Бактерицидная фармацевтическая композиция, способ лечения

Номер патента: 4174

Опубликовано: 30.12.2001

Авторы: БЛЭКБУРН, Питер, ГОЛЬДБЕРГ Эдвард Б., ПРОДЖАН Стивен Дж.

Есть еще 4 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

61 47/00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ(57) 1. Бактерицидная фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество лантионинсодержащего бактериоцина и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что дополнительно содержит кислотный носитель в количестве 0,1 - 3,0 с Н 2,0-5,0. 2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит хелатирующий агент. 3. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве хелатирующего агента она содержит цитрат. 4. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве хелатирующего агента она содержит ЭДТК. 5. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве хелатирующего агента она содержит цитрат и ЭДТК. 6. Композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что бактериоцин выбран из группы, состоящей из низина, субтилина, эпидермина, пеп 5, анковенина, галлидермина, дуромицина или циннамицина. 7. Композиция по п. 6, отличающаяся тем, что в качестве бактериоцина она содержит низин. 8. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве бактериоцина она содержит низин, а в качестве хелатирующего агента - цитрат или ЭДТК. 9. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что кислотный носитель выбран из группы, состоящей из ацетата, пропионата, цитрата, лактата, сукцината, фумарата, малоната, адипата, сорбата, фосфата или аскорбата. 10. Способ лечения или профилактики желудочно-кишечных заболеваний, вызванных патогенными микроорганизмами, отличающийся тем, что используют фармацевтическую композицию по любому из пп. 1-9,в терапевтически эффективном количестве. 11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что заболевание вызвано грамотрицательными бактериями. 12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что микроорганизмы представляют собой разновидность , , , , , ,или . 13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что микроорганизмы представляют собойили. 14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что используют фармацевтическую композицию по п. 7.(56)89/12399 1. Изобретение относится к области медицины, в частности к бактерицидным фармацевтическим композициям и способам лечения ими желудочно-кишечных заболеваний. Различные желудочно-кишечные заболевания или симптомы, включая диарею, гастрит, пептическую и дуоденальную язву и гастральную карциному, являются результатом присутствия в желудочно-кишечном тракте патогенных микроорганизмов. Эшерихия и сальмонелла, в частности, а также определенные виды клостридии, бациллы, бактероида и ерсинии могут являться причиной диареи особенно у новорожденных сельскохозяйственных животных ( Голландия, 1990. Клиническая микробиология. Обзор 3345, Случаи инфекционной диареи среди сельскохозяйственного молодняка). Можно говорить о причастности гелико 4174 1 бактер пилори ( ) к гастриту, дуоденальной и пептической язвенной болезни (Петерсон,В.Л., 1991, Новая Англия, журнал Медицина 3241043, Геликобактер пилори и пептическая язвенная болезнь), а также об их связи с гастральной карциномой (Хендерсон, Б.Е., Росс, Р. К. и Пайк, М.К., 1991, Наука 2541131, О первичной профилактике рака Номура, А., Штемерманн, Г.А., Кайеу, П.Х., Като, И., Перец-Перец, Г. и Блейзер, М.Дж. (1991) Новая Англия, журнал Медицина, 3251132 Инфекция геликобактер пилори и гастральная карцинома среди японских американцев на Гаваях Парсоннет, Дж Фридман, Г.Д., Вандерштин, Д.П., Чан, Й., Фогелман, Дж.Х., Орентрайх, Н. и Сибли, Р.К. (1991) Новая Англия, журнал Медицина 3251127 Форман, Д., Сайтас, Ф., Ньэлл, Д.Г., Стейси, А.Р., Борэм, Дж.Пето, Р.,Кэмпбелл, Т.К., Ли, Дж. и Чень, Дж. (1990) Международный журнал Рак 46608 Географическая связь распространенности антител геликобактер пилори и смертности в результате заболевания гастральным раком в сельской местности Китая). Многие желудочно-кишечные патогенные организмы являются грамотрицательными бактериями, по отношению к которым низин обычно считался инертным (Херст, А., 1981, Низин, Достижения в области прикладной микробиологии, том 27, стр. 85-121). Например,(который на предшествующем уровне техники также идентифицировался как) представляет собой грамотрицательную микроаэрофильную бациллу, которая колонизирует гастральную мукозу. Со времени первой публикации в связи с гистологическим гастритом (1983 г.) отмечалась зависимость между подавлением инфекции. и улучшением в сфере гастральных нарушений, однако несмотря на то, что испытывались многочисленные антибиотики против инфекциини один из них не получил подтверждения приемлемого и ни один агент или режим не был одобрен для применения против этой бактерии. В редких случаях добивались искоренения этого организма при долгосрочном применении антибиотиков, которые сами по себе могли продуцировать неприемлемые побочные эффекты (Петерсон, , 1991, Новая Англия, журнал Медицина 3241043 и пептическая язвенная болезнь, Уоррен, Дж.