Препарат, содержащий производное L-глутамина, обладающий иммуномодулирующей активностью

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт биохимии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Нефдов Леонид Иванович Горецкая Марианна Викторовна Мотылевич Жанна Витальевна Требухина Раиса Васильевна Каравай Александр Владимирович(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт биохимии Национальной академии наук Беларуси(56)2080120 С 1, 1997.2165254 С 2, 2001. Каравай А.В. и др. Международная научная конференция, посвященная 40 летию Гродненского государственного медицинского института Сборник материалов. - Гродно, 1998, ч. 1. - С. 27. Леднева И.О. и др. Международная научная конференция, посвященная 40 летию Гродненского государственного медицинского института Сборник материалов. - Гродно, 1998, ч. 1. - С. 41. Нефедов Л.И. и др. Клинико-лабораторные аспекты метаболической терапии Сборник статей 2-й республиканской конференции, посвященной 65-летию со дня основания кафедры биохимии ВГМУ. - Витебск, 1999. - С. 186188. Горецкая М.В. и др. Клинико-лабораторные аспекты метаболической терапии Сборник статей 2-й республиканской конференции, посвященной 65-летию со дня основания кафедры биохимии ВГМУ. - Витебск, 1999. - С. 162163.(57) Препарат, содержащий производное -глутамина, обладающий иммуномодулирующей активностью, отличающийся тем, что в качестве производного -глутамина содержит -фенилацетил-4-глутамин и дополнительно фенилацетат при массовом соотношении 1,53,5. Изобретение относится к области медицины, а именно к лекарственным средствам. Наиболее близким к предлагаемому по биологическому действию и структуре является антинеопластон 2-1, представляющий собой смесь фенилацетата и фенилацетилглутамина в соотношении 41 ( ,.,В.2-1 //, 1990, ., . 7, . 361-369). 7889 1 2006.02.28 Недостатком известного препарата является развитие метеоризма, миелосупрессии,печеночной дисфункции ( Н., Наа Н.,..102-1//. 1995 42, . 42, . 241-249...//. 1995. . 42, . 3. . 133-140). Задачей изобретения является расширение арсенала иммуномодулирующих средств с низкой токсичностью и высоким терапевтическим индексом. Указанная задача достигается тем, что создается препарат, обладающий иммуномодулирующей активностью, при этом отличительным моментом является то, что препарат в качестве производного -глутамина содержит 1-фенилацетил-4-глутамин и дополнительно фенилацетат при массовом соотношении 1,53,5. В табл. 1 представлены данные двух серий опытов о стимулирующей активности препарата различной концентрации и сравнении его с действием митогена ФГА на цельной крови крыс самцов линии Вистар средней массой 150 г. Из табл. 1 видно, что при сравнении ФГА и 1 препарата, взятых в одинаковых объемах, индекс стимуляции (ИС) был значительно выше у ФГА, но при уменьшении объема препарата, добавляемого в лунки, ИС увеличивался с 1,7 до 2,27. При дальнейшем уменьшении концентрации и объема препарата показательным результатом был индекс стимуляции препарата 0,01 концентрации, который превысил ИС митогена и составил 6,5. В табл. 2 представлены данные, характеризующие зависимость эффекта в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) от дозы введения препарата внутрибрюшинно в концентрациях 250 мг/кг, 25 мг/кг, 2,5 мг/кг, 0,25 мг/кг. Препарат вводили мышам самцам линии СЗН массой 18-23 г внутрибрюшинно в течение 7 дней 1 раз в сутки. В день постановки реакции препарат вводили за час до начала. Из данных концентраций доза 2,5 мг/кг увеличила стимуляцию лимфоцитов на 52 . При уменьшении этой дозы эффект не наблюдался вообще, а при увеличении концентрации до 25 мг/кг стимуляция составила 40 . Но, продолжая увеличение концентрации до 250 мг/кг, получили слабое торможение на 10 . Следовательно, для стимуляции эта дозировка оказалась слишком высокой. В табл. 3 представлены данные сравнения эффекта препарата концентрацией 1 ,0,1 , 0,01 , 0,001 на цитотоксическую активность перитонеальных макрофагов с различными клетками-мишенями. Мыши самцы линии СЗН массой 18-23 г за три дня до начала реакции получили внутрибрюшинно по 2 мл 3 бактопептона для активации макрофагов. Реакцию определения цитотоксической активности макрофагов ставили в стерильных пластиковых чашках Петри. Используя в качестве клеток-мишеней различные опухолевые клетки обнаружилась закономерность, что не зависимо от того, какие опухолевые клетки были взяты, максимальный эффект наблюдался при 0,01 концентрации препарата. В табл. 4 представлен эффект подавления клеток хронического миелолейкоза различными концентрациями препарата от 0,001 до 1. При увеличении концентрации препарата возрастало подавление клеток хронического миелолейкоза. Следовательно,помимо стимуляции клеток иммунной системы, препарат сам оказывает токсический эффект. Таким образом, если говорить о иммуномодулирующей активности препарата, то она наблюдается при концентрациях 2,5-25 мг/кг в опытахпри внутрибрюшинном введении. При увеличении дозы до 250 мг/кг наблюдается слабая иммунодепрессия, а при уменьшении до 0,25 мг/кг эффект отсутствует. В опытахиммуностимулирующий эффект препарата наблюдается при концентрациях 0,1-0,01 . При уменьшении концентрации до 0,001 эффекта не наблюдается, а при увеличении концентрации препарата до 1 наблюдается либо слабое торможение, либо небольшая стимуляция. Для лучшего понимания данного изобретения приводятся примеры конкретного применения препарата. 