Штамм молочнокислых бактерий и содержащий его пробиотический продукт

Номер патента: 16641

Опубликовано: 30.12.2012

Авторы: КОННОЛЛИ, Эамонн, МЕЛЛЬСТАМ, Бо

Есть еще 5 страниц.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ШТАММ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ И СОДЕРЖАЩИЙ ЕГО ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ПРОДУКТ(57) 1. Штамм пробиотических бактерий 17938. 2. Пробиотический продукт, содержащий штамм бактерий 17938. Уровень техники изобретения. Область техники, к которой относится изобретение. Настоящее изобретение относится к определенным штаммам молочнокислых бактерий, выбранных по способности повышать уровни цитокина -10, для профилактики и/или лечения колик, к способу отбора таких штаммов и к продуктам, содержащим такие штаммы. Описание предшествующего уровня техники. Несмотря на значительную распространенность и болезненность, природа и причины детской колики остаются слабо изученными. Описание этого состояния матерью представляет собой следующее ребенок, который был весел в течение всего дня, начинает хмуриться, лицо краснеет, он вытягивает ножки, кричит и продолжает плакать на протяжении приблизительно 2-20 мин, после чего приступ неожиданно заканчивается. Противоречия возникают даже в терминах, используемых для описания этого состояния. К терминам относятся детская колика, вечерняя колика, потому что боль в основном приурочена к вечеру, и трехмесячная колика, так как она исчезает приблизительно через три месяца после рождения ( ... , .. 10 .. . 1997 39-44). Разные авторы используют разные определения. Весселопределяет колику как приступ плача на протяжении трех или более часов в день в течение трех дней или более в неделю на протяжении хотя бы трех недель, и это определение наиболее принято в литературе-2000 83 (1) 44-47). На сегодняшний день главные возможные (причинные) факторы разделены на три группы психосоциальные, желудочно-кишечные и нервные нарушения развития. Психосоциальные факторы включают варианты нормального плача, влияние на поведение атипичного воспитания и проблемы во взаимоотношениях родителей и детей. Гастроинтестинальные нарушения связывают с коликой при определенном положении ног младенца и кривляниями во время приступа плача. Гастроинтестинальные факторы коротко изложены ниже. Неправильные способы кормления, такие как кормление из бутылочки, кормление в горизонтальном положении или недостаточное срыгивание после кормления, рассматривают как причинные факторы. Грудное вскармливание в первые шесть месяцев считают единственным профилактическим фактором. Риск детской колики в 1,86 раз выше у детей на искусственном вскармливании ( ,,,,, ..( ) 2003 79(2) 115-122).. показали, что колика происходит из-за чувствительности к сывороточному белку коровьего молока ( ,.--.1989 83 262). В недавнем исследовании было сделано заключение, что пищевая гиперчувствительность может расцениваться как причина лишь в незначительном количестве случаев детской колики ( ,..2000 3067-76). Недавнопоказал, что испытание гипоаллергенного молока при детской колике не подкреплено достаточным количеством данных ( ...1998 317(7170) 1451-1452). Считается, что младенцы с детскими коликами имеют больший риск аллергических заболеваний. Однако в недавнем исследовании было показано, что маркеры атопии, аллергического ринита, астмы, стридора и изменчивости максимального объема выдоха сравнимы у младенцев, страдающих детской коликой и без нее (- ,,,,./.2001 108(4) 878-882). Авторы описывали мальабсорбцию лактозы на основании проб на содержание водорода во выдыхаемом воздухе ( ,,,..1989 115 592). Не было отмечено различий в концентрации водорода в стуле младенцев, страдающих детской коликой или без нее. Однако было обнаружено, что у детей с более высоким уровнем метана колики проявляются в меньшей степени, что предполагает роль продукции метана в ее смягчении ( ,,,,,, ..2003 48(9) 1762-1766). Было показано, что гастроинтестинальные гормоны , такие как мотилин, вазоактивный интестинальный пептид, имеют патологически высокий уровень у младенцев с коликами.. показали повышение уровней с первых дней жизни у детей, у которых позже развивались колики, предполагая патологическую физиологиюпри детской колике ( ,,,..1990 79(4) 410-416). Основываясь на нарушениях развития нервной системы, было сделано предположение, что абдоминальное защемление и колика могут быть результатом гиперперистальтики. Эта теория подтверждается тем, что при приеме антихолинергических средств симптомы колики снижаются ( .2002 14588-92). 