Р., 1983, Ланцет 11273, Неопознанные изогнутые бациллы на гастральном эпителии при активном хроническом гастрите Морган и др., 1988, Гастроэнтерология 951178, Нитрофураны при лечении гастрита в связи сГлупцинский, У. и др. 1988, американский журнал Гастроэнтерология 83365 Гастрит в связи сиспытание амоксициллином, контролируемое двублиндированным плацебо Ровз, Е.А. и др., 1988, Гастроэнтерология 9433 Хронический антральный активный гастрит в связи сГлупцинский, У. 1990,, гастрит и пептическая язва Малфертейнер, П., Дичунейт, Х., Изд. Шпрингер-Ферлаг, Берлин, Германия, стр. 49-58 Ровз, Е.А. и Титгат, Г.Н., 1990, Ланцет 3351233 Лечение дуоденальной язвы в связи с искоренением . ОРиордан, Т. и др., 1990, Пищеварительный канал 31999, Стимуляторная антибиотическая терапия в сфере дуоденальных язв, леченных субцитратом коллоидного висмута Вейл, Дж. и др., 1990, Алиментарная фармакологическая терапия 4651,Инфекция ., обработанная трехкалийным дицитратовисмутатом и соединением метронидазола Кофлан, Дж., Г., Гиллиган, Д., Хамфрис, . и др., 1987, Ланцет 21109 и рецидив дуоденальной язвы - 12-месячное доскональное обследование Маршалл, Б.Дж., Гудвин, К.С., Уоррен, Дж.,Р. и др., 1988, Ланцет 21437, Возможное двублиндированное испытание рецидива дуоденальной язвы после искоренения). Антимикробное действие лантионинсодержащего бактериоцинового низина ограничено по отношению к определенным грамположительным микроорганизмам и является оптимальным при рН 5,0. Антимикробное действие низина усиливается при применении его в комбинации с таким хелатором, как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК). Было обнаружено, что действие низин-хелаторных композиций значительно сильнее или оптимально при рН большем, чем 5,0. Например, было определено, что антимикробное действие композиции, включающей низин и ЭДТК, в отношении золотистого стафилококка ( ) значительно сильнее при рН 8,0, чем действие той же композиции на золотистый стафилококк при рН 5,0. Было также обнаружено, что комбинация хелатора с низином является активнодействующей по отношению к грамотрицательным бактериям, что обычно не свойственно самому низину. Объектом изобретения является бактерицидная фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество лантионинсодержащего бактериоцина и фармацевтически приемлемый носитель, который дополнительно содержит кислотный носитель в количестве 0,1-3,0 с рН 2,0-5,0. В предпочтительном варианте она дополнительно еще содержит хелатирующий агент. В качестве хелатирующего агента она может содержать цитрат, ЭДТК либо цитрат и ЭДТК. Предпочтительно бактериоцин выбирают из группы, состоящей из низина, субтилина, эпидермина, пеп 5,анковенина, галлидермина, дуромицина или циннамицина, предпочтительно в качестве бактериоцина композиция содержит низин. В наиболее предпочтительном варианте композиция в качестве бактериоцина содержит низин, а в качестве хелатирующего агента - цитрат или ЭДТК. Предпочтительно кислотный носитель выбирают из группы, состоящей из ацетата, пропионата, цитрата,лактата, сукцината, фумарата, малоната, адипата, сорбата, фосфата или аскорбата. 4174 1 Другим объектом изобретения является способ лечения или профилактики желудочно-кишечных заболеваний, вызванных патогенными микроорганизмами, в котором используют фармацевтическую композицию по изобретению в терапевтически эффективном количестве. Фармацевтическую композицию по изобретению предпочтительно используют для лечения или профилактики заболеваний, вызванных грамотрицательными бактериями, патогенными микроорганизмами, представляющими собой разновидность , , , , , , или , предпочтительноили. Лантионинсодержащие бактериоциновые композиции по изобретению активны при кислотном рН ниже 5,0 и проявляют значительную активность в отношении грамотрицательных бактерий. Эти активные при низком рН композиции могут применяться, например, в методике лечения или профилактики инфекций или роста микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте человека и животных. Эти