Способ флуориметрического определения тиамина в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51)01 21/64 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИАМИНА В КОРМАХ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОМ СЫРЬЕ ИЛИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Белышева Людмила Леонидовна Соколов Сергей Михайлович Воронцова Ольга Сергеевна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56) Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. - М. Брандес, Медицина, 1998. С. 150-155. Витамины. - Киев Издательство Академии наук УССР, 1953. - С. 45-50. Экспериментальная витаминология. Минск Наука и техника, 1979. С. 195-197. ГОСТ 30627.5-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина В 1(57) Способ флуориметрического определения тиамина в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах, включающий кислотный и ферментативный гидролиз исследуемого образца, очистку гидролизата от примесей, окисление содержащегося в образцах тиамина в тиохром, экстракцию тиохрома, измерение интенсивности флуоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором и вычисление содержания тиамина, отличающийся тем, что в качестве фермента для ферментативного гидролиза используют такадиастазу, а для очистки гидролизата от примесей используют 50 -ный раствор трихлоруксусной кислоты. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также сельскому хозяйству и пищевой промышленности. Известен способ определения тиамина в молочных продуктах для детского питания путем кислотного гидролиза исследуемых образцов с их последующей ферментацией ферментами амилоризином или пектофоэтидином, очисткой фильтрата от примесей и окислением тиамина в щелочной среде железосинеродистым калием с образованием сильно 8337 1 2006.08.30 флуоресцирующего в ультрафиолетовом свете соединения - тиохрома, интенсивность флуоресценции которого прямо пропорциональна массовой доле тиамина 1. Способ является аналогом по отношению к заявляемому. Однако указанный способ имеет недостатки. Во-первых, ограничен определением тиамина только в молочных продуктах. Во-вторых, ферментный гидролиз проводится в течение 14-16 часов, что удлиняет время определения. Известен способ флуориметрического определения тиамина в пищевых продуктах путем проведения кислотного и ферментативного гидролиза, хромато-графической очистки полученного гидролизата от соединений, мешающих флуориметрическому определению,количественного перевода в щелочной среде тиамина в тиохром, экстракцией тиохрома и измерения интенсивности флуоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором с помощью флуориметра 2. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако к недостаткам известного способа относятся длительное время проведения ферментативного гидролиза (14-16 часов) и использование хроматографической очистки, что усложняет определение тиамина и уменьшает точность определения из-за потерь тиамина на сорбентах. Задачей заявляемого изобретения является сокращение времени ферментативного гидролиза, упрощение очистки гидролизата, сокращение времени очистки и повышение точности определения. Поставленная задача достигается следующим образом. Представлен способ флуориметрического определения тиамина в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах, включающий кислотный и ферментативный гидролиз исследуемого образца, очистку гидролизата от примесей, окисление содержащегося в образцах тиамина в тиохром, экстракцию тиохрома, измерение интенсивности флуоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором и вычисление содержания тиамина,при этом, в качестве фермента для ферментативного гидролиза используют такадиастазу,а для очистки гидролизата от примесей используют 50 -ный раствор трихлоруксусной кислоты. Пример 1. Определение тиамина в пищевых продуктах. 1. Кислотный гидролиз. Навеску продукта 6,0-8,0 г помещают в колбу вместимостью 250 см 3 и приливают 150 см 3 соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм 3. Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин. По окончании гидролиза колбу с содержимым охлаждают до температуры 18-25 С, добавляют 5-7 см 3 насыщенного раствора натрия уксуснокислого и 1 см 3 толуола. 