2 16641 1 2012.12.30 Тот факт, что у большинства младенцев колики проходят к четырехмесячному возрасту, подтверждает нейрогенную причину колик ( ..1998 102 (5) 1282-6). Пробиотик, по общепринятому определению, представляет собой живую бактериальную кормовую добавку, которая оказывает благоприятное влияние на животное-хозяина,улучшая бактериальный баланс кишечника. Несмотря на то, что пробиотики первоначально относятся к добавкам, к животным кормам для сельскохозяйственных животных, их определение также можно применять и для человека. Основное потребление пробиотиков людьми происходит в форме молочных продуктов питания, содержащих кишечные виды лактобактерий и бифидобактерий. В определении пробиотиков указано, что их потребление влияет на состав кишечной микрофлоры. Было сделано предположение, что такой эффект пробиотиков на кишечную экосистему благотворно воздействует на потребителя. Количество вероятных преимуществ, являющихся результатом изменений кишечной среды благодаря пробиотикам, было описано в статьях, и к ним относятся повышенная устойчивость к инфекционным заболеваниям, в частности к кишечным, сниженная продолжительность диареи, снижение кровяного давления, снижение концентрации холестерина в сыворотке, уменьшение аллергии, стимулирование фагоцитоза лейкоцитами периферической крови, модулирование экспрессии гена цитокина, адъювантный эффект, регрессия опухолей и снижение продукции канцерогенов или соканцерогенов.. были первыми, кто сообщил о том, что пробиотические молочнокислые бактерии проявляют свои иммуномодулирующие эффекты путем модуляции 1/2/3/1/-стимулирующей способности дендритных клеток (ДК). Они показали, что при одновременном культивировании мышиных ДК и разных видов ,включая, у них избирательно модулировалась продукция цитокинов-6, -10, -12 и - и активация поверхностных маркеров зависимым от концентрации образом. Все поверхностные маркеры МНС классаи 86, активированные лактобактериями, являются показателями созревания ДК. В частности, значительным в этих исследованиях было то, что . (штамм 12246) являлся слабым индуктором -12, но при одновременном культивировании с . или . он избирательно ингибировал продукцию провоспалительных сигнальных цитокинов -12, -6 и -, которые стимулировали два других вида. Продукция -10 оставалась неизменной при этих условиях. Эти обнаружения привели к выводам о том, что . может вносить вклад в экзогенную модуляцию размножения дендритных клеток кишечника, что способствует устойчивости к антигенам, не несущим сигнал опасности, при этом не влияя на способность отвечать на патогены, распознаваемые через такой сигнал опасности, как , что. может являться потенциальной мишеневой терапией, эффективной для ингибирования продукции -12 и - (и -6), и при этом индуцировать противовоспалительный -10, предоставляя, таким образом, альтернативный терапевтический подход для компенсации провоспалительной среды цитокинов кишечника, и, таким образом,существует возможность регулировки 1/2/3-стимулирующих способностей кишечника, исходя из состава кишечной микрофлоры, включая потребляемые пробиотики( ,,(2002)..168 171-178).. продолжили эти исследования и показали, что .е обладает способностью примировать ДК для стимуляции продукции регуляторных -клеток . Они использовали три разных вида , культивированных одновременнос ДК человека моноцитарного ряда дифференцировки. Использовали два вида молочнокислых бактерий, штамм . ( 53609) человека и ., но не использовали штамм., которые примировали ДК для стимуляции развития -клеток. Было показано, что эти -клетки продуцируют повышенные уровни -10 и способны ингибировать 3,,(2005)-103- .115 1260-1267). Одним из первых доказательств, подтверждающих действие перорально поступающих. на хозяина, по существу, являлось увеличенное соотношение 4 /8 клеток,наблюдавшееся в подвздошной кишке цыплят ( . ,2005 4(2/3) 15-28).. продолжили эти наблюдения, включив в них подвздошную кишку человека. Они получили прямыедоказательства у человека, показывающие (а) распределение индивидуальных специфичных для человека клеток .55730 по всему кишечнику человека и (б) выраженное участие .55730 в рекрутинге и/или пролиферации 4 -клеток, в частности, в подвздошных областях кишечника. Ими был сделан вывод о том, что введение . вызывает рекрутинг 4-хелперных клеток к эпителию человека. Этот рекрутинг может являться одним из факторов, объясняющих эффект пробиотиков этого штамма . у человека ( , ,,,(2004)55730,70 1176-1181).