Способ оценки модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий рода Pseudomonas

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОЦЕНКИ МОДУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ОБРАЗЦА ПОВЕРХНОСТНЫХ, ПОДЗЕМНЫХ ИЛИ СТОЧНЫХ ВОД НА РОСТ ПОПУЛЯЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Дудчик Наталья Владимировна Трешкова Татьяна Сергеевна Филонов Валерий Петрович Застенская Ирина Алексеевна Ильюкова Ирина Ивановна Дроздова Елена Валентиновна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56) ФОМИН Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам. - М., 2000. - С. 595-596.20070865, 2009. Методика экспрессного определения токсичности воды с помощью люминесцентного бактериального теста. М., 2000,///.11481 1, 2008.2175352 1, 2001.1165989 , 1985.2258676 2, 2005.1474545 1, 1989.(57) Способ оценки модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий рода , заключающийся в том, что готовят питательную среду с 6,7-6,9, содержащую 3,0 г глюкозы, 1,0 г хлористого аммония, 3,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного двухводного, 2,7 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 1,0 г пептона ферментативного, 1,0 г кислотного гидролизата казеина и 1000 мл воды дистиллированной, в которую вносят тест-культуру бактерий рода, в питательные среды с тест-культурой параллельно вносят исследуемый образец и равный ему объем дистиллированной воды в контрольном опыте, осуществляют культивирование тест-культуры с рабочей концентрацией 104-106 КОЕ/мл в термостате при температуре 30-37 С, периодически с интервалом 1 час измеряют оптическую плотность суспензий бактерий при длине волны 540 нм, по максимальному значению оптической плотности определяют наступление стационарной фазы роста тест-культуры,после чего рассчитывают показатель модулирующего действия образцапо формуле 2,1 где 1 - время наступления стационарной фазы роста в контрольном опыте, час,2 - время наступления стационарной фазы роста в опыте с исследуемым образцом, час,и при значении 1 действие образца на тест-культуру оценивают как стимулирующее,при значении 1 действие образца на тест-культуру оценивают как ингибирующее, а при значении 1 образец не обладает стимулирующим или ингибирующим действием на тест-культуру. 13667 1 2010.10.30 Изобретение относится к разделу гигиены окружающей среды, экотоксикологии и санитарной микробиологии. Известен способ оценки качества поверхностных, подземных или сточных вод, заключающийся в определении скорости роста бактерий штаммштамм,33/2 или штамм 9434, при воздействии различных разбавлений пробы воды по сравнению со скоростью роста бактерий в аналогичных условиях, но без испытуемой пробы, для чего измеряют оптическую плотность клеточной суспензии тест-штамма микроорганизма через 161 час культивирования, рассчитывают процент замедления роста для каждого разбавления и определяют 10 и 50 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявленному. Однако прототип обладает низкой чувствительностью, что приводит к необходимости длительного, до 16 часов, времени проведения испытаний. Кроме того, прототип не дает возможность оценить стимулирующее воздействие пробы поверхностных, подземных или сточных вод на микроорганизмы. Общими признаками для заявляемого способа и прототипа является то, что осуществляют параллельное внесение образцов в питательную среду, содержащую ранее определенную концентрацию тест-культуры, и проводят их совместное культивирование с последующей обработкой полученных данных. Задачей заявленного изобретения является разработка качественного способа оценки модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий рода . Поставленная задача достигается следующим образом Предложен способ оценки модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий родапутем подготовки питательной среды с 6,7-6,9, содержащей 3,0 г глюкозы, 1,0 г хлористого аммония,3,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного двухводного, 2,7 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 1,0 г пептона ферментативного, 1,0 г кислотного гидролизата казеина и 1000 мл воды дистиллированной, в которую вносят тест-культуру бактерий рода , в питательные среды с тест-культурой параллельно вносят исследуемый образец и равный ему объем дистиллированной воды в контрольном опыте, осуществляют культивирование тест-культуры с рабочей концентрацией 104-106 КОЕ/мл в термостате при температуре 30-37 С, периодически с интервалом 1 час измеряют оптическую плотность суспензий бактерий при длине волны 540 нм, по максимальному значению оптической плотности определяют наступление стационарной фазы роста тест-культуры, после чего рассчитывают показатель модулирующего действия образцапо формуле 2,1 где Т 1 - время наступления стационарной фазы роста в контрольном опыте, час,Т 2 - время наступления стационарной фазы роста в опыте с исследуемым образцом, час,и при значении 1 действие образца на тест-культуру оценивают как стимулирующее,при М 1 действие образца на тест-культуру оценивают как ингибирующее, а при значении М 1 образец не обладает стимулирующим или ингибирующим действием на тесткультуру. Из раздела микробиологии, посвященной кинетике микроорганизмов, известно, что рост микроорганизмов в периодической системе имеет, как правило, несколько фаз лагфазу, выраженную фазу быстрого роста культуры (логарифмическую фазу), стационарную фазу и фазу отмирания или фазу автолиза 2. Критерием оценки модулирующего действия образцов целесообразно выбрать время наступления стационарной фазы роста популяции микроорганизмов, для чего необходимо проводить измерение оптической плотности суспензии тест-штамма в жидкой питательной среде каждые 1-2 часа, отображая зависимость оптической плотности суспензии от времени роста культуры в виде гра 2 13667 1 2010.10.30 фика. Критическим моментом для проведения оптической детекции роста биомассы культуры является состав среды культивирования. Он должен обеспечить нормальное развитие тест-микроорганизма и быстрое наступление стационарной фазы роста, но при этом не маскировать как ингибирующее, так и стимулирующее действие образца. Кроме того,среда должна быть прозрачна, бесцветна (или слегка окрашена). Согласно нашим исследованиям, таким требованиям соответствуют синтетические или полусинтетические питательные среды. Такой прием позволяет повысить точность и воспроизводимость способа, а также сократить время выполнения исследования за счет того, что критерием для оценки модулирующего действия образца предложено считать время наступления стационарной фазы развития популяции бактерий рода , для чего осуществляют регистрацию оптической плотности суспензии микроорганизмов в питательной среде предложенного состава. Пример выполнения Требуется определить модулирующее действие трех водных образцов на рост тесткультуры бактерий рода , для чего необходимо рассчитать показательобразцов 1 - образец поверхностных вод,2 - образец подземных вод 3 - образец сточных вод. В качестве питательной среды при проведении исследования используют среду следующего состава г/л, глюкоза - 3,0, хлористый аммоний - 1,0, натрий фосфорнокислый двузамещенный двухводый - 3,5, калий фосфорнокислый двузамещенный - 2,7, пептон ферментативный - 1,0, кислотный гидролизат казеина - 1,0, вода дистиллированная - 1000 мл, среды 6,7-6,9. Стерилизация 121 С в течение 15 мин. В качестве тест-штамма используют штамм 9027 из Американской коллекции типовых культур. Для приготовления рабочей культуры тест-штамм 9027 отсеивают на мясопептонный бульон и инкубируют в термостате при 30-37 С в течение 10 часов. Содержание клеток тест-штамма доводят до 107 КОЕ/мл, что является оптимальным для данного исследования. Подтверждение содержания клеток в рабочей культуре проводят путем высева на питательные агаризованные среды. В конические колбы объемом 50 см 3 с 10 см 3 среды культивирования указанного состава вносят рабочую культуру. Для оценки действия образцов в колбы с питательной средой добавляют по 3 мл анализируемых образцов. Контролем служит питательная среда с внесенной суспензией микроорганизмов с равным объемом дистиллированной воды вместо образца. Культивируют колбы при температуре 30 С до достижения стационарной фазы роста, для чего проводят измерения оптической плотности культуры. Пробы отбирают в количестве 2 см 3 в начале опыта и через каждый час, соблюдая правила асептики. Измерения проводят не менее чем в двух повторностях для каждого образца на спектрофотометре при длине волны 540 нм, длина оптического пути составляет 1 см. Находят зависимость оптической плотности суспензии от времени роста культуры в виде графика,пользуясь программой(фигура 1, где по оси абсцисс отмечен показательв часах, а по оси ординат - концентрация образца в процентах). Получены следующие результаты (таблица). 13667 1 2010.10.30 Результаты оценки модулирующего действия образцов на тест-штамм 15442 Действие Образец 1 Ингибирующее Не обладает ингибирующим или Образец 2 4,25 4,25 1,0 стимулирующим действием Образец 3 4,25 3,21 1,32 Стимулирующее 1 - время достижения стационарной фазы в контроле. 2 - время достижения стационарной фазы в опыте 1-3. 1 4,25 Таким образом, достигаемый технический результат заявленного способа заключается в качественной оценке модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий рода , а также в расширении арсенала чувствительных тест-объектов для проведения испытания. Источники информации 1. Фомин Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам Энциклопедический справочник. 3-е издание, переработанное и дополненное. - Москва, 2000. - С. 595-596 (прототип). 2. Методы общей бактериологии / Под. ред. Ф. Герхарда и др. Т. 1. - С. 376-377. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4

МПК / Метки

МПК: C12Q 1/02, G01N 33/18

Метки: образца, подземных, рода, или, модулирующего, популяции, вод, оценки, поверхностных, сточных, pseudomonas, рост, способ, бактерий, действия

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/4-13667-sposob-ocenki-moduliruyushhego-dejjstviya-obrazca-poverhnostnyh-podzemnyh-ili-stochnyh-vod-na-rost-populyacii-bakterijj-roda-pseudomonas.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ оценки модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий рода Pseudomonas</a>

Похожие патенты