2. Ферментативный гидролиз. К полученной по п. 1 смеси добавляют 5 см 3 2 -ного раствора такадиастазы и помещают в термостат, где выдерживают 3 часа при температуре (501) С. После этого гидролизат охлаждают до 18-25 С. 3. Очистка гидролизата. К полученному по п. 2 гидролизату добавляют 5 см 3 50 -ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и переносят содержимое в мерную колбу вместимостью 250 см 3, доводят объем до метки дистиллированной водой и фильтруют. 4. Окисление тиамина в тиохром. В 4 градуированные пробирки с притертыми пробками объемом 25 см 3 вносят по 5 см 3 фильтрата, полученного по п. 3, добавляют по 2 см 3 этилового спирта и встряхивают. Затем в 2 пробирки добавляют по 1,2 см 3 свежеприготовленной окислительной смеси (смесь 2 см 3 1 -ного раствора железосинеродистого калия и 10 см 3 раствора гидроокиси натрия концентрацией 0,3 г/ см 3), в две другие - по 1,2 см 3 раствора гидроокиси натрия концентрацией 0,3 г/см 3 (контроль). Все пробирки энергично встряхивают. 2 8337 1 2006.08.30 5. Экстракция. Для извлечения тиохрома во все пробирки по п. 4 прибавляют по 13 см 3 бутилового или изобутилового спирта и энергично встряхивают в течение 1 мин, затем помещают в темное место на 10 мин. После этого сливают верхний слой бутилового спирта, добавляют по 2 см 3 этилового спирта и помещают в кюветы для измерения интенсивности флуоресценции. Аналогичным образом по пп. 4 и 5 поступают со стандартным раствором тиамина концентрацией 0,2 мкг/ см 3. 6. Измерение интенсивности флуоресценции тиохрома. Интенсивность флуоресценции тиохрома измеряют при светофильтрах, дающих диапазон длины волн возбуждения в области 360-390 нм и флуоресценции - 400-450 нм, начиная с проб стандартного раствора тиамина. 7. Обработка результатов. Содержание тиаминав мг/100 г продукта вычисляют по формуле где А - среднее из показаний флуориметра для испытуемой пробы, ед. прибора 1 - показание флуориметра для контроля к испытуемой пробе, ед. прибора В - показание флуориметра для стандартного раствора тиамина, ед. прибора 1 - показание флуориметра для контроля к стандартному раствору тиамина, ед. прибора М - массовая доля тиамина во взятом для окисления тиамина в тиохром объеме стандартного раствора, мкг- общий объем гидролизата, см 3 1 - объем испытуемого раствора, взятого для окисления тиамина в тиохром, см 3 М 1 - масса пробы продукта, взятой для анализа, г 10 - пересчет из мкг/г в мг/100 г продукта. Вычисления проводят с точностью до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений. Результаты определения тиамина в пищевых продуктах предлагаемым способом представлены в таблице. Таблица Определение тиамина в пищевых продуктах Время ферментаСпособ опреСпособ очистки гидроли- Время Выход тиамина,тивного гидролиделения зата очистки, ч Пример 2. Определение тиамина в кормах. Определение тиамина в кормах проводится аналогично примеру 1. Пример 3. Определение тиамина в продовольственном сырье. Определение тиамина в продовольственном сырье проводится аналогично примеру 1. 3 8337 1 2006.08.30 Таким образом, по сравнению с прототипом заявляемый способ обладает следующими преимуществами сокращает время ферментативного гидролиза в 4-5 раз упрощает стадию очистки гидролизата и сокращает время очистки в 3 раза повышает на 7 точность определения заменяет дефицитные ферменты (амилоризин и пектофоэтидин П 10 ) используемые в прототипе на такадиастазу. Источники информации 1. ГОСТ 30627.5-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина 1 (тиамина). Введ. 01.05.2000. - Минск Изд-во стандартов, 1999. С. 6 (аналог). 2. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов/Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. - М. Брандес, Медицина, 1998. - С. 150-155 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4

МПК / Метки

МПК: G01N 21/64

Метки: определения, флуориметрического, продовольственном, продуктах, кормах, способ, или, пищевых, сырье, тиамина

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/4-8337-sposob-fluorimetricheskogo-opredeleniya-tiamina-v-kormah-prodovolstvennom-syre-ili-pishhevyh-produktah.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ флуориметрического определения тиамина в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах</a>

Похожие патенты