композиции, будучи введенными в желудочно-кишечный тракт, поведут себя как бактерициды даже в среде желудка с низким рН. Это антибактериальное действие может быть использовано в сдерживании роста инфекций, вызванных такими болезнетворными организмами, как геликобактер , эшерихия , сальмонелла, бацилла , клостридия , бактероид , кампилобактери ерсиния . Такие бактериоциновые композиции, активные при низком рН, могут поэтому применяться при лечении различных заболеваний или симптомов, вызванных присутствием этих патогенных бактерий. Фармацевтические низиновые композиции, согласно данному изобретению, являются быстросрабатывающими, так что после введения их в желудок и желудочно-кишечный тракт их активность не должна лимитироваться скоростью очищения содержания желудка. Более того, в отличие от антибиотиков, глотание низиновых композиций безопасно. Фармацевтические композиции в лечебном режиме могут применяться самостоятельно или в комбинации с другими фармацевтическими агентами или препаратами. Эффективность настоящего изобретения была продемонстрирована на примере кишечных бактерий., которые обнаруживаются в пищеварительном канале млекопитающих и нередко являются нарушителями правильной работы желудочно-кишечного тракта. Выживаемость . остается неизменной после воздействия на них ЭДТК или цитрата, а также после воздействия на них низина. Кроме того, суспензии. под воздействием кислоты прекрасно выживают в кислотной среде, если рН не падает ниже 2,5. Однако, как это изложено ниже, когда низин соединяется с ЭДТК в диапазоне значений кислотного рН, наблюдается значительное ослабление жизнеспособности бактерий после только одной минуты воздействия этих низиновых композиций. При рН 3,5 за счет низина можно отнести сокращение количества жизнеспособных бактерий на более чем 6 логарифмов после подвергания их воздействию низин-хелаторных композиций в течение только одной минуты. При рН ниже 3,5 очевидно некоторое ослабление потенции низиновых композиций, но тем не менее остается приблизительное тысячекратное увеличение активности низина даже при рН 2,5 (табл. 1). Низин, активированный ЭДТК, является бактерицидным по отношению к . в присутствии разнообразных кислотных носителей, включая ацетат, цитрат, лактат и сукцинат, как показано в табл. 2-5. Как это проиллюстрировано результатами, полученными при рН 3,5, быстрая бактерицидная активность низиновых композиций может зависеть от выбора кислотного носителя. Во всех указанных случаях по мере увеличения концентрации каждого кислотного аниона наблюдается уменьшение бактерицидной активности низиновых соединений. Тем не менее каждый из этих кислотных носителей подходит для выражения активности низина с холаторным усилением. Воздействие этих низиновых соединений на бактерии в течение периода времени большего, чем одна минута, эффективно в отношении сокращения количества бактерий, даже если рецептурные состава содержат менее эффективные концентрации кислотных носителей. Незамедлительная эффективность различных низиновых композиций с хелаторным усилением была оценена в кислотных носителях методой анализа бактерицидной суспензий. Клетки . от ночного триптиказового соевого питательного агараресуспендировались до плотности, измеряемой как абсорбция 1,0 при 600 в стерильном 2. При анализе каждого пробного бактерицидного состава реакция клеток начиналась с добавлением к 970 пробного состава 30 клеток. Реакционная смесь инкубировалась при 37 С в течение, по крайней мере, одной минуты, а затем центрифугировалась в микрофуге в течение 1 мин. Клеточный осадок смывался ресуспензией в 1 нейтрализационного буфера. (Нейтрализационный буфер 50-7,0 54 202 0,1 и 0,1 желатина. Вначале был приготовлен -буфер и отрегулирован . Затем добавлялись соли и желатин и раствор помешивали при нагревании до состояния полной прозрачности. Далее раствор автоклавировался в течение 20 мин. Нейтрализованный буфер не разбавлялся.) Клетки центрифугировались в микрофуге в течение одной минуты, а затем ресуспендировались в 1 нейтрализационного буфера. Количество жизнеспособных микроорганизмов определялось путем распластывания 100 бактериальной суспензии и ряда ее разведений в нейтрализационном буфере на питательный агар и подсчитывания выживающих колоний после 24 ч при 37 С. Процентное выживание относительно необработанных стандартов исчислялось от подсчитанных величин. 