-подобные рецепторыраспознают бактериальные мотивы и активируют набор генов, что ведет к продукции цитокинов. Обычнорассматриваются как сенсоры микробных инфекций, и их ролью является индукция воспалительного ответа. Однако мотивы, которые распознаются при помощи , не являются уникальными для патогенов, но являются распространенными мотивами, общими для целых классов микроорганизмов, и не до конца понятно, каким образом иммунная система различает комменсальные и патогенные бактерии посредством . Полученные недавно данные указывают, что , помимо их роли в индукции воспалительного ответа, также играют роль в гомеостазе кишечника, распознавая комменсальную микрофлору (,, - ,,.-. . 200423 118(2)229-41). Штаммы различных видов , включая ., были использованы в композициях пробиотиков. . является одним из природных обитателей желудочнокишечного тракта животных, и обычно ее обнаруживают в кишечнике здоровых животных, включая людей. Известно, что она обладает антимикробной активностью. См.,например, патенты США 5439678, 5458875, 5534253, 5837238 и 5849289. Если клетки. выращивают в анаэробных условиях в присутствии глицерина, то они продуцируют антибактериальное вещество, известное как -гидрокси-пропиональдегид (3-). Существуют четкие и сложные взаимоотношения между кишечной иммунной системой и комменсальной флорой. Недавно было показано, что люминальная эндогенная флора может инициировать ключевой процесс бактериальной природы и адаптивный ответ хозяина путем активации -подобных рецепторови -рецепторов, расположенных на клетках кишечного эпителия ( ,.2004 38 123-36. - ,, - ,,.-.2004 118 229-241). На моделях человека цитокины могут инициировать гиперрефлекторную реакцию энтеральной мускулатуры посредством нервных и мышечных иммунных взаимодействий ( ..2004 39 750). В экспериментальных и клинических работах было показано, что специфические штаммы пробиотиков ингибируют пролиферацию -клеток и уменьшают секрецию как 4 16641 1 2012.12.30 цитокина 1, так и 2, в то же время предпочтительно вырабатывая супрессорные цитокины, такие как -10 и - ( ,,.-.2002 109 119-121). Кроме того, у людей-добровольцев.заселяет желудочно-кишечный тракт человека и способна проявлять иммуномодулирующую активность, включая ректутинг 4 -хелперных клеток в эпителии подвздошной кишки человека ( ,,,,.55730.2004 70 1176-81). Созревание ДК представляет собой процесс, который превращает незрелые ДК в зрелые антигенпрезентирующие клетки, которые мигрируют в лимфатические узлы. Этот процесс приводит к потере сильной способности поглощать антигены, характерной для незрелых ДК, и к активации экспрессии костимуляторных молекул и различных цитокинов ( ,.2001, 106255-8.,,,,,,.2000, 18 767-811). Известные протоколы созревания основаны на окружении, с которым, как считается,ДК сталкиваются после или во время представления антигенам. Лучшим примером этого подхода является использование среды, кондиционированной моноцитами (МСМ). МСМ получают, культивируя моноциты и затем используя культуральную супернатантную жидкость в качестве источника факторов созревания. Главными компонентами в МСМ, ответственными за созревание, являются провоспалительные цитокины интерлейкин-1(-1 ), -6 и - ( ,,,,.1997, 90 3640-6). Зрелые ДК продуцируют множество цитокинов, которые стимулируют и направляют -клеточный ответ. Двумя из этих цитокинов являются -10 и -12. Эти цитокины оказывают противоположное действие на направление индуцированного -клеточного ответа -12 индуцирует ответ 1 типа, в то время как -10 ингибирует этот ответ. Таким образом, состояние активации(антигенпрезентериующих клеток), включая ДК, определяет тип и величину 4-клеточного ответа. Остановкав фазе 0(включая эпителиальные клетки в тимусе) может способствовать развитию 4 25-клеток. Во время заражения патогенами распознавание бактериальных молекулприводит к активации . Тогдапродуцируют -6 и дополнительные растворимые факторы, которые вместе перекрывают супрессивный эффект -клеток, разрешая эффективное образование Тэ (Т-эффекторных клеток) клеток против патогена. Динамическое равновесие междув фазе покоя и активированнымитакже будет подвергаться действию как , так и -клеток (фиг. 1).. (2000) описывают образование -10 у детей с аллергией после перорального приема. Но в отличие от представленного в настоящем документе изобретения в исследовании не описаны специфические штаммы со способностью продуцировать большие количества -10, отобранные по их эффективности против нарушения моторики и колики ( ,,,. -10. .. 