Применение 5-аминолевулиновой кислоты в качестве протективного средства против вируса герпеса и способ повышения резистентности клеток к вирусу герпеса

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

ПРИМЕНЕНИЕ 5-АМИНОЛЕВУЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ ПРОТЕКТИВНОГО СРЕДСТВА ПРОТИВ ВИРУСА ГЕРПЕСА И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ КЛЕТОК К ВИРУСУ ГЕРПЕСА(71) Заявители Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Вотяков Вениамин Иосифович Лобанок Елена Станиславовна Квачева Зинаида Болеславовна Шуканова Наталия Андреевна Воробей Александр Васильевич Николаева Светлана Николаевна Титов Леонид Петрович(73) Патентообладатели Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси(57) 1. Применение 5-аминолевулиновой кислоты в качестве протективного средства для культуры клеток против вируса герпеса. 2. Способ повышения резистентности культуры клеток к вирусу герпеса путем инкубирования монослоя клеток с протективным средством с последующей отмывкой клеток,отличающийся тем, что в качестве протективного средства используют 5-аминолевулиновую кислоту. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что клетки инкубируют с 5-аминолевулиновой кислотой 1,5 часа. Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может применяться в качестве протективного средства против вируса герпеса и повышать резистентность клеток к вирусу герпеса. Известны препараты интерферона, являющиеся протективными средствами - повышающими резистентность клеток к вирусам 1. Их недостатком является трудоемкость и сложность наработки больших количеств препаратов, необходимость использования компонента - индуктора интерферона, способность подавлять репродукцию вирусов лишь при 9328 1 2007.06.30 небольшой множественности инфицирования, низкая эффективность при больших дозах вируса, видовая и тканевая специфичность (малая активность в гетерологичных системах). Задачей изобретения является поиск новых, более эффективных, доступных, клинически апробированных средств, обеспечивающих резистентность клеток к вирусу герпеса, в том числе устойчивых к специфическим (официнальным) лечебным средствам (ацикловиру и фосфоноуксусной кислоте), эффективных при высоких дозах инфицирования, активных в разных гетерологичных системах. Задача решается тем, что в качестве протективного средства против вируса герпеса для культуры клеток применяют 5-аминолевулиновую кислоту (АЛК). Известно использование АЛК в качестве предшественника промежуточного продукта синтеза гема - протопорфирина, способного сенсибилизировать фотоинактивацию вирусинфицированных и злокачественно трансформированных клеток 2, 3. Однако в качестве препарата протективного действия против вируса герпеса (повышение резистентности клеток к вирусным инфекциям) ее применение не известно. Известен способ повышения резистентности клеток к вирусам 4, заключающийся в том, что монослой гомологичных клеток обрабатывают интерфероном (протективное средство повышения резистентности клеток к вирусам), инкубируют (7-24 часа), отмывают от интерферона, на монослой клеток вносят вирус в дозе 10 БОЕ/кл., инкубируют, отмывают от неадсорбированного вируса, добавляют ростовую среду, инкубируют, через 18 часов после заражения собирают культуральную жидкость и определяют титр вируса. Уровни резистентности оценивают по разнице титров вируса в необработанных и обработанных интерфероном культурах клеток и выражают вБОЕ/кл. Недостатком известного способа является его длительность, малая эффективность при больших дозах вируса (10 БОЕ/кл.), выраженная тканевая специфичность, подавление титра вируса не более 2,5 БОЕ/клетку. Задачей изобретения является сокращение времени обработки клеток для развития резистентности, повышение уровня резистентности (ингибирование репродукции вируса герпеса при больших дозах инфицирования), преодоление видовой и тканевой специфичности. Результат достигается тем, что в способе повышения резистентности культуры клеток к вирусу герпеса путем инкубирования монослоя клеток с протективным средством с последующей отмывкой клеток, в качестве протективного средства используют 5 аминолевулиновую кислоту. В предпочтительном варианте изобретения клетки инкубируют с 5-аминолевулиновой кислотой 1,5 часа. Способ иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. На монослой эпителиальных клеток почки зеленой мартышкивносят АЛК в дозе 0,6 мМ, инкубируют при 37 С в течение 1,5 часа, отмывают питательной средой Игла,заражают вирусом простого герпеса (ВПГ-1), вариантом, резистентным к ацикловиру в дозе 10 БОЕкл. Через 24 часа после заражения собирают культуральную жидкость и определяют в ней титр вируса. Снижение титра вируса на 3,5 /БОЕ/кл. Пример 2. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, резистентным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 3,5 /Б/кл. Пример 3. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, чувствительным к ацикловиру. Снижение титра вируса на 3,8 /БОЕ/кл. Пример 4. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, чувствительным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 4,0 /БОЕ/кл. 2 9328 1 2007.06.30 Пример 5. На монослой клеток глиомы крысы С 6 вносят АЛК в дозе 0,6 мМ, инкубируют при 37 С в течение 1,5 часа, отмывают питательной средой Игла, заражают ВПГ-1, вариантом, резистентным к ацикловиру в дозе 10 БОЕкл. Через 24 часа после заражения собирают культуральную жидкость и определяют в ней титр вируса. Снижение титра вируса на 4,0 /БОЕ/кл. Пример 6. Манипуляции, описанные в примере 5, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, резистентным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 3,5 /Б/кл. Пример 7. Манипуляции, описанные в примере 5, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, чувствительным к ацикловиру. Снижение титра вируса на 4,2 /БОЕ/кл. Пример 8. Манипуляции, описанные в примере 5, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1 чувствительным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 3,5 /БОЕ/кл. Сравнительные уровни резистентности клеток, вызванные АЛК и интерфероном к вирусам, представлены в таблице. Препарат Время обработки (час) Интерферон (прототип) 1,5 АЛК 1,5- доза заражения - 10 БОЕ/кл. Снижение титра вирусаБОЕ/кл. 1,0-1,5 3,5-4,2 Как видно из данных, представленных в таблице, предлагаемое протективное средство АЛК обеспечивает больший эффект резистентности клеток к вирусу герпеса по сравнению с прототипом. Таким образом, предлагаемое средство обеспечивает и способ позволяет достичь более значительной резистентности клеток к вирусным инфекциям, эффективности при высоких дозах инфицирования, активны в разных гетерологичных системах (активность которых не зависит от видовой и тканевой специфичности), сокращения времени обработки клеток для развития резистентности чувствительных и устойчивых к лекарственным препаратам вариантам вируса герпеса. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3

МПК / Метки

МПК: A61P 31/22, A61K 31/195

Метки: резистентности, качестве, клеток, применение, способ, средства, протективного, герпеса, 5-аминолевулиновой, против, вирусу, повышения, вируса, кислоты

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/3-9328-primenenie-5-aminolevulinovojj-kisloty-v-kachestve-protektivnogo-sredstva-protiv-virusa-gerpesa-i-sposob-povysheniya-rezistentnosti-kletok-k-virusu-gerpesa.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Применение 5-аминолевулиновой кислоты в качестве протективного средства против вируса герпеса и способ повышения резистентности клеток к вирусу герпеса</a>

Похожие патенты