3 4174 1 Активность низина, усиленного ЭДТК, проявляется при низком . Приниже 3,5 степень усиления снижается, предположительно, по мере титрования карбоксильных групп хелатора. Тем не менее наблюдалось тысячекратное усиление действия низина посредством ЭДТК даже при 2,5. См. результаты, представленные в табл. 1. В табл. 1 и последующих табл. 2, 4 и 8-13 величины с предшествующим знакомпредставляют выживаемость в процентном исчислении, основанную на исходной концентрации жизнеспособных бактерий (выраженных как колониеобразующие единицы /) в анализируемой бактериальной суспензии и в аликвотном объеме данной суспензии, взятом для анализа, соответствующем определению невыживаемости колоний. Таблица 1 Зависимость активации (посредством ЭДТК) низина в отношенииот кислотного рН ЭДТК, М- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 4 х 107 колониеобразующих единиц/. Таблица 2 Зависимость хелаторной активации низин-ацетата в отношенииот концентрации ацетата ЭДТК, ММ- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 2 х 107 колониеобразующих единиц/. Таблица 3 Зависимость хелаторной активации низин-цитрата в отношенииот концентрации цитрата ЭДТК,ММ- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 5 х 107 колониеобразующих единиц/. 4174 1 Таблица 4 Зависимость хелаторной активации низин-лактата в отношенииот концентрации лактата ЭДТК,М- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 5 х 107 колониеобразующих единиц/. Таблица 5 Зависимость хелаторной активации низин-сукцината в отношенииот концентрации сукцината- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 3,4 х 106 колониеобразующих единиц/. При рН 3,5 активность низина, усиленная посредством ЭДТК, наблюдалась в присутствии всех испытываемых кислотных анионов (табл. 2-5). При рН 3,5 лактат при концентрации 0,3 являлся до некоторой степени ингибитором активности низина, усиленного посредством ЭДТК. Тем не менее эта активность все же остается усиленной более чем в 1000 раз, имея в виду только 0,3 -ный лактат, а 0,1 -ный лактат уже не подавляет активность низина, усиленного посредством ЭДТК. При рН 3,5 концентрация ацетата до 0,3 и цитрата до 0,3 проявляют свою совместимость с бактерицидной активностью низина с хелаторным усилением в отношении суспензий Эти анионы проявляются как наиболее многообещающие в качестве кислотных носителей в составе низина, усиленного посредством ЭДТК. Цитрат - один из наиболее подходящих кислотных носителей для соединений низина, усиленного посредством ЭДТК. Цитрат является естественной кормовой субстанцией и промежуточным метаболитом, а также в своем праве - эффективным усилителем бактерицидной активности низина (табл. 3). Можно надеяться, что соединения низин-цитрата будут безвредными и эффективными для сдерживания или устранения роста нежелаемых микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте человека и животных. Цитрат является метаболитом, он не подавляет рост бактерий, и бактерии растут прекрасно на питательном агаре с добавлением цитрата. Однако низин в присутствии цитрата проявляет активность в отношении грамотрицательных бактерий. Таким образом, является возможным продемонстрировать активность низина в отношении грамотрицательных бактерий путем произведения анализов на торможение роста на питательном агаре с добавлением различных концентраций цитрата. Этот анализ агара-низин-цитрата имеет гораздо более широкое применение. Анализ предусматривает метод отбора потенциальных агентов, иных чем цитрат, в соединении с низином ради их потенциальных свойств, позволяющих им быть усилителями присущей низину бактерицидной активности. Примеры других органических кислот в комбинации с низином - ацетат, пропинат, лактат, сукцинат, фумарат, малонат, адипат, сорбат, фосфат и аскорбат. Другие агенты, потенционирующие активность низина, включают в себя неионогенные и амфотерные поверхностно-активные вещества и эмульгаторы, четвертичные соединения, моноглицериды и жирные кислоты. Низин-цитрат-агаровый анализ производится следующим образом. . ресуспендируется до оптической плотности 1,0 при А 600. Берется 100 пробы бактериальной суспензии и равномерно распластывается на триптиказовый соевый питательный агар с различными концентрациями цитрата (например, 0,1 , 0,3 ,4174 1 1,0 , 3,0 ), затем инкубируется в течение 1 ч при 37 С. Потом готовится низиновый маточный раствор и ряд его растворов, разведенных в 0,1 альбумине бычьей сывороткидалее берется по 5 от каждого раствора и помещается на газон с растущими бактериями. Пластинки (возможен вариант перевода чашки. Прим. перев.) сзатем инкубируются в течение 24 ч при 37 С. После 24 ч при 37 С., выращенные нас добавлением цитрата, формируют сливающийся газон. Активность низина в отношении