2 7889 1 2006.02.28 Пример 1 У 6 крыс самцов линии Вистар кровь забирали инрокартикально и ставили РБТЛ в стерильных пластиковых планшетах, сравнивая препарат 1 концентрации с действием митогена фитогемагглютинина (ФГА). Импульс стимуляции препарата был значительно ниже, чем у ФГА, но был выявлен дозазависимый эффект. После чего с ФГА сравнивали препарат с концентрациями 1 и более низкими 0,1 и 0,01 . Максимальный эффект был зафиксирован у препарата с концентрацией 0,01 , который оказался выше, чем импульс стимуляции ФГА (табл. 1). Пример 2 Шести мышам линии СЗН массой 18-23 г внутрибрюшинно вводили препарат концентрацией 250 мг/кг, 25 мг/кг, 2,5 мг/кг. Через час после введения ставили РБТЛ. Концентрация 250 мг/кг оказала слаботормозящее действие. При уменьшении концентрации до 25 мг/кг получили стимулирующий эффект. Максимально стимулирующий эффект получили, уменьшив концентрацию до 2,5 мг/кг. Результаты представлены в табл. 2. Пример 3 На перитонеальных макрофагах шести мышей самцов серии СЗН массой 18-23 г сравнивали действие препарата в зависимости от его концентрации (1-0,001 ) и от выбора различных клеток-мишеней асцитная опухоль Эрлиха, рак молочной железы, хронический миелолейкоз, острый миелобластный лейкоз, рак почки. В эксперименте была прослежена четкая зависимость доза-эффект. При уменьшении концентрации препарата до 0,01 эффект возрастал, при 0,001 концентрации эффект уже отсутствовал. Следовательно, эта концентрация оказалась слишком низкой. При выборе различных клетокмишеней лучшие показатели оказались у клеток рака почки, чуть меньше - у асцитной опухоли Эрлиха, а клетки хронического миелолейкоза и острого миелобластного лейкоза ответили практически одинаково (табл. 3). При концентрации препарата 1 наблюдалось слабое подавление цитотоксического эффекта. Пример 4 Было изучено действие препарата на клетки хронического миелобластного лейкоза. Выяснилось, что здесь наблюдается обратная зависимость. При увеличении концентрации препарата увеличивался токсический эффект (табл. 4). Пример 5 Жизнеспособность лимфоцитов, культивируемых совместно с препаратом с различными концентрациями (от 2 до 0,001 ), определяли в тесте с трипановым синим. После подсчета клеток в камере Горяева их жизнеспособность составила 95 . Это подтверждает низкую токсичность препарата. Таким образом, предлагаемый препарат обладает выраженным иммуномодулирующим эффектом и может быть использован в медицинской практике. Таблица 1 Зависимость индекса стимуляции в реакции бласттрансформации лимфоцитов от концентрации препаратаПрепараты Концентрация (мкл) ИС ФГА 60 4,1 ДГ 160 1,7 ДГ 120 2,0 ДГ 110 2,27 ДГ 0,140 2,2 ДГ 0,0140 6,5 Примечание ФГА - митоген, фитогемагглютинин (1120) ДГ - препарат, содержащий производное -глутамина. 7889 1 2006.02.28 Таблица 2 Зависимость эффекта в РБТЛ от дозы препарата через 1 час после введенияДоза ДГ Эффект Индекс 250 мг/кг торможение 1025 мг/кг стимуляция 402,5 мг/кг стимуляция 520,25 мг/кгконтролю Примечание ФГА - митоген, фитогемагглютинин ДГ - препарат, содержащий производное -глутамина. Таблица 3 Зависимость цитотоксической активности перитонеальных макрофагов от концентрации препарата, содержащего производное -глутамина. Сравнение эффекта препарата с различными клетками мишенямиКонцентрация препарата ОПМФ ОПМФДГ 1 ОПМФДГ 0,1 ОПМФДГ 0,01 ОПМФДГ 0,001 Острый миелобластный лейкоз 19,318,037,044,020,6 Хронический миелобластный лейкоз 24,022,041,546,025,0 Примечание МФ - макрофаги ДГ - препарат, содержащий производное -глутамина АОЭ - клетки асцитной опухоли Эрлиха РМЖ - рак молочной железы. Таблица 4 Влияние различных концентраций препарата на клетки хронического миелолейкозаКонцентрация препарата Эффект подавления ОПДГ 140 ОПДГ 0,129 ОПДГ 0,0118 ОПДГ 0,0016 Примечание ОП - опухолевые клетки ДГ - препарат, содержащий производное -глутамина. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.

МПК / Метки

МПК: A61K 31/05, A61K 31/195, A61P 37/02

Метки: производное, содержащий, l-глутамина, активностью, обладающий, иммуномодулирующей, препарат

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/4-7889-preparat-soderzhashhijj-proizvodnoe-l-glutamina-obladayushhijj-immunomoduliruyushhejj-aktivnostyu.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Препарат, содержащий производное L-глутамина, обладающий иммуномодулирующей активностью</a>

Похожие патенты