200030(12)1804-8). Исследование. (2005) показывает, что примирование ДК моноцитарного ряда дифференцировки . и, но не, управляет развитием -клеток. Эти -клетки продуцировали повышенные уровни -10. В отличие от настоящего изобретения авторы не связывают увеличение -10 с моторикой кишечника или коликой. Даже если дело касается штаммов, авторы упоминают два разных вида бактерий, которые эффективно повышают уровни -10. Это отличается от 5 16641 1 2012.12.30 настоящего изобретения, в котором указано, что пробиотик, который будет наиболее эффективно уменьшать колику, следует определить и отобрать на уровне штамма, так как разные штаммы одного и того же вида обладают разной способностью эффективно увеличивать уровни -10. В настоящий момент не существует лечения от колик. Принятая схема лечения колик состоит из фармакологического и/или нефармакологического методов, обеспечивающих в лучшем случае незначительное снижение симптомов. Типичное терапевтическое воздействие на колику, предлагаемое пациентам, находится в пределах четырех категорий,включая диетическую, физическую, поведенческую и фармакологическую. Диетические процедуры включают профессиональный совет по поводу различных техник кормления или использования гипоаллергенного молока, молочных смесей без сои или лактозы и раннее введение твердой пищи (, .,.- .1982 707-10 В.- - .1989 115,521-6 ,, .-.1991 119695701). Однако ни использование соевых молочных смесей, ни изменения в технике кормления не эффективны для каждого из случаев колики. Обзор информации, изучающей эти рекомендации, показал, что использование гипоаллергенных молочных смесей, таких как частично гидратированные или основанные на аминокислотах, может быть успешным только у около 25 младенцев (,,.-- .2000 1061349-54 ,,.-.2000 89 22-7). Физическая стратегия для управления коликой включает физическое изменение позиций тела для облегчения газообразования/рефлюкса, ношение на руках, пеленание, применение надавливания на живот или массаж ребенка. Другие методы включают создание чувства отвлеченности, чтобы минимизировать осознание колики младенцем, такие как катание младенца на машине, использование стимулятора поездки, вибратора для детской кроватки или детские качели (.,.1965 35 521-67,..1981 4 207-18). Другим способом является проигрывание звуковой записи, которая успокаивает младенца. Однако в медицинской литературе существуют доказательства, что эти методы не работают (,,..1993 92(2) 197-201). Эти стратегии в лучшем случае лишь незначительно эффективны относительно снижения симптомов колики. Рекомендации для поведенческого воздействия для лечения колики являются наиболее противоречивыми из доступных способов терапии. Некоторые авторы пропагандируют увеличение сенсорной стимуляции, в то время как другие пропагандируют уменьшение такой стимуляции (..1997 55235-242,,,,,.1998 316(5) 1563-9 и,-- .1984 31 993-1005). Другие рекомендации включают ранний ответ на плач или позволение младенцу плакать, предложение пустышки, внедрение определенного графика кормления, использование визуального контакта и развлекательных игр. Фармакологический подход к лечению колик привел к использованию рецептурных и нерецептурных препаратов. Применяемые в настоящее время рецептурные препараты включают алкалоиды белладонны и опиаты (камфорная настойка опия), которые могут 6 16641 1 2012.12.30 обеспечить облегчение, но чреваты рисками, включая дополнительные пирамидальные симптомы, угнетение дыхания и констипацию. Например, антихолинергические лекарственные средства, сходные по своему действию с действием атропина, такие как Хиосциамин (Левизин или Гастросед) и Дицикломин, расширяют зрачки, увеличивают сердцебиение, уменьшают