бактерий, выращенных в присутствии цитрата, демонстрируется чистыми зонами на бактериальном газоне,где был расположен ряд разведенных низиновых проб. Эффективность низина в отношении грамотрицательных бактерий может быть оценена путем определения минимального количества низина, необходимого для продуцирования частой зоны торможения роста. По мере увеличения концентрации цитрата в питательном агаре уменьшается количество низина, требуемого для торможения роста ., как это подтверждается данными, представленными в табл. 6. Таблица 6 Активность низина в отношении Е., выращенных на питательном агаре в присутствии цитратацитрата 1 низина, / 0 3 333 0,1 370 0,3 123 1,0 13,7 3,0 0,06 1- номинальная ингибиторная концентрация низина, минимально необходимого для предотвращения роста . штамма АТС 8739, выращенных на триптиказовом соевом агаре с добавлением различных концентраций цитрата, как это обозначено выше. Активность низина, усиленного посредством ЭДТК, цитрата или других хелаторов также была продемонстрирована в отношении нескольких штаммов, а также других родственных видов, в частности, методом анализа бактерицидной суспензии. Примеры представлены в табл. 7-13. Свежевыращенные клетки, выращенные на пластинке с питательным агаром (триптиказовый соевый агар,11043, с добавлением 5 дефибринированной овечьей крови) были собраны с последующим выращиванием при 37 С в течение 72-96 ч в камере системы Гаспакс оболочками микроаэрофильной системыКампи ПакТМ, при этом применялся кампилобактерный микроаэрофильный газовый генератор ( 71034). Эти клетки затем были ресуспендированы в стерильной деионизированной дистиллированной воде до клеточной плотности 1,0 А 600 для того, чтобы обеспечить исходную суспензию. Анализ начинался с добавления 50 бактериальной суспензии и 950 испытываемого раствора,инкубированного при 37 С в течение 5 мин, а затем центрифугированного в течение одной минуты в микрофуге. Клеточный осадок вымывался ресуспендированием в 1 стерильного нейтрализационного буфера,описываемого ранее, и центрифугировался в течение одной минуты в микрофуге. Клетки затем ресуспендировались в бульоне -и последовательно также разбавлялись перед посевом на питательный агар. Количество жизнеспособных микроорганизмов определялось путем распластывания 100 бактериальной суспензии и ее разведении на питательный агар, описанный выше, и путем подсчитывания выживающих колоний после 72-96 ч инкубации при 37 С при умеренной атмосфере, описанной ранее. Процентное выживание относительно необработанных стандартов исчислялось, исходя из подсчитанных величин. Концентрационная зависимость активности низина в отношениив присутствии и отсутствии 0,1 нитрата при рН 5,0 проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 7. Несмотря на то что . является грамотрицательной бактерией, низин, считающийся активным только в отношении грампозитивных бактерий, неожиданно проявляет некоторую бактерицидную активность в отношении этого организма. Однако активность низина в отношении . значительно усилена присутствием цитрата. Концентрационная зависимость активности низина в отношении . от цитрата, при рН 5,0 и рН 7,0 проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 8. В общем, цитрат сам по себе мало влияет на жизнеспособность этого бактериального вида при рН 5,0, тем не менее при рН 7,0 жизнеспособность этого организма несколько снижается при более высоких концентрациях цитрата. Влияние, оказываемое одним цитратом, само по себе удивительно, так как цитрат является метаболитом. Усиленная активность, свойственная низину в присутствии цитрата, является достаточной для того, чтобы полностью убить 105 / суспензию . в течение 5 мин при 37 С. Данные, представленные в табл. 9, показывают, что активность низина в отношении . при рН 5,0 и рН 7,0 также значительно усиливается в присутствии хелатора ЭДТК. Этот хелатор сам по себе не оказывает большого влияния на жизнеспособность этих организмов, если не иметь в виду более высокие концен 6 4174 1 трации. Однако активности, свойственной низину с усилением посредством ЭДТК, вполне достаточно для уничтожения 10 5 / суспензии . в течение 5 мин при 37 С. Бактерицидная активность низина в отношении . в присутствии или отсутствии цитрата или ЭДТК в диапазоне значений рН проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 10 и табл. 11, соответственно. Несмотря на факт изоляции . по отношению к желудку, полость которого является кислотной, жизнеспособность этого организма оказывается удивительно низкой после подвергания его воздействию условий с низким рН. . колонизирует мукозальный эпителий желудка, менее кислотную микросреду, чем та, которой является желудочная полость. Несмотря на ограниченную жизнеспособность . при низком рН в этих экспериментах, данные показывают, что низин с цитратом или ЭДТК может быть бактериальным в отношении . при условиях,подобных тем, которые преобладают в желудке и его мукозальном эпителии, где . способна буйно разрастаться.