Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(54) ПРИМЕНЕНИЕ КСАНТИНОЛА НИКОТИНАТА ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Кучеров Игорь Иванович Подольская Ирина Александровна Мистрюкова Любовь Олеговна Коржев Михаил Олегович Абаев Аркадий Юрьевич Рытик Петр Григорьевич(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(56)2174982 С 2, 2001. Рытик П.Г. и др. Современные проблемы инфекционной патологии человека. Материалынаучно-практической конференции. - Мн., 2001. - С. 201-207. Кучеров И.И. и др. Вторая международная конференция Вирусные гепатиты и ВИЧ-инфекция эпидемиология,диагностика, профилактика, лечение. Мн., 1999. - С. 79. Кучеров И.И. и др. Инфекция и иммунитет. Материалы, приуроченные кМеждународному форуму по глобальной вакцинологии Вакцины и иммунизация. - Мн., 2001. - С. 141-146.(57) Применение ксантинола никотината в качестве препарата, подавляющего размножение вируса иммунодефицита человека в Т-лимфобластоидных клетках. Изобретение относится к медицине, в частности, к вирусологии и может быть использовано для решения задачи профилактики и лечения ВИЧ-инфекции/СПИДа. В настоящее время основной стратегией лечения ВИЧ-инфекции/СПИДа является комбинированное применение этиотропных лекарственных средств 1, подавляющих репликацию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) за счет прямого воздействия на его ферменты, участвующие в этом процессе (обратную транскриптазу и протеазу), в частности азидотимидин (АЗТ) 2. Однако, все, без исключения, используемые для этой цели лекарственные средства имеют ряд ограничений для своего применения. Во-первых, высокая стоимость комбинированной этиотропной терапии (до 10 тысячв год на 1 пациента) делают ее труднодоступной для населения большинства развивающихся стран 3,к которым относится и Беларусь. Так, стоимость 30-дневного курса лечения лишь одним препаратом АЗТ (цена 1 таблетки 2,32 доллара США) составляет около 418 долларов США. Во-вторых, все эти препараты обладают выраженным побочным действием и трудно переносятся пациентами 1. Так, применение нуклеозидных ингибиторов ВИЧ, пред 7678 1 2006.02.28 ставителем которых является АЗТ, способно вызывать такие побочные эффекты, как нейтропения, анемия, панкреатиты, периферическая нейропатия, афтозные язвы, диаррея и др. И, наконец, третье - эффективность применения АЗТ (и других нуклеозидных ингибиторов ВИЧ) уже спустя несколько месяцев существенно снижается вследствие селекции АЗТ-резистентных вариантов ВИЧ 4. Известно также, что формирующаяся у ВИЧ резистентность к одному из нуклеозидных препаратов может носить перекрестный характер 5. Задача изобретения поиск новых ингибиторов ВИЧ среди уже используемых в медицинской практике лечебных препаратов другого назначения, доступных по цене, без ярко выраженных побочных действий и активных в отношении резистентных к нуклеозидным ингибиторам штаммов ВИЧ. Результат достигается применением ксантинола никотината для подавления ВИЧ в культуре клеток. Ксантинола никотинат (7-2-Окси-3-(-метил-бета-оксиэтиламино)-пропил-теофиллина никотинат) известен как сердечно-сосудистое спазмолитическое средство 6. Побочные действия слабо выражены и иногда могут проявляться в виде общей слабости и головокружения. Производитель Борисовский завод медпрепаратов. Форма выпуска таблетки по 0,15 г или 15 раствор для инъекций 2 мл, по 10 ампул в пачке. Стоимость упаковки (60 таблеток) на 01.09.02 - 2055 бел. руб. (34,25 бел. руб. за 1 таблетку). Назначается по 1 таблетке 3 раза в день. Стоимость 30-дневного применения препарата составляет менее 2 долларов США. Новизна изобретения заключается в обнаружении у ксантинола никотината новых биологических свойств в виде проявления анти-ВИЧ активности в культуре клеток. Оригинальность изобретения в установлении наличия у широко применяемого в практической медицине сердечно-сосудистого препарата новой функции - способности подавлять размножение ВИЧ в клеточных культурах. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1. Определение анти-ВИЧ активности ксантинола никотината методом формазанового теста (ФТ). Эксперименты проводились на трех Т-лимфобластоидных клеточных линиях 3,4/8 и МТ-4. Инфекционным агентом служил выделенный в Беларуси от вирусоносителя высокорепликативный штамм ВИЧ-1 с инфекционным титром не менее 6,0 ТЦД 50. Испытания проводили на двух клонах вируса АЗТ-чувствительном (-) и АЗТрезистентном . Постановку ФТ проводили в терапевтическом варианте с одновременным внесением в клеточные культуры препарата и вируса. Суть метода заключается в том,что после добавления в культуру реагентаживыми клетками адсорбируется образующийся формазановый продукт, степень накопления которого после растворения в органическом инградиенте (ДМСО) измеряется на спектрофотометре при длине волны 540 нм. О наличии анти-ВИЧ активности препарата судили на 5-е сутки после заражения клеток по индексу защиты (ИЗ) клеток. Показатель ИЗ выше 50 указывал на наличие у препарата ВИЧ-ингибирующих свойств. В результате испытаний ксантинола никотината в ФТ установлено, что препарат обладает анти-ВИЧ активностью в диапазоне концентраций 50,0-0,5 мкг/мл в случае (-) клона ВИЧ-1 и 50,0-10,0 мкг/мл в опытах наклоне ВИЧ-1 - 50,0-2,0 мкг/мл. Химиотерапевтический индекс препарата равнялся 200. Пример 2. Оценка анти-ВИЧ активности ксантинола никотината по прижизненной окраске клеток трипановым синим . 2 7678 1 2006.02.28 Испытания проводились на Т-лимфобластоидной клеточной линии МТ-4 в аналогичных с ФТ условиях. Результаты теста учитывались на 5-е сутки путем прижизненной окраски клеток 0,2 раствором трипанового синего ( ). Методика позволяет непосредственно судить о количестве живых (неокрашенных) и мертвых (окрашенных в синий цвет) клеток, подсчитываемых в камере Горяева под световым микроскопом Ломо АУ-12 (ув. 1,5720). Об эффективности препарата судили по величине 50 (), при которой число живых клеток, обработанных препаратом и инфицированных ВИЧ, на 50 превышало их число в контроле вируса. В результате установлено, что ксантинола никотинат защищал клетки от вирулицидного действия ВИЧ-1. 50 препарата для (-) клона ВИЧ-1 находилась в интервале 50,0-0,4 мкг/мл, а дляклона ВИЧ-1 - 50,0-2,0 мкг/мл. Пример 3. Ингибирование синцитиеобразующей активности (ИСА) ВИЧ. Испытания проводили на Т-лимфобластоидной клеточной линии -3 с использованием синцитиеобразующего штамма ВИЧ-1. Учет результатов проводили на 5-е сутки после заражения клеток путем подсчета синцитиев на 30 полях зрения в инвертированном микроскопе -(ув. 1010/.25). Позитивными считались те концентрации препарата, при которых количество синцитиев было снижено не менее, чем на 25 по сравнению с контролем вируса. В результате испытаний установлено, что ксантинола никотинат в концентрации 50,0 мкг/мл подавлял синцитиеобразование, индуцированное ВИЧ-1, на 27-29 . Суммарные данные оценки различными методами ингибирующего действия ксантинола никотината на ВИЧ приведены в таблице. Табл. Результаты испытаний ксантинола никотината различными методами на анти-ВИЧ активность Таким образом, выявлен лекарственный препарат, снижающий инфекционную активность ВИЧ в культурах Т-лимфобластов. Как видно из примеров 1-3 (см. таблицу), ксантинола никотинат предотвращает гибель более 50 клеток от цитопатического действия ВИЧ-1, что, по современным представлениям, позволяет считать его препаратом, обладающим анти-ВИЧ активностью, в том числе и в отношении АЗТ-резистентногоклона ВИЧ-1. Источники информации 1..,.//.3, 2002. - .3. 2..-,.-.,-..//, ,. - 1990. - . 616. - . 218. 3.Международная конференция по СПИДу, Дурбан (ЮАР) // ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. - 2000. - Т. 4. -2. - С. 9. 3 Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.

МПК / Метки

МПК: C12N 7/04, A61P 31/18, A61K 31/52, A61K 31/455

Метки: культуре, подавления, ксантинола, никотината, клеток, вич, применение

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/4-7678-primenenie-ksantinola-nikotinata-dlya-podavleniya-vich-v-kulture-kletok.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Применение ксантинола никотината для подавления ВИЧ в культуре клеток</a>

Похожие патенты