слюноотделение, ослабляют спазмы желудочнокишечного и мочевого трактов, а также бронхов. Кроме того, антихолинергические лекарственные средства являются единственными рецептурными препаратами на рынке США,которые, как было много раз показано, эффективно лечат детскую колику, но, к сожалению, у 5 детей, подвергавшихся лечению, могут развиться побочные эффекты, включая затруднение дыхания, апноэ, эпилептический припадок, обморок, асфиксию, кому и мышечную гипотонию ( , - ..1984 288901, - ,..1997 15 532-5). К тому же сообщалось о нескольких случаях смерти у детей, принимавших дицикломин (,,..1984 22(5) 455-462). Нерецептурные препараты, которые описывались как эффективные для лечения детской колики, включают несколько седативных или снотворных лекарственных средств,включая надфизиологическую дозу (высокую дозу) дифенгидрамина (Бенадрил), фенобарбитала, гидрата хлорана и даже спирта. Однако существует вероятность серьезных побочных эффектов, связанных с несколькими из этих агентов, у детей с респираторным заболеванием, ограничивая, таким образом, их широкое применение при лечении колики(..1997 55 235-242..1994 23(3) 337-34632). Более безопасные нерецептурные препараты для лечения колики включали, главным образом, введение симетикона или диметилполисилоксана, нерассасывающегося, отпускаемого без рецепта, лекарственного средства, которое уменьшает размер кишечных пузырьков газа. Симетикон имеет очень безопасный профиль и часто рекомендуется,несмотря на несколько исследований, показывающих, что эффективность семитикона в отношении детской колики не больше, чем у плацебо (,,.,199494(1) 29-34. ,,.,199643(2) 189-510. ,.,198574(3) 446-50. ,,.,198910(6) 122-4). В результате наиболее распространенным лечением колик на сегодняшний день является просто ожидание, когда младенец перерастет это состояние. Следовательно, в настоящее время существует потребность в безопасных и эффективных соединениях и композициях, а также способах, которые могут быть эффективны для лечения колики у младенцев и маленьких детей. Композиции и способы по настоящему изобретению отвечают этим нуждам, предлагая продукт, который может безопасно и эффективно устранять симптомы, связанные с коликой у младенцев. В патентной публикации 136448310 описаны пробиотики для лечения кишечно-нервномышечных аномалий, таких как колики у младенцев. В качестве пробиотиков заявители упоминают несколько разных видов бактерий. Напротив, в настоящем изобретении пробиотик для наиболее эффективного уменьшения колики является специфическим штаммом молочнокислой бактерии, отобранным для эффективного увеличения уровней -10, и не относится ко всему классу бактерий, так как авторы настоящего изобретения показали, что существуют существенные отличия в стимуляции продукции -10 между штаммами одного и того же вида. В 2005 г.показал, что добавление .55730 существенно улучшает симптомы колики у младенцев, вскармливаемых грудью, по сравнению со стандартной терапией при помощи симетикона в течение 7 дней лечения. Процент ответа на лечение 7. составил 95 , в то время как лишь 7 младенцев отвечали на симетикон. Эти результаты были представлены на Европейском Обществе Изучения Педиатрии (( с 31 августа 2005 г. по 3 сентября 2005 г., Сиена,Италия ( . 2005 58(2)411). Несмотря на то, что результатыпоказали положительный эффект, он не определял связь между отдельными штаммами, способствующими продукции -10, и снижением моторики кишечника и, следовательно, коликой. Прилагаемое изобретение относится к способу селекции таких лучших штаммов.описал, что нарушения моторной функции обеспечивают разнообразные симптомы, которые могут возникать в контексте воспаления или активации иммунитета в различных областях кишечника и включать такие обычные расстройства, как эзофагит,гастрит и спонтанное воспалительное заболевание кишечника . Эти наблюдения предполагают, что моторика кишечника также подвержена влиянию иммунной системы. В этом контексте моторная система может играть важную роль в защите кишечника от токсичных стимулов, присутствующих в просвете ( .,.1996 111 1683-1699). Эта точка зрения отражена, например, в наблюдении., которые показали, что чрезмерный рост бактерий в тонком кишечнике сопровождается нарушением нормальной циклической пищеварительной моторики в тонком кишечнике ( ,,,..1977 9 