является грамотрицательной бактерией, которая колонизирует кишечник птиц и млекопитающихся и имеет связь с пищевым отравлением. Бактерицидная активность низина в присутствии и отсутствии цитрата или ЭДТК в отношении С. проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 12 и табл. 13, соответственно. Низин сам по себе чрезвычайно эффективен в отношении этой грамотрицательной бактерии. При рН 5,0 более высокие концентрации цитрата также показали свою токсичность в отношении этой бактерии. Таким образом, соединения низина с цитратом или ЭДТК могут быть эффективными в отношении С., как это проиллюстрировано на примере данных в табл. 12 и 13. Таблица 7 Бактерицидная активность низина в отношении. Активность в отношении низиновых концентраций Штамм АТСС АТСС 43579 а- исходное количество жизнеспособных организмов 3,19 х 107 /. Таблица 8 Бактерицидная активность низина в отношении. Активность в отношении цитрата при рН 5,0 и рН 7,0 Штамм АТСС- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 1,04 х 104 /. с- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 1,40 х 105 /.- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 3,26 х 105 /.- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 1,24 х 105 /.- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 9,62 х 104 /. 4174 1 Таблица 9 Бактерицидная активность низина в отношении. Активность в отношении ЭДТК при рН 5,0 и рН 7,0 Штамм АТСС- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 2,04 х 105 /. с- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 3,40 х 104 /. Бактерицидная активность низина в отношении. Зависимость в отношении цитрата в диапазоне рН от 2,5 до 5,0 Цитрат,Низин Величина рН- инкубации в течение 5 мин при 37 С в цитрате, соответствующем рН или ацетате 20 , рН 5,0.- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 1,85 х 106 /. с- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 2,7 х 105 /.- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 3,7 х 104 /. 4174 1 Таблица 11 Бактерицидная активность низина в отношении. Активность в отношении ЭДТК в диапазоне рН от 2,5 до 5,0 Штамм АТСС- инкубации в течение 5 мин при 37 С в цитрате, соответствующем рН или ацетате 20 , рН 5,0.- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 8,6 х 104 /. с- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 9,82 х 105 /. Таблица 12 Бактерицидная активность низина в отношенииАТСС 29428. Зависимость в отношении цитрата при рН 5,0 (штамм АТСС 29428) Низин, / 0 0 100 а- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 1,57 х 105 /. Таблица 13 Бактерицидная активность низина в отношенииАТСС 29428 Зависимость в отношении ЭДТК при рН 5,0 (штамм АТСС 29428) М ЭДТК рН 5,0 Низин, / 0 1,0 10 100 Выживаемость вн 5 мина 0 100 56,5 76,1 76,1 100 5,0 х 10-4 5,0 х 10-4 5,0 х 10-4 5,0 х 10-4 а- исходное количество жизнеспособных микроорганизмов 1,84 х 106 /. Активность низина, усиленная посредством ЭДТК, цитрата или других хелаторов может быть также наглядно показана в отношении видовпутем анализов бактерицидной суспензии. Свежевыращенные клетки . берутся с пластинки питательного агара (триптиказовый соевый агар 11043) после выращивания в течение 24 ч при 37 С. Клетки ресуспендируются до клеточной плотности 1,0 А 600 для обеспечения подходящей исходной суспензии. Анализ начинается с добавления 30 бактериальной суспензии к 970 контрольного раствора и инкубирования в течение, по крайней мере, одной минуты, а затем центрифугирования в течение одной минуты в микрофуге. Клеточный осадок вымывается посредством ресуспензий 1 стерильного нейтрализационного буфера, снова ресуспендируется, а затем последовательно разбавляется в нейтрализационном буфере. Количество жизнеспособных микроорганизмов определяется распластыванием 100 бактериальной суспензии и ее разведений на питательный агар и подсчитыванием 4174 1 выживающих колоний после 24 ч инкубации при 37 С. Процентная выживаемость относительно необработанных стандартов исчисляется, исходя из подсчитанных величин. Бактериоциновые соединения данного изобретения, активные при низком рН, предпочтительно вводятся орально в виде фармацевтического