических или аналитических весах в необходимых количествах и растворяли в 800 мл дистиллированной воды в химически чистой посуде в указанном порядке, за исключением агара. Уровень рН доводили с помошью автоматического иономера, добавляя ЫаОН или НС 1 соответственно. Агар плавили отдельно в 200 мл дистиллированной воды на водяной бане в течение 30 мин. Расплавленный агар смешивали с компонентами среды и разливали в пробирки длиной 30 см, диаметром 2-2,5 см по 10-15 мл на 1 пробирку.Пробирки со средой закрывали ватно-марлевыми пробками, подобранными по диаметру пробирок, и стерилизовали в автоклаве при температуре 120 С, давлении 100 кПа в течение 20 минут.Подготовка эксплантов. С хорошо развитых 2-3 летних кустов котовника гибридного острым лезвием нарезали побеги, длиной 10-15 см, с верхушечной почкой и 3-5 парами листьев с боковыми (пазушными) почками.На листе бумаги побеги разрезали лезвием на участки 3-4 см, содержашие участок стебля и 1 пару листьев, верхушку отрезали отдельно. Листья удаляли, оставляя только черешок или 1/3 листовой пластинки.Подготовленные черенки помешали в колбу или банку, закрытую марлей и промывали под проточной водой (под краном), сначала с добавлением 2-3 капель любого жидкого мыла или жидкого средства для мытья посуды, затем промывали до исчезновения пены.Промытые черенки пинцетом доставали из колбы и помешали в стерильную чашку Петри с кусочком стерильной фильтровальной бумаги или марли и переносили в ламинар для дальнейшей работы.Стерилизация и посадка эксплантов. Работу проводили в стерильном, предварительно обработанном ультрафиолетом в течение 1 часа, ламинаре, в стерильных условиях, соблюдая стандартные правила асептики.Черенки помешали сначала в 70 этанол на 10 секунд, затем ополаскивали стерильной дистиллированной водой и помешали в 0,1 раствор сулемы на 20 секунд. После этого черенки три раза промывали стерильной дистиллированной водой, меняя воду через каждые 3 минуты.Простерилизованные экспланты извлекали из воды по 1 штуке, помешали на стерильную бумагу и острым стерильным инструментом (скарификатором) обновляли срезы на черенках по 0,5-1 мм от каждого среза. Обрезанный черенок (эксплант) пинцетом помешали в пробирки с питательной средой строго вертикально, погружая конец черенка в среду на 5-8 мм.Пробирки с эксплантами помешали в культуральную комнату с определенными условиями, где за ними вели наблюдения течение 10-15 дней.Условия культивирования. Необходимая интенсивность освешения для вь 1 раЩивания эксплантов должна быть 1000-1500 люкс, так как освешенность ниже 1000 и выше 1500 люкс отрицательно влияет на развитие эксплантов.Температура воздуха для вырашивания эксплантов должна быть 18-22 С в связи с тем, что температура ниже 18 С тормозит развитие эксплантов и изменяется их окраска. Они приобретают фиолетовый оттенок в связи с уменьшением количества активного хлорофилла. Повышение температуры выше 22 С способствует высвобождению скрытой внутренней инфекции, а также приводит к некрозам тканей и гибели эксплантов.Таким образом, активированный уголь в количестве 5-10 г/л абсорбирует на своей поверхности фенольные соединения - вторичные Метаболиты, выделяемые в питательную среду эксплантами котовника гибридного под воздействием синтетических стимуляторов роста, которые сдерживают пролиферацию. В то же время, 24-часовой фотопериод, интенсивность освещения 1000-1500 люкс и температура воздуха 18-22 С активизируют обменные процессы у растений и стимулируют регенерацию. Все это приводит к тому,что клетки меристематических тканей начинают очень быстро делиться, в результате чего образуются конгломераты - множество побегов (до 50 штук), переплетенных между собой.Наличие конгломератов дает возможность получить большое количество вторичных эксплантов за один пассаж, а значит, исключает необходимость дальнейшего черенкования, что сокращает время и затраты на приготовление сред для выращивания регенерантов для черенкования.Сокращается время выращивания от посадки экспланта на питательную среду до вь 1 садки растений в грунт в 1,5-2 раза.Активированный уголь, используемый в качестве ингибитора фенолов растений, является естественным природным сорбентом на основе высококачественного древесного угля и экологически безопасен для всех видов живых организмов.1. Морфогенез и регенерация растений котовника 111 ушо / Н.В. Митрофанова и др. Проблемы дендрологии, садоводства и цветоводства Тезисы докладов международной конференции молодых ученых. 25-27 сентября 1995. - Крым. Ялта. - С.75.3. Сидорович Е.А., Кутас Е.Н. Клональное микроразмножение новых плодово-ягоднь 1 х растений. - Минск Навука 1 тэхн 1 ка, 1996. - С.82-83 (прототип).Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.

МПК / Метки

МПК: A01H 4/00

Метки: микроклонального, полукустарниковых, размножения, способ, растений

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/4-8688-sposob-mikroklonalnogo-razmnozheniya-polukustarnikovyh-rastenijj.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ микроклонального размножения полукустарниковых растений</a>

Похожие патенты