1158-1168). Хорошо известно на протяжении многих лет, что повышенные уровни -10 супрессируют избыточно активированные системы иммунитета. Ранее было также показано, что моторика кишечника контролируется неврологическими сигналами, которые связаны с иммунной системой кишечника, и что колика является следствием повышенной моторики кишечника, например вследствие чрезмерного роста бактерий. В промышленно развитых странах гигиенические меры начинаются с момента рождения, что нарушает способности новорожденного усваивать микрофлору матери. Вследствие этого младенец получает другую микрофлору. Вместо содержания, например,иноворожденные получаюти другие кожные бактерии. Авторы изобретения сделали неожиданное открытие, что чрезмерный рост кожных бактерий избыточно активирует иммунную систему младенца, что приводит к избыточноактивированной моторике кишечника и, как следствие, к колике, большее число специфических кишечных бактерий, таких как .17938, со способностью стимулировать продукцию -10 приводит к созреванию -системы, т.е. пролиферации 4 25-клеток. Активация 4 25 клеток приводит к спокойной моторике кишечника и,следовательно, к благоприятным эффектам на младенцев с коликой. Благодаря этим открытиям были отобраны непатогенные бактериальные штаммы по свойствам, усиливающим -10, и неожиданно было обнаружено, что эти свойства штаммов коррелируют со снижением колики у детей. Следовательно, изобретение относится к применению .17938 для получения препаратов для профилактики и/или лечения колики и других штаммов, отобранных тем же путем. Другим объектом изобретения являются продукты, содержащие указанные штаммы,для введения животным, включая человека. Другие цели и преимущества будут очевидны из следующего описания и прилагаемой формулы изобретения. Сущность изобретения. Настоящее изобретение относится к определенным штаммам молочнокислых бактерий, отобранных по способности способствовать продукции -10 и, следовательно, пролиферации 4 25 -клеток, для профилактики и/или лечения колик, к способу селекции таких штаммов и к продуктам, содержащим такие штаммы. 8 16641 1 2012.12.30 Другие объекты и признаки изобретения будут очевидны из следующего описания и прилагаемой формулы изобретения. Краткое описание изобретения. Фиг. 1 - предполагаемая роль определенных отобранных штаммов молочнокислых бактерий в стимуляции развития 4 25 -клеток. Фиг. 2 а - продукция -10 ДК клетками в виде столбчатой диаграммы. Фиг. 2 б - продукция -10 ДК клетками в таблице. Подробное описание изобретения и предпочтительных вариантов его осуществления. Колонизация кожных бактерий в кишечнике и дефицит -клеток избыточно активируют иммунную систему новорожденного младенца, что приводит к избыточной активации моторики кишечника и, следовательно, к колике. Большое количество клеток специфических кишечных бактерий, таких как .17938, обладающих способностью стимулировать продукцию -10, приводит к созреванию -системы, т.е. к пролиферации 4 25 -клеток. Другие штаммы молочнокислых бактерий, как сообщалось многими исследователями ранее, индуцируют продукцию -10, например. (см. выше). Активация 4 25 -клеток приводит к умеренной моторике кишечника и, следовательно, к благоприятным воздействиям на колику. Неожиданно было обнаружено, что штаммы, которые приводят к повышению уровней цитокина -10,одновременно являются штаммами, которые способны уменьшать среднее время плача(пример 2). Настоящее изобретение относится к штаммам молочнокислых бактерий, которые были отобраны по способности снижать колику, включая .17938. Продукты,такие как продукты питания, пищевые добавки и молочные смеси, лекарственные препараты или медицинское оборудование, содержащие цельные клетки или компоненты, выделенные из этих штаммов, могут быть получены в соответствии с известной в данной области рецептурой и включают, как известно, в основном, перевариваемую основу плюс штаммили выделенный из него компонент. Исследованиямогут использоваться в качестве способа селекции штаммов молочнокислых бактерий по способности стимулировать продукцию -10 в ДК моноцитарного ряда дифференцировки и посредством этого индуцировать развитие 4 25-клеток (пример 1). Данные описывают показатель сильной стимуляции -10 при помощи специфических штаммов .55730 и .17938 и то, что эта регуляция опосредована