препарата, который содержит эффективное количество лантионинсодержащего бактериоцина и фармацевтически приемлемый носитель. Носитель может также включать в себя эффективное количество хелатора и/или кислотного носителя, и/или поверхностно-активного вещества, или эмульгатора, моноглицерида или жирной кислоты. Лантионинсодержащий бактериоцин может быть выбран из группы, состоящей из низина, субтилина, эпидермина, пеп 5, анковенина, галлидермина, дуромицина или циннамицина. Соответствующие хелирующие агенты включают в себя (но не ограничиваются этим) ЭДТК,СаЭДТК, Саа 2 ЭДТК и другие тетрацетаты алкилдиамина, а также цитрат. В отдельных случаях хелатор и кислотный носитель могут быть одним и тем же, например тогда, когда кислотный носитель и хелатор оба представляют собой цитрат. Подходящими кислотными носителями для применения в этом изобретении являются ацетат, пропионат, цитрат, лактат, сукцинат, фумарат, малонат, адипат, сорбат, фосфат и аскорбат. Соединения данного изобретения также эффективны при слегка кислотных уровнях рН (например, рН 5,0) и даже более высоких уровнях рН (например, рН 8,0) против патогенных бактерий, которые могут обитать в желудочно-кишечном тракте, такие как . и ., как это указывается в выданном патенте США 5.135.910. Раскрытие патента США 5.135.910 настоящим инкорпорируется ссылкой на совместную собственность. Фармацевтические соединения этого изобретения могут, таким образом, также формулироваться как антацидные соединения или вводиться в соединения с антацидом, результатом чего, например, явится повышение рН желудочной среды по сравнению с тем, что имело бы место до введения. При таких условиях низиновые хелаторные соединения окажутся еще более эффективными в отношении патогенных бактерий. Фармацевтически приемлемый носитель может быть в виде твердого, полутвердого или жидкого растворителя или капсулы. В определенных вариантах осуществления изобретения кислотный носитель и фармацевтический носитель могут быть одним и тем же. Другими фармацевтически приемлемыми носителями могут быть производные целлюлозы, желатин, лактоза, крахмал и др. Фармацевтические соединения могут быть в виде растворов, коллоидов или эмульсий, порошков, таблеток, капсул или гелей. Сухие виды соединений, активные при низком рН, могут быть спрессованы в таблетки, которые могут иметь оболочки из концентрированного раствора сахара и которые могут содержать другие фармацевтически приемлемые заместители, такие как гуммиарабик, желатин, тальк или двуокись титана и могут быть также покрыты различными красителями. Можно изготовить твердые желатиновые капсулы, содержащие гранулы бактериоцина, кислотный носитель и хелирующий агент в комбинации с твердым носителем, таким как лактоза, картофельный крахмал, кукурузный крахмал, производные целлюлозы или желатин. Жидкие препараты для орального введения могут быть изготовлены в виде сиропов или суспензий, содержащих пептидный бактериоцин, хелируюший агент, кислотный носитель и сахар, воду и глицерин или пропиленгликоль. При желании такие жидкие препараты могут содержать красители, вкусовые вещества,сластители, такие как сахарин, и сгустители, такие как производные целлюлозы. Доставка дозированной формы может быть достигнута, по всей видимости, усовершенствованием простых водных составов путем включения сгустителей, эмульгаторов или партикулята для достижения эффекта коллоидной суспензии. Альтернативно могут вводиться осмотически сбалансированные растворы, содержащие подходящие дозы в таких малых объемах, как 10 , или таких больших объемах, как 4 л. Осмотически сбалансированные растворы, подобные этим, могли бы быть применимы в качестве промывочной жидкости желудочно-кишечного тракта (Ди Палма, Дж. А. и Брейди К.Э., 1989, американский журнал Гастроэнтерология 841008. Очищение ободочной кишки для диагностических и хирургических процедур полиэтиленгликолевый промывочный раствор Ди Палма, Дж. А. и Маршал, Дж.Б., 1990, Желудочно-кишечная эндоскопия 1990, 36285, Сравнивание нового бессульфатного полиэтиленгликолевого электролитного промывочного раствора со стандартным раствором для колоноскопического промывания Фордтран, Дж.