Последовательность ДНК, кодирующая полипептид стафилокиназы, экспрессионная плазмида, полипептид стафилокиназы, фамацевтическая композиция

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

6. Экспрессионная плазмида, отличающаяся тем, что она содержит одну из последовательностей ДНК согласно пп. 1-5, оперативно связанную с контрольными экспрессионными последовательностями, причем она свободна от последовательностей, кодирующих сигнальные пептиды стафилокиназы.7. Экспрессионная плазштда по п. 6, отличающаяся тем, что она содержит одну из последовательностей ДНК согласно пп. 1-5, на 5-конце оперативно связанную со следующим регионом трансляции и инициации8. Полипептид стафилокиназы, обладающий активирующим плазминоген действием, отличающийся тем, что он содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы,включающей БЕС) П) ЫО 4, ЗЕО П) МО 5, БЕО 113 МО 6, ЗЕО П) ЫО 7.9. Фармацевтическая композиция для лечения тромбоэмболических заболеваний сосудов,содержащая по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и активное вещество, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит по меньшей мере один полипептид стафилокиназы по п. 8 в эффективном количестве.пептидов формам стафилокиназы, бактериального активатора плазминогена, включая новые формы стафилокиназы, к способам их получения путем генной инженерии и их применению. Таким образом, изобретение включает последовательности ДНК, кодирующие предлагаемые формы стафилокиназы,рекомбинантные плазмиды, содержащие данные последовательности ДНК в комбинированном с высокоэффективными экспрессионными сигналами виде,специфические рекомбинантные клетки-хозяева, которые после встройки одной из этих экспрессионных плазмид в условиях выращивания способны кбиологическому синтезу предлагаемых форм стафилокиназ, а также методы такого выращивания и выделения форм стафилокиназь 1 из питательных сред.В связи с этим настоящее изобретение относится и к впервые получаемым моноклональным антителам против стафилокиназы.Как известно из исследований, проведенных СЬ. Ьаск (см. Матиге, 161, 1948 г.,стр. 558-560), К. С. КоЬЫпз и др. (.В 1 о 1.С 11 еп 1., 242, 1967 г., стр. 2333-2342) и К. 1711. Дасквоп и др. (Метпоз йп Еп 2 уп 1 о 1 о 3 у, 80, 1981 г., стр. 387), стафилокиназа, представляющая собой полипептид из штаммов гар 1 чу 1 ососсиз аыгеиз, способна высту пать как МСДИЗТОР трансформации проэнзима ПЛЕЪЗМИНОГСН, ИМСЮЩСГОСЯ В плазмеКрОВИ ЧСЛОВВКЗ И ЖИВОТНЫХ, В фИбрИНОЛИТИЧССКИ активный ЭНЗИМ ПЛИЗМИН, сама непроявляя протеолитическую активность. При этом механизм активации в основном еще не известен.Таким образом, предлагаемые формы стафилокиназы можно использовать в медицине и ветеринарии в качестве фармацевтических препаратов для лечения тромбоэмболических заболеваний сосудов, в то время как моноклональные антитела против стафилокиназы можно использовать и для получения активного вещества, и в качестве фармацевтических препаратов, что ниже подробнее описано.Стафилокиназа, имеющая длину молекулы 136 аминокислот, относится к группе веществ, способных к вызыванию активации фибринолитической системы через трансформацию плазминогена в плазмин и вызываемому этим расщеплению фибрина. Наиболее известными Эндогенными активаторами являются активатор плазминогена человеческой ткани и урокиназа. Другим активатором плазминогена бактериального происхождения является стрептокиназа. Известно терапевтическое применение указанных веществ для лечения тромбоэмболических заболеваний сосудов, Однако, требуется большое количество данных веществ высокой чистоты,так как указанные заболевания довольно распространены.В отличие от стрептокиназы для стафилокиназы до сих пор не создано способов ее получения в промышленном масштабе с помощью известных в инженерной микробиологии методов, хотя данный бактериальный активатор плазминогена, а именно, стафилокиназа, обладает преимуществами, например- высокой устойчивостью протеина к воздействию разных температур и- третичной структурой без дисульфиднь 1 х мостиков,- небольшим размером молекулы (14,8 кД). Это обусловлено, прежде всего тем, что производящие штаммы 5 гар 11 у 1 ососси 5 ацгеиз образуют большое количество токсичных побочных продуктов.После введения технологии рекомбинантной ДНК стал возможным синтез стафилокиназь 1 рекомбинатными организмами-хозяевами, что создало возможность эффективного производства фармацевтических препаратов,содержащих данный полипептид в качестве активного вещества.Известны из литературы два гена, кодирующих стафилокиназу, которые выделили из геномов фагов тар 11 у 1 ососси 5 аигеиз. В качестве доноров генов при этом использовали фаг С Заигеиэ (Т. Бакс и др. Мо 1.(3 еп.6 епет 190, 1983 г., стр. 271-277 Т. а 1 о и М. Тзисыа, Мцс 1.Ас 115 Кез, 11, 1983 г., стр. 7679-7693 см. также заявку ЕР Кв О 077 664) и фаг 4213 .ацгеи (см. заявку ГДР Не 245 444 и В. Ве 11 г 11 е и В. 6 ег 1 ас 11, Мо 1.(3 еп.Оепег., 210, 1987 г., стр. 528534). Гены сперва клонировали на плазмиде рВК 322 Е.со 1 й, а после некоторых шагов субклонирования их идентифицировали путем анализа последовательности ДНК.Недавно появился литературный источник о выделении дальнейшего гена стафилокиназы (см. 1). Со 11 еп и др. 131 Ьг 1 поу 51, 6, 1992 г., стр. 226-231). Этот ген,обозначаемый как ЗТАК, получали из ДНК хромосомы штаммы Баигеиэ. Все эти гены представляют собой естественные аллельнЬ 1 е варианты стафилокиназы.Ген, кодирующий полипептид стафилокиназы БАК-С, после переклонирования экспримировали в экспрессионную систему Е.со 11 в штамме Е.со 11 ША 802

МПК / Метки

МПК: C07K 14/195, A61K 38/00, C12N 15/00

Метки: фамацевтическая, плазмида, последовательность, кодирующая, композиция, полипептид, стафилокиназы, днк, экспрессионная

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/30-4242-posledovatelnost-dnk-kodiruyushhaya-polipeptid-stafilokinazy-ekspressionnaya-plazmida-polipeptid-stafilokinazy-famacevticheskaya-kompoziciya.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Последовательность ДНК, кодирующая полипептид стафилокиназы, экспрессионная плазмида, полипептид стафилокиназы, фамацевтическая композиция</a>

Похожие патенты