веществом, выделяемым в ростовую среду двумя этими специфическими штаммами во время поздней логарифмической/стационарной фазы роста. Два штамма ., напротив, не были способны стимулировать соответствующую продукцию -10. Для подтверждения клинической значимости отобранных штаммов для профилактики или лечения колик проводятся дополнительные исследования у младенцев, вскармливаемых грудью, с диагнозом детской колики. Признаки настоящего изобретения будут понятны из следующих примеров, которые не следует истолковывать как ограничивающие изобретение. Пример 1 Изучение способности штаммов пробиотиков стимулировать экспрессию -10 ДК моноцитарного ряда дифференцировки. Незрелые ДК образуются из моноцитов периферической крови (, , . , .,. 1997.-12--1, , . . , . 1999.--12-12. . . 1623231). Штаммами, которые будут протестированы в эксперименте, являются 55730,17938,4660 и 4964, доступные в(, шт. Вирджиния,США) и(Брауншвейг, Германия). Штаммы культивируют на агаре(,Базингсток, Соединенное королевство), содержащем 6,25 овечьей крови. Молочнокислые бактерии инкубируют при 37 С в атмосфере 52. Через 3 дня количество бактерий определяется измерением оптической плотности при 620 нм (620). Обычно 620, равная 0,35, соответствовала 1108 колониеобразующих единиц (КОЕ) для всех тестовых штаммов. На 6 день созревание незрелых ДК индуцируют при помощи(. , Сент Льюис, Марокко) и тестируютна присутствие сочетания цитокинов -1 (25 нг/мл) и - (50 нг/мл), используемых вместе в качестве факторов созревания (цитокины, приобретенные у , Роки Хилл, Нью-Джерси). Продукция цитокинов -12, -10 и -6 зрелыми ДК определяется посредством 24 часовой стимуляции при помощи 40 лигандэкспрессирующих клеток плазмоцитомы мыши (558), как описано. ( ,,,,.1-.2000 164 4507-12). После 24 ч супернатанты собирают и измеряют концентрации -10 при помощи . Результаты см. на фиг. 2. Как видно из результатов, существует существенное различие во влиянии различных штаммови их способности стимулировать продукцию -10 у ДК. Пример 2 Отобранные штаммы пробиотиков в сравнении с Симетиконом в лечении детской колики младенцев, вскармливаемых грудью, с диагнозом детской колики набирали в Отделении детской и подростковой науки (Больница университета Дроттинг Сильвия, Гетеборг). Пациенты в возрасте 21-90 дней, соответствующие внутриутробному возрасту с массой при рождении между 2500 и 4000 г, с симптомами колики, удовлетворяющими критериям Вессела и возникшими почти 61 дней до регистрации, рассматриваются для включения в исследование ( ,,,,.,.1954 14 421-35). Все зарегистрированные младенцы находятся исключительно на грудном вскармливании, чтобы уменьшить вариабельность кишечной микрофлоры из-за вариаций в диете, которые могли бы, в свою очередь, вызвать ответ на пробиотики. Младенцы исключались, если у них существовали клинические доказательства хронической болезни или гастроинтестинальных нарушений или если они получали антибиотики или пробиотики на неделе, предшествовавшей набору. В этом исследовании младенцев с коликами случайно отбирали для получения пробиотиков или Симетикона в последующем лечении. вводят в дозе 108 колониеобразующих единиц (КОЕ) в 5 каплях серийно выпускаемого -масла (среднецепочечно триглицеридное масло) через 30 мин после еды,один раз в день, в течение 28 дней. -масло получают естественным путем, и наиболее распространенным источником является кокосовое масло. Большую часть -масла пе 10 16641 1 2012.12.30 рерабатывают из кокосового масла. -масло представляет собой прозрачную светлоокрашенную жидкость с приятным запахом и низкой вязкостью. Эта масляная суспензия стабильна в течение 21 месяца при 2-8 С (как описано производителем,,Стокгольм, Швеция) (альтернативным источником -масла является, , Карлшамн, Швеция). Во время исследования родителей информировали,чтобы они держали продукт в холодильнике, когда он не используется. Симетикондавали в дозе 60 мг в день в 3 мл серийно выпускаемого раствора (, , 7050 Кемп Хилл Роад, Форт Вашингтон, Пенсильвания, 19034-2210, США) после еды, дважды в день, в течение 28 дней. Сказано, что при регистрации всех матерей просили соблюдать диету, исключающую коровье молоко отменить молоко, йогурт, мягкий и твердый сыр, сметану, масло, пирожные. Строгое соблюдение диеты отслеживается с помощью дневника диеты, ведущегося на протяжении всего периода лечения. На 7, 14,21 и 28 день один из исследователей проверяет соответствие диете. Этический комитет в Институте одобрил протокол исследования, и младенцы регистрируются в исследовании только после получения письменного информированного согласия от родителей. Контрольные посещения День, в который педиатр смотрел ребенка первый раз, определен как 1 день. В данном случае каждый ребенок проходил медицинское обследование, а родителей опрашивали с целью получения основополагающей информации, касающейся типа родоразрешения, веса при рождении и внутриутробного возраста, семейного анамнеза желудочно-кишечного заболевания и атопии. В частности, последнее считалось положительным, если у младенцев был один или более членов семьи (мать, отец и/или старший сиблинг) с атонической экземой, аллергическим ринитом или астмой. Более того, регистрировались любые признаки и симптомы атонического заболевания в период исследования. Родителей также приглашали, чтобы зарегистрировать информацию, касающуюся среднего времени плача в день и количества приступов колики в день после набора (0-й день). Врач случайным образом приписывал младенца к любой из исследуемых групп. Введение исследуемых продуктов началось в 1-й день. Родителям выдавали письменную информацию об исследовании и просили регистрировать количество приступов безутешного плача в день и их продолжительность, консистенцию стула и частоту, а также любые наблюдаемые побочные эффекты (констипация,рвота, кожные реакции и т.д.), начиная с 0 дня до 28-го дня, используя структурированный дневник. Чтобы убедиться, что все родители отмечали время плача одинаковым способом, и убедиться, что препараты правильно даются младенцам, один из исследователей всегда доступен по телефону, чтобы помочь родителям. Каждого пациента осматривает один и тот же педиатр на 1, 7, 14,21 и 28 день. Результаты Из 120 зарегистрированных младенцев, вскармливаемых грудью, 30 случайным образом приписаны к лечению 55730 (1), 30 случайным образом приписаны к лечению 17938 (2), 30 случайным образом приписаны к лечению 4660 (3) и 30 - к лечению Симетиконом. Ни одного младенца не выбыло из-за побочного эффекта, связанного с опытом. Группы сходны по возрасту, весу при рождении, полу, типу родоразрешения, семейному анамнезу атопии или желудочно-кишечных заболеваний и воздействию курения. Среднее время плача в день сходно в лечебных группах в 0-й день и в 1-й день. Было показано существенное уменьшение ежедневного времени плача у младенцев, получающих 55730 (1) и 17938 (2), к 7-му дню по сравнению с младенцами, которых лечили 4660 (3) и Симетиконом . На 14, 21 и 28-й день время плача существенно отличается между четырьмя лечебными группами. Отличие между (1) ипо среднему времени плача в день от начала до конца исследования со 11 16641 1 2012.12.30 ставляет 82 минуты, а отличие между (2) ипо среднему времени плача в день от начала до конца исследования составляет 83 минуты по состоянию на 28-й день (таблица). Как видно из результатов, четыре лечебные группы более или менее равны до введения тестовых продуктов. Уже после 7 дней существует ясное отличие в пользуштаммов 55730 и 17938 по сравнению с двумя другими альтернативами. По прошествии 28 дней отличие увеличилось. Время плача (значение в минутах в день) в группах . и Симетикона Младенцы.Симетикон с коликами 5573017938466030120303030 0 день 206 203 204 205 1 день 191 190 198 194 7 день 147 148 171 172 14 день 98 100 156 155 21 день 75 77 150 148 28 день 58 59 145 141 Несмотря на то, что изобретение было описано на основании специфических воплощений, будет высоко оценено то, что возможны бесчисленные вариации, модификации и воплощения, и, следовательно, все подобные вариации, модификации и воплощения следует рассматривать как входящие в сущность и в рамки изобретения. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 13

МПК / Метки

МПК: A61P 1/06, C12R 1/225, C12N 1/20, A61K 35/74

Метки: бактерий, пробиотический, продукт, молочнокислых, содержащий, штамм

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/13-16641-shtamm-molochnokislyh-bakterijj-i-soderzhashhijj-ego-probioticheskijj-produkt.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Штамм молочнокислых бактерий и содержащий его пробиотический продукт</a>

Похожие патенты