С. и др., 1990, Гастроэнтерология 9811. Раствор с низким содержанием соды для желудочно-кишечного промывания). Можно надеяться, что путем включения описанных здесь бактерицидных соединений возможно создание улучшенных промывочных растворов для очищения желудочно-кишечного тракта. Типичная дневная доза предложенных композиций может варьироваться в соответствии с обрабатываемой патогенномикроорганической инфекцией, расположением инфекции и симптомами излечиваемой болезни. В общем, можно полагать, что оральные дозировки можно варьировать от 0,1 на дозу до 300 на дозу лантионинсодержащего бактериоцинового вещества и от 0,1 на дозу до 30 на дозу хелатора. Например, так как объем желудочного содержимого варьирует как функция времени, прошедшего после последнего приема пищи, простые водные составы, пригодные для желудочно-кишечного применения, могут быть приготовлены следующим образом. 4174 1 Для получения конечной концентрации в желудке при 0,1 цитрата 0,001 низина (10 /), помещенных в 10 и составляющих, приблизительно, 100 в желудке. Дозировка 1 1,0 низина и 0,1 цитрата цитрат низин сахарин полисорбат 20 глицерин вода Для получения конечной концентрации в желудке при 3,0 цитрата 0,03 низина (300 /), помещенных в 10 и составляющих 100 в желудке. Дозировка 2 30 низина и 3,0 цитрата цитрат низин сахарин полисорбат 20 глицерин вода Для получения конечной концентрации в желудке при 0,1 цитрата 0,001 низина (10 /), помещенных в 10 и составляющих 1000 в желудке. Дозировка 3 10 низина и 1,0 цитрата цитрат 10,0 низин 0,1 сахарин 0,005 полисорбат 20 1,0 глицерин 10,0 вода 78,895 . Для получения конечной концентрации в желудке при 3,0 цитрата 0,03 низина (300 /), помещенных в 100 и составляющих 1000 в желудке. Дозировка 4 300 низина и 30 цитратацитрат 30,0 низин 0,3 сахарин 0,005 полисорбат 20 1,0 глицерин 10,0 вода 58,695 . Для получения конечной концентрации в желудке при 3,0 цитрата 0,03 низина (300 /), помещенных в 100 и составляющих 100 в желудке. Дозировка 5 60 низина и 6,0 цитрата цитрат 6,0 низин 0,06 сахарин 0,005 полисорбат 20 1,0 глицерин 10,0 вода 82,935 . Предполагается также, что в зависимости от типа патогенного микроорганизма и лечимой болезни в режим лечения могут включаться иные препараты и фармацевтические агенты или как часть вводимой фармацевтической композиции, или в режимах лечения, которые объединяют как бактериоциновое соединение,активное при низком рН, так и другой препарат, эффективный в лечении желудочно-кишечного тракта. Например, в лечении диареи, которая может возникнуть путем заражения патогенным микроорганизмом, таким как один из видов , бактериоциновое соединение, активное при низком рН, может вводиться в фармацевтический препарат, который также содержит каолин, пектин или другой связующий агент. Такие симптомы могут также излечиваться совместным введением бактериоциновой композиции и связующего агента, кроме того, при таких режимах лечения могут применяться антацидные составы, и, как предполагается, антацид не будет влиять на активность низиново-хелаторной композиции. При обработке инфекции патогенного микроорганизмабактериоциновое соединение,активное при низком рН, может вводиться в соединении с другим веществом, фармацевтически активным в отношении ., таким как соль висмута, например субцитрат или субсалицилат висмута. Предполагаемые соединения могут вводиться в соединении с другими агентами, такими как циметидин, ранитидин,11 4174 1 омепразол, антациды, ингибиторы уреазы или их комбинации, для лечения некоторых болезней и симптомов, связанных с присутствием . в желудочно-кишечном тракте. Предполагается, что в этих направлениях терапии активные фармацевтические агенты могут вводиться одновременно или вперемежку с предполагаемыми фармацевтическими соединениями, а режим введения по необходимости может варьироваться во время курса лечения.. изолируется от дентальной плакии, которая может служить источником рецидива инфекции желудка (Деза, Х.Г., Гилл, Х.Х., Шанкаран, К., Мехта, П.Р. и Прабха, С.Р. (1991) Дентальная плакия постоянный источникСкандинавский журнал Гастроэнтерология, 261205 и Шеймз, Б., Крайден, С., Фукаса, М., Бабида, К. и Пеннер, Дж.Л. (1989) Доказательство случаев возникновения одного и того же штаммав желудке и дентальной плакии. Журнал Клиническая микробиология, 272849). Следовательно, можно предвидеть, что бактериоциновые соединения, пригодные для применения против Н. в дентальной плакии могут быть применимы вместе с бактериоциновыми соединениями, активными при низком рН в отношении Н. в желудочно-кишечном тракте. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 12

МПК / Метки

МПК: A61K 47/00, A61K 38/00

Метки: композиция, бактерицидная, фармацевтическая, способ, лечения

Код ссылки

<a href="http://bypatents.com/12-4174-baktericidnaya-farmacevticheskaya-kompoziciya-sposob-lecheniya.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Бактерицидная фармацевтическая композиция, способ лечения</a>

Похожие патенты