Способ флуориметрического определения селена в биологических объектах или пищевых продуктах

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕЛЕНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ ИЛИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Ивашкевич Людмила Станиславовна Зайцев Виктор Александрович Филонов Валерий Петрович Бутько Зинаида Трофимовна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(57) Способ флуориметрического определения селена в биологических объектах или пищевых продуктах, включающий мокрое сжигание органической части исследуемого образца смесью азотной кислоты и перекиси водорода, восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного, получение комплекса селенистой кислоты и 2,3 диаминонафталина - 4,5-пиазоселенола и измерение интенсивности флуоресценции полученного комплекса с последующим определением селена в исследуемом образце, отличающийся тем, что берут образец массой 0,5-1,0 г, мокрое сжигание органической части исследуемого образца осуществляют в микроволновом анализаторе при объемном соотношении азотной кислоты и перекиси водорода, равном 8 ,2 под давлением 1,1-1,5 МПа в течение 15-25 минут, восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного ведут одновременно с удалением азотной кислоты путем добавления к минерализованному образцу 0,5 мл 35 -ной перекиси водорода и 1-2 мл соляной кислоты и упаривания досуха. Изобретение относится к медицинской химии, биохимии, в частности к способам контроля содержания селена в биологических объектах, пищевых продуктах и предназначено для лабораторных служб госэпиднадзора и других медицинских учреждений, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также исследующих обеспеченность организма человека важнейшим незаменимым микроэлементом селеном. Известен способ флуориметрического определения селена в биологических объектах и пищевых продуктах, включающий мокрое сжигание органической части исследуемого образца, восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного, образование комплекса селенистой кислоты и 2,3-диаминонафталина - 4,5-пиазоселенола и измерение интенсивности флуоресценции полученного комплекса, при этом мокрое сжигание органической части исследуемого образца осуществляют в аналитическом автоклаве смесью 12675 1 2009.12.30 азотной кислоты и перекиси водорода, взятых в объемном соотношении 20,5 под давлением 5-10 МПа в течение 1-2 часов, а азотную кислоту удаляют кипячением образца с добавлением перекиси водорода в течение 10 минут. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общими признаками для заявляемого способа и прототипа является мокрое сжигание органической части образца, удаление следов азотной кислоты, восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного, образование между селенистой кислотой и 2,3-диаминонафталином комплекса 4,5-пиазоселенола и последующее флуориметрирование данного комплекса. Однако указанный способ-прототип обладает следующими недостатками. Полное окисление органической части образца достигается в течение 1-2 часов. Процесс удлиняется за счет необходимости предварительной экспозиции образца с окислительной смесью в течение 10-12 часов, а также охлаждения автоклава после минерализации в течение 4050 минут. Кроме того, азотную кислоту, используемую при анализе в составе окислительной смеси, невозможно удалить кипячением с перекисью водорода. Присутствие остатков азотной кислоты влияет на флуоресценцию комплекса 4,5-пиазоселенолов и приводит к искажению результатов анализа. Задачей заявляемого способа является сокращение времени проведения анализа, повышение точности результатов. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ флуориметрического определения селена в биологических объектах или пищевых продуктах, включающий мокрое сжигание органической части исследуемого образца смесью азотной кислоты и перекиси водорода, восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного, получение комплекса селенистой кислоты и 2,3-диаминонафталина - 4,5-пиазоселенола и измерение интенсивности флуоресценции полученного комплекса с последующим определением селена в исследуемом образце, когда берут образец массой 0,5-1,0 г, мокрое сжигание органической части исследуемого образца осуществляют в микроволновом минерализаторе при объемном соотношении азотной кислоты и перекиси водорода, равном 82, под давлением 1,1-1,5 МПа в течение 15-25 минут восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного ведут одновременно с удалением азотной кислоты путем добавления к минерализованному образцу 0,5 мл 35 -й перекиси водорода и 1-2 мл соляной кислоты и упаривания досуха. Результаты определения селена заявляемым способом и согласно прототипу приведены в табл. 1-3. Содержание селена в исследуемых образцах определяют используя в каждой серии определений референс-стандарты. Результаты определений хорошо соответствуют регламентированным значениям. Пример 1 Определение селена в сыворотке крови. Во фторопластовом сосуде для микроволнового минерализатора взвешивают 1 г исследуемого продукта и соответствующего образца сравнения. Дальнейшие исследования проводят аналогично, как и при построении калибровочной кривой. Построение калибровочной кривой 1. Мокрое сжигание. Для построения калибровочной кривой в 6 фторопластовых сосудах вносят по 3 мл стандартных рабочих растворов селенистокислого натрия, что соответствует 0 5 10 20 30 40 нг селена в пробе. Во все сосуды добавляют по 8 мл концентрированной азотной кислоты и 2,0 мл перекиси водорода и оставляют при комнатной температуре на 15 минут. Затем проводят минерализацию в течение 25 минут, используя контрольные цифры давления 1,1 МПа и температуры 210 С. Анализируемые образцы после микроволновой минерализации охлаждают и содержимое количественно переносят в фарфоровые тигли. 2. Удаление азотной кислоты и восстановление шестивалентного селена до селена четырехвалентного. 2 12675 1 2009.12.30 Для удаления следов азотной кислоты в пробы добавляют по 0,5 мл 35 -й перекиси водорода, по 1 мл 6 М соляной кислоты и упаривают досуха. Образцы растворяют в 0,1 М соляной кислоте, переносят в мерную колбу требуемого(в зависимости от содержания селена) объема. Для анализа берут аликвотную часть, равную 1 мл, добавляют 1,0 мл 25 муравьиной кислоты и перемешивают. На этой стадии процесс можно оставить до следующего дня. 3. Образование комплекса 4,5-пиазоселенола между селенистой кислотой и 2,3 диаминонафталином и его флуориметрическое определение. В каждую пробирку добавляют по 1,0 мл гидроксиламин солянокислого раствора тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и по 1,0 мл раствора аммиака. Устанавливаютпроб до 1,8-2,0, корректируя его 4 М раствором соляной кислоты. К полученным растворам добавляют по 1,0 мл заранее приготовленного раствора 2,3 диаминонафталина и выдерживают 30 минут при 50 С без попадания прямого света. По окончании процесса пробы охлаждают до комнатной температуры и каждую интенсивно экстрагируют 2,5 мл циклогексана в течение одной минуты. На спектрофлуориметре измеряют величину флуоресценции органического экстракта (в течение 2 часов) при длине волны 369 нм и эмиссии 518 нм. 4. Обработка результатов На основании полученных данных строят калибровочную кривую зависимости флуоресценции от количества селена в пробе. Массовую долю селенав мкг/кг (мкг/дм) продукта вычисляют по формуле ХВ/аС,где В - массовая доля селена в пробе, определенная по калибровочной кривой а - масса образца, содержащаяся в аликвоте, взятой на анализ, или для жидких продуктов объем образца, взятого на анализ мл. С - масса навески образца, взятого на анализ, г, или для жидких продуктов объем образца, взятого на анализ, мл. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение двух определений. Относительное стандартное отклонение в интервале от 1 до 600 мкг/кг-10 . Полученные данные по определению селена в сыворотке крови приведены в табл. 1. Таблица 1 Способ исследования Содержание селена,Сходимость,Время минерализации,мкг/л мин. Заявляемый способ 75,9 70,9 6,8 25 Прототип 76,2 69,0 9,9 60 Пример 2 Определение селена в волосах головы. Определение селена в волосах ведем аналогично определению селена в сыворотке крови. Используемая масса навески - 0,5 г. Полученные данные по определению селена в волосах головы приведены в табл. 2. Таблица 2 Способ исследования Содержание селена,Сходимость,Время минерализации,мкг/кг мин. Заявляемый способ 459 485 5,5 20 Прототип 448 480 6,9 60 Пример 3 Определение селена в куриных яйцах. Определение селена в куриных яйцах ведем аналогично определению селена в сыворотке крови. Используемая масса навески - 0,5 г. Результаты определения селена в куриных яйцах приведены в табл. 3. 12675 1 2009.12.30 Таблица 3 Метод исследований Содержание селена,Сходимость,Время минерализации,мкг/кг мин. Заявляемый способ 175,3 187,7 6,8 25 Прототип 169,5 183,3 7,8 120 Таким образом, по сравнению с прототипом заявляемый способ обладает следующими преимуществами сокращает время минерализации органической части образца на 0,5-1,5 часа, повышает точность определения микроэлемента селена в биологических объектах. Кроме того, метод является более безопасным давление, создаваемое в автоклаве, составляет 5-10 МПа, в микроволновом минерализаторе - 1,1-1,5 МПа. Использование данного способа увеличивает выбор вариаций в аппаратурном оформлении, расширяет возможности применения способа для определения содержания микроэлемента селена в пищевых продуктах, биологических средах, организме человека, что необходимо для исследования обеспеченности организма микроэлементом селеном, а также для диагностики и лечения целого ряда заболеваний, связанных с нарушениями антиоксидантной защитной системы организма. Источники информации 1. Патент РБ 8202, МПК 01 21/64. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4

МПК / Метки

МПК: G01N 21/64

Метки: флуориметрического, определения, или, продуктах, биологических, способ, пищевых, селена, объектах

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/4-12675-sposob-fluorimetricheskogo-opredeleniya-selena-v-biologicheskih-obektah-ili-pishhevyh-produktah.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ флуориметрического определения селена в биологических объектах или пищевых